叉枝藻和海帶提取物對(duì)黃嘌呤氧化酶抑制作用的研究.pdf

1、黃嘌呤氧化酶（EC1.2.3.2，Xanthine Oxidase，縮寫為XOD）是一種復(fù)合黃素酶，它廣泛存在于細(xì)菌、真菌以及哺乳動(dòng)物的組織中，是生物體內(nèi)核酸代謝過程中一種極為重要的酶，它能催化體內(nèi)的黃嘌呤和次黃嘌呤產(chǎn)生尿酸，并產(chǎn)生過氧化物自由基，尿酸濃度過高會(huì)導(dǎo)致高尿酸血癥，引起痛風(fēng)發(fā)作。近年來，黃嘌呤氧化酶抑制劑作為一種極為有效的抗痛風(fēng)藥物受到了國內(nèi)外研究學(xué)者的廣泛關(guān)注。因此，尋找生物來源的天然黃嘌呤氧化酶抑制劑可為以黃嘌呤氧化酶為

2、靶點(diǎn)的抗痛風(fēng)藥物或保健品開發(fā)提供理論依據(jù)。
　　本文對(duì)海帶和叉枝藻兩種常見海藻乙醇提取物的黃嘌呤氧化酶抑制作用進(jìn)行了深入的研究，通過單因素實(shí)驗(yàn)和正交試驗(yàn)優(yōu)化了兩種海藻的提取工藝；酶動(dòng)力學(xué)方法分析了兩種海藻提取物的抑制機(jī)理和抑制作用類型；等毒法測(cè)定了兩種海藻水溶性組分與別嘌呤醇的聯(lián)合抑制作用；本實(shí)驗(yàn)還檢測(cè)了兩種水溶性組分的自由基清除能力并簡單分析了它們的化學(xué)成分。具體研究內(nèi)容和結(jié)果如下：
　　建立了黃嘌呤氧化酶抑制劑的篩選體系

3、，最終確定反應(yīng)體系的測(cè)定波長為294nm，黃嘌呤底物濃度為0.6mmol/L，酶的終濃度為4μg/mL，反應(yīng) pH7.5，反應(yīng)溫度25℃，反應(yīng)時(shí)間1min。
　　本實(shí)驗(yàn)采用超聲波輔助的溶劑提取法對(duì)海帶和叉枝藻中的黃嘌呤氧化酶抑制成分進(jìn)行提取，結(jié)合單因素實(shí)驗(yàn)和正交試驗(yàn)的方法對(duì)浸提工藝進(jìn)行了優(yōu)化：最終確定海帶的最佳浸提條件為：浸提溫度30℃，乙醇濃度50％，超聲時(shí)間15min，浸提溫度4h。叉枝藻的最佳浸提條件為：浸提溫度50℃，浸提

4、時(shí)間4h，超聲波破碎時(shí)間10min，乙醇濃度60%。
　　將兩種海藻的乙醇提取物溶液用乙酸乙酯進(jìn)行分液萃取得到乙酸乙酯組分和水溶性組分。實(shí)驗(yàn)表明，海帶水溶性組分和乙酸乙酯組分的干物質(zhì)得率分別為22.5%和1.23%，組間差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。其IC50分別為0.71mg/m L和2.37mg/mL。選擇抑制活性較強(qiáng)，得率較高的水溶性組分進(jìn)行了動(dòng)力學(xué)分析，該組分對(duì)黃嘌呤氧化酶表現(xiàn)為競爭性可逆抑制作用，抑制動(dòng)力學(xué)常數(shù)Ki

5、=0.086mg/mL。采用等毒法研究海帶水溶性組分與別嘌呤醇的聯(lián)合抑制作用，結(jié)果表明，水溶性組分與別嘌呤醇的聯(lián)合抑制作用為協(xié)同作用。實(shí)驗(yàn)還測(cè)定了海帶水溶性組分的自由基清除能力，結(jié)果表明，海帶水溶性組分對(duì)羥自由基和超氧陰離子都有清除作用。
　　叉枝藻水溶性組分和乙酸乙酯組分的干物質(zhì)得率分別為12.7%和0.30%，組間差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。其IC50分別為0.43mg/mL和0.51mg/mL。選擇抑制活性較強(qiáng)，得率