毛細(xì)管電泳預(yù)富集及二維毛細(xì)管電泳分離初步研究.pdf

1、本論文詳細(xì)綜述了毛細(xì)管電泳的發(fā)展歷史和研究現(xiàn)狀，認(rèn)識(shí)到毛細(xì)管電泳雖然具有分離效率高、分析速度快等優(yōu)點(diǎn)，但也存在毛細(xì)管的負(fù)載能力小、紫外檢測(cè)的靈敏度較差等問題。采用在線預(yù)富集方法可以克服毛細(xì)管電泳的缺限。論文深入研究了多種預(yù)富集方法，取得了較好的效果；同時(shí)一維毛細(xì)管電泳由于分辨率和峰容量較低，難以滿足復(fù)雜樣品的分離要求，論文對(duì)二維毛細(xì)管電泳分離復(fù)雜蛋白質(zhì)的研究進(jìn)行了初步探索，主要內(nèi)容包括： 1.研究了毛細(xì)管電泳間接紫外檢測(cè)分離測(cè)定

2、煙草中的六種無機(jī)陰離子，考察了分離電壓、表面活性劑的種類及濃度、背景電解質(zhì)的種類及濃度、pH等因素對(duì)陰離子分離的影響。發(fā)現(xiàn)背景電解質(zhì)對(duì)無機(jī)陰離子的分離有較大影響，并詳細(xì)研究了其原理。在選定的實(shí)驗(yàn)條件下，測(cè)定了Cl-、NO2-、NO3-、SO42-、F-、HPO42-等離子，檢出限為0.2～0.8mg/L，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)為1.9～4.7％，并通過加標(biāo)回收實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證了方法的可行性。 2.研究了一種在柱順序富集方法—陰離子選擇性

3、耗盡進(jìn)樣(ASEI)-堿堆積(BS)富集毛細(xì)管電泳分離六種無機(jī)陰離子。用電滲流改性劑十四烷基三甲基溴化銨(TTAB)抑制電滲流，毛細(xì)管內(nèi)壁動(dòng)態(tài)吸附緩沖溶液中的TTAB，電動(dòng)進(jìn)樣之前高差法引入一段水塞，吸附到毛細(xì)管內(nèi)壁上的TTAB溶解到水中，使該段毛細(xì)管的zeta電勢(shì)變負(fù)，向進(jìn)樣端的電滲流增強(qiáng)。電動(dòng)進(jìn)樣時(shí)，樣品中的陰離子快速遷移并堆積在毛細(xì)管內(nèi)水塞和緩沖溶液的界面上，同時(shí)電滲流將水塞排出毛細(xì)管。這種方法可允許樣品池中大部分陰離子進(jìn)入毛細(xì)管

4、內(nèi)并形成很窄的區(qū)帶，同時(shí)避免了樣品水區(qū)帶對(duì)分離的影響。水塞在此起三個(gè)作用：溶解毛細(xì)管內(nèi)壁吸附的TTAB使毛細(xì)管內(nèi)電滲流增大，提供局部高場(chǎng)強(qiáng)和增大進(jìn)樣量。進(jìn)樣之后電動(dòng)引入NaOH，快速遷移的OH-與來自緩沖溶液的Tris+形成低電導(dǎo)區(qū)，進(jìn)一步壓縮樣品區(qū)帶，堿堆積可使進(jìn)樣時(shí)間進(jìn)一步增大。同常規(guī)電動(dòng)進(jìn)樣相比，陰離子選擇性耗盡進(jìn)樣-堿堆積可達(dá)到(0.8～1.3)×105倍的樣品富集。論文對(duì)實(shí)驗(yàn)條件和富集機(jī)理進(jìn)行了研究。用該法測(cè)定了煙草中無機(jī)陰離

5、子，六種無機(jī)陰離子的濃度檢出限低于6ng/L。 3.研究了一種基于離子交換保留歷程的固相萃取方法用于CZE分離之前在線陽離子交換預(yù)富集。整個(gè)裝置包括預(yù)富集毛細(xì)管和分離毛細(xì)管，二者通過一段帶孔的聚四氟乙烯(PTFE)套管和一個(gè)三通接頭連接。預(yù)富集毛細(xì)管內(nèi)壁鍵合羧基陽離子交換基團(tuán)。進(jìn)樣時(shí)分析物陽離子保留在預(yù)富集毛細(xì)管的固定相上，廢液由三通閥流出而不進(jìn)入分離毛細(xì)管。關(guān)閉三通閥后，用2mol/L的氯化銨溶液洗脫被吸附的分析物，進(jìn)行毛細(xì)管

6、區(qū)帶電泳分離。在0.03mL/min的進(jìn)樣速度下，進(jìn)樣10min，可成功富集分離低濃度的待測(cè)物質(zhì)，靈敏度比常規(guī)電動(dòng)進(jìn)樣提高3個(gè)數(shù)量級(jí)。論文詳細(xì)說明了預(yù)富集柱及三通接口的制作。在線富集分離過程包括毛細(xì)管的沖洗、進(jìn)樣吸附、洗脫、區(qū)帶電泳分離。普萘洛爾在線富集后的濃度檢出限為0.32μg/L(進(jìn)樣10min，進(jìn)樣速度為0.03mL/min)，未富集時(shí)濃度檢出限為1.38mg/L(10kV電動(dòng)進(jìn)樣10s)。該方法采用大體積進(jìn)樣濃縮，有效地提高了

7、毛細(xì)管電泳分離-紫外檢測(cè)的分析靈敏度。 4.進(jìn)行了二維毛細(xì)管電泳分離復(fù)雜蛋白質(zhì)的初步探索，詳細(xì)研究了作為第一維分離的毛細(xì)管等電聚焦實(shí)驗(yàn)條件(包括載體兩性電解質(zhì)的濃度、甲基纖維素的濃度、毛細(xì)管長(zhǎng)度、聚焦電壓、緩沖溶液的組成和濃度、pH、四甲基乙二胺和乙二醇的濃度等)對(duì)蛋白質(zhì)分離的影響，以及毛細(xì)管無膠篩分電泳(CNGE)分離蛋白質(zhì)的最佳條件(包括緩沖溶液的濃度、篩分介質(zhì)、添加劑、緩沖溶液的pH、十二烷基硫酸鈉和硼酸的濃度等)。分別用