鄰二氮菲光度法測定鐵-化學與材料科學學院——西

1、鄰二氮菲分光光度法測定微量鐵,基礎化學實驗Ⅳ （儀器分析實驗）,,,化學國家級實驗教學示范中心,Northwest University,,島津1700紫外-可見分光光度計的使用（第一次訓練）紫外可見吸收光譜光譜的制作（第一次訓練）工作曲線法（鞏固訓練）,實驗技能訓練要點,一、實驗目的二、實驗原理三、實驗步驟四、結果處理五、思考題六、實驗延伸,一、實驗目的,,學習確定實驗條件的方法，掌握鄰二氮菲分光光度法測定微量鐵的方法原

2、理。掌握島津-1700紫外-可見分光光度計的使用方法，并了解此儀器的主要構造。,根據朗伯－比耳定律：A=εbc，當入射光波長λ及光程b一定時，在一定濃度范圍內，有色物質的吸光度A與該物質的濃度c成正比。只要繪出以吸光度A為縱坐標，濃度c為橫坐標的標準曲線，測出試液的吸光度，就可以由標準曲線查得對應的濃度值，即未知樣的含量。 用分光光度法測定試樣中的微量鐵，目前一般采用鄰二氮菲法，該法具有高靈敏度、高選擇性，且穩(wěn)定性好，

3、干擾易消除等優(yōu)點。,二、實驗原理,在pH=2～9的溶液中，Fe2+與鄰二氮菲(phen)生成穩(wěn)定的桔紅色配合物Fe(phen)32+：此配合物的lgK穩(wěn)=21.3，摩爾吸光系數ε510 = 1.1×104 L·mol-1·cm-1，而Fe3+能與鄰二氮菲生成3∶1配合物，呈淡藍色，lgK穩(wěn)=14.1。所以在加入顯色劑之前，應用鹽酸羥胺(NH2OH·HCl)將Fe3+還原為Fe2+，其反應式如

4、下：2Fe3++2NH2OH·HCl→2Fe2++N2+H2O+4H++2Cl-測定時控制溶液的酸度為pH≈5較為適宜。用鄰二氮菲可測定試樣中鐵的總量。,儀器：分光光度計(UV1700型) ，50ml容量瓶7個，10ml移液管4支。,三、實驗儀器與試劑,100μg·mL-1鐵標準溶液: 準確稱量0.8634 g NH4Fe(SO)4·12H2O于燒杯中，加入10 mL 濃HCl和少量水，溶解后轉移至1

5、L容量瓶中，以水稀釋至標線，搖勻。用時稀釋至10μg·mL-1。 0.15%鄰二氮菲水溶液，10%鹽酸羥胺溶液（新配），1 mol·L-1乙酸鈉溶液，1 mol·L-1 NaOH溶液，6 mol·L-1 HCl（工業(yè)鹽酸試樣）,試劑,標準溶液的配制按下列表格進行,1.啟動計算機，打開主機電源開關，開啟主機電源，分光光度計進行自檢和初始化。初始化完成后，打開主程序，聯接主機和計算機。

6、2. 在工作界面上選擇測量項目（光譜掃描，光度測量），本實驗選擇光譜掃描，設置測量條件（掃描范圍，測量波長等）。3. 將空白放入測量池中，點擊START掃描空白，點擊ZERO校零。4. 標準曲線的制作。,UV1700基本操作,吸收曲線的繪制和測量波長的選擇： 取上述6號溶液,用1cm比色皿,以試劑空白為參比溶液,設置掃描范圍400---600nm,掃速快速, 點擊開始進行掃描，掃描結束后得吸收曲線，從吸收曲線上選用最大吸收波

7、長為分析波長。,四、實驗步驟,2. 標準曲線的繪制：(1)標準曲線的制作:取1-6號溶液,用1cm比色皿,以試劑空白為參比溶液,在所選波長下測量吸光度。然后以波長c為橫坐標，吸光度A為縱坐標，作圖，得標準曲線曲線。(2)試樣測定: 在相同條件下，測定樣品的吸光度。,1. 以波長為橫坐標，吸光度為縱坐標，繪制吸收曲線，選擇測量的最適宜波長條件。2. 以鐵濃度為橫坐標，吸光度為縱坐標繪制標準曲線。根據試樣的吸光度，從由線性回歸方程求

8、得含量或在工作曲線上查得含量，計算鐵樣品中的含鐵量（以μg/mL表示），計算測量結果的平均值和相對偏差。,五、數據處理,注 意 事 項,1、配置溶液時使用專用移液管，防止公用溶液污染。2、配置溶液時嚴格定容至刻度線。3、測定吸光度時，每改變一個波長，都應該用空溶液校零。,六、思考題,1. 鄰二氮菲分光光度法測定微量鐵時為何要加入鹽酸羥胺溶液？2. 吸收曲線與標準曲線有何區(qū)別？在實際應用中有何意義？3. 透射比與吸光度兩者關系

9、如何？測定條件指哪些？4. 鄰二氮菲與鐵的顯色反應，其主要條件有哪些？5. 加各種試劑的順序能否顛倒？,1、雙波長分光光度法的原理：當吸收光譜重疊的a、b兩組分共存時，若要消除a組分的干擾測定b組分，可在a組分的吸收光譜上選擇兩個吸收度相等的兩波長λ1和λ2，測定混合物的吸光度差值。然后根據ΔA值計算b的含量。雙波長分光光度法的關鍵是正確選擇兩波長λ1、λ2，要求被測組分D在兩波長處的△A足夠大，而干擾組分G和背景在兩波長應有相同