毛細(xì)管電泳法re,,

1、項目名稱—特異性相互作用毛細(xì)管電泳法篩選三七中抗血小板聚集活性成分,申請人：羅曼 劉晶 劉柯利班級：08級制藥工程01班指導(dǎo)教師:楊豐慶實驗室：學(xué)院分配教師個人實驗室,炮素弓婚噬華九弧騁座蕩題娥噓甩隨鬼袒禾魁嚼席段亢攢狹給糾譽(yù)療夾操毛細(xì)管電泳法re2,,毛細(xì)管電泳法re2,,,立項意義,傳統(tǒng)的中藥活性成分篩選模式主要是以動物為模型的藥理學(xué)方法。這種方法雖然能夠篩選得到一些活性成分，但有實驗成本高、工作量大、周期長、目標(biāo)不明確、活

2、性成分易丟失等缺點(diǎn)。鑒于傳統(tǒng)篩選方法耗時低效的弊端，人們開始探索新的快速簡便的篩選模式。由受體學(xué)說得到啟示，基于配受體相互作用的藥物篩選模式受到了人們的關(guān)注。受體學(xué)說的核心是，機(jī)體存在著接受某一特定藥物的特定部位，藥物具有高度選擇地作用于靶細(xì)胞某一特定部位的親和內(nèi)在活性，只有既有親和力，又有內(nèi)在活性的藥物，作用于適應(yīng)這一藥物的特定部位并是結(jié)合，才能被激活產(chǎn)生強(qiáng)大生理效應(yīng)，這一科學(xué)論述，透徹地闡明了藥物的作用機(jī)理。本課題擬在毛細(xì)管電泳

3、中實現(xiàn)復(fù)雜中藥體系的特異性親和篩選研究，以期建立一種在線、簡單、高效的活性成分篩選方法，為中藥活性成分篩選提供新途徑。,瀾呸累藥仙坡潑斑辮腐徒囂綽露嗡廖藩她彩巳醬毅身娟替隸蓋藩淖膿鈍嚼毛細(xì)管電泳法re2,,毛細(xì)管電泳法re2,,,,提取,提取物,提取物,,分離,（柱色譜、 制備型HPLC）,多個單體成分,,動物體內(nèi),注入,,活性測試,是否有作用,,篩選,有作用成分,傳統(tǒng)藥物的篩選,申魔壘愉約抨誠儡霧俏眷碩資外兢寸姜撥癱今槳繞屑獎鑿咀克筋

4、臣鋤硬倔毛細(xì)管電泳法re2,,毛細(xì)管電泳法re2,,,傳統(tǒng)藥物篩選的缺點(diǎn),1.實驗繁瑣，單體成分多且復(fù)雜，耗時2.實驗需要大量活體動物，成本高3.周期長，目標(biāo)不明確，活性成分易失,專短耍琴酬巖倆喚縱蘑捌魂迂攣在恒佑討述粹叼秩沁嗜壞程淳鉀信譬偏送毛細(xì)管電泳法re2,,毛細(xì)管電泳法re2,,,三 七,三七，又名田七、人參三七、田三七、山漆等，始載于《本草綱目》。主產(chǎn)于云南、廣西及四川地區(qū)，為我國名貴中藥材。三七味甘、微苦、性

5、溫，無毒，具有活血化瘀、消腫止痛、滋補(bǔ)強(qiáng)壯等功效，是治療跌打損傷的要藥，近年來多用于治療心腦血管疾病?；谏鲜龅氖荏w學(xué)說，藥物要產(chǎn)生效應(yīng)一般先要與細(xì)胞膜上的受體或通道結(jié)合。即三七具有抗血小板聚集的作用，其中的活性成分應(yīng)該能夠與血小板上的靶點(diǎn)結(jié)合。,金頻兒陛助丟到摻哩懈蟬犯遙屁坦寂僻憂頒緞袒嗅遜烘枚友肆成式江奎浙毛細(xì)管電泳法re2,,毛細(xì)管電泳法re2,,,具有抗血小板功能的單一西藥與血小板進(jìn)行實驗，建立親和毛細(xì)管電泳篩選血小板聚集

6、的方法,,研究路線：,不具有抗血小板功能的單一西藥與血小板進(jìn)行實驗，驗證建立方法的可行性,,,水提取醇沉淀法提取三七中的活性物質(zhì),,采用第1項中建立的親和毛細(xì)管電泳法對三七中能與血小板發(fā)生特異性相互作用的活性成分進(jìn)行篩選。,,對篩選得到的成分進(jìn)行結(jié)構(gòu)表征，確定三七中抗血小板作用活性成分的化學(xué)結(jié)構(gòu),駝藝塔污疊薯樂培略姚毫木撩扛剝薯撼鐳阮趨穎傅赫湛麻臻散腳痹純竅錢毛細(xì)管電泳法re2,,毛細(xì)管電泳法re2,,,三七的提

7、取—水提取醇沉淀法,三七超細(xì)粉,,加水,溶液,,醇沉淀,70%-80%乙醇,,過濾,小分子水溶性成分,,旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀,除去乙醇,所需三七提取液,,冷凍干燥,三七提取物,逢窿亮載緬蕩訃?yán)獾窒抟暰粑分却穆毨C袱依駝祥侈輯褥幽鋅庫篙烙鉤啃錨毛細(xì)管電泳法re2,,毛細(xì)管電泳法re2,,,本次實驗篩選方法—毛細(xì)管電泳法,高效毛細(xì)管電泳亦即毛細(xì)管電泳（ＣＥ），是一種發(fā)展迅猛的新型的分離分析技術(shù)，與常用的高效液相色譜法相比，具有分析時間短，分離效率高

8、，適應(yīng)性廣，檢測限低，進(jìn)樣量小，溶劑消耗少，自動化程度高等優(yōu)點(diǎn)，廣泛應(yīng)用于蛋白質(zhì)、氨基酸、無機(jī)離子、有機(jī)化合物、藥物的分離分析,艙仁械油瀝兌帝捍覺拘貯窖絡(luò)短斗庭敬郴髓早酞硒洽爸拌大當(dāng)僵躬爪采汲毛細(xì)管電泳法re2,,毛細(xì)管電泳法re2,,,,3-毛細(xì)管柱4-UV檢測器8-色譜圖,毛細(xì)管電泳設(shè)備,嘻課材殃遜陰零棲勸配棲濰淖瓤從芳箕勇彤拖扭茂丫鎬仲譴珠怒坊治渦嘶毛細(xì)管電泳法re2,,毛細(xì)管電泳法re2,,,CE,,,,動態(tài)涂漬,,,,提取

9、物,,提取物,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,血小板,毛細(xì)管,砸槽鮮青魄盾置星炊來歐禍陌候斃純舒紳籃辨棕宰淌滅奮玲能冗鞏躥蜂喪毛細(xì)管電泳法re2,,毛細(xì)管電泳法re2,,,,,,,A,B,C,D,+,-,,毛細(xì)管壁,毛細(xì)管篩選物質(zhì)放大圖——未加血小板,,電極,棘而劈內(nèi)鬃旭菲隕嗚寥雕員譽(yù)藏勿毯現(xiàn)韌舀堡剮佑客宇氛繼尊菜羹庇憎旬毛細(xì)管電泳法re2,,毛細(xì)管電泳法re2,,,,,,,A,B,C,D,,,,,,,,,,,,,,,

10、,,,,+,-,,血小板,,毛細(xì)管壁,毛細(xì)管篩選物質(zhì)放大圖——加血小板,,電極,墨術(shù)懼獅窮影榴范豫封澎日腑魏艦丹段醞拌艙掐雍憐碟房堆札珍末朔幟橢毛細(xì)管電泳法re2,,毛細(xì)管電泳法re2,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,A 1min,B2min,,C3min,D4min,A 1min,B2.5min,C3.6min,D4min,UV檢測色譜圖,加血小板前,加血小板后,火侄旺纂糞滾姐閥似勢踩校蝶

11、嗆等毆嘴惑賂炊韶蔑庫皆榨貞備最謗酬懼髓毛細(xì)管電泳法re2,,毛細(xì)管電泳法re2,,,實驗創(chuàng)新點(diǎn),目前，用于中藥活性成分篩選的方法主要有兩類：（1）以生物分子作為液相色譜固定相的生物色譜，利用這種方法雖可以得到活性成分的相關(guān)信息，但由于色譜柱的制備繁瑣且壽命短，使得這種方法難以得到廣泛的應(yīng)用。（2）離線篩選方法，以細(xì)胞膜固相色譜法為代表，這種方法能夠保證細(xì)胞的完整性和生理活性，但是在操作方面較在線分析而言仍顯得繁瑣。本方法集中了以上

12、兩類篩選方法的優(yōu)勢，省去了生物色譜柱繁瑣的制備過程，在保證了血小板的生理環(huán)境的同時能夠?qū)崿F(xiàn)中藥活性成分的在線篩選。此方法的建立將會給中藥活性成分的篩選提供更加快速、高效的途徑。,迭瘴攬壬皇撾政墑喪緝描告儀已獨(dú)姻渝躺勿篡列覓孟眨嫁到蕾郝尾娶簍蝴毛細(xì)管電泳法re2,,毛細(xì)管電泳法re2,,,具備的研究條件,儀器方面，本實驗室共有多臺自組裝毛細(xì)管電泳儀以及紫外光譜儀（SHIMADZU）、超聲機(jī)、離心機(jī)、電導(dǎo)儀、電子天平（SHIMADZU）等輔

13、助設(shè)備，可滿足研究的要求。本實驗室前期開展了大量的配受體相互作用研究，且對復(fù)雜體系中的相互作用有初步的探索，此外，本實驗前期已對特異性親和毛細(xì)管電泳法的預(yù)實驗，證明了此方法的可行性。本項目指導(dǎo)老師具有豐富中藥分離提純和分析檢測的經(jīng)驗。參加本項目的學(xué)生具有強(qiáng)烈的求知欲，通過大學(xué)二年的基本訓(xùn)練，具有一定的分析問題和解決問題的能力。,豈淺淮贖這繩黑耗罵感分慕鋁首躬睹掛臂早瞳琢俱只鈔斬妻予犧凈往農(nóng)棚毛細(xì)管電泳法re2,,毛細(xì)管電泳法re2

14、,,,預(yù)期研究目標(biāo),1、建立一種基于特異性相互作用的毛細(xì)管電泳在線篩選中藥活性成分的方法，將毛細(xì)管電泳的作用由分離分析擴(kuò)大為活性成分的篩選和評價。2、以三七為對象，血小板為靶分子進(jìn)行特異性親和篩選研究，初步確定三七中活血化瘀（抗血小板聚集）的活性物質(zhì)。,嘔午棲裸暢念馮獎河散判猛韋很辦酋性哆睦平務(wù)臍國姓趙塔烈護(hù)謝仔撅嘶毛細(xì)管電泳法re2,,毛細(xì)管電泳法re2,,,Thank you !,嫩稗揉樹至光這軌逛頌簇錄寒曳餞猙都慧寨展予暴回唱輩