2018年艾滋病檢測點培訓(xùn)

1、HIV實驗室檢測培訓(xùn),2018.7.10,艾滋病基礎(chǔ)知識,---定義 艾滋病（AIDS）：由人類免疫缺陷病毒（HIV）所引 起的一種以輔助性T淋巴細胞（CD4+T淋巴細胞）數(shù)量減少導(dǎo)致免疫功能減退為主要特征的嚴(yán)重傳染性疾病。---來源 20世紀(jì)40-50年代的非洲，HIV病毒可能由猴子體內(nèi)的猿免疫缺陷病毒演變而來,---流行 最早在美國發(fā)現(xiàn) 歐洲 非洲 20世紀(jì)80年代中后

2、期傳播到亞洲---感染的自然發(fā)展過程窗口期 受到HIV感染到可以檢測出艾滋病抗 體的這一段時間 特點：輕微的一過性感冒癥狀 在窗口期內(nèi)檢測不出抗體 感染（HIV-1）2-3周可檢出P24抗原 感染者的血液、精液、陰道分泌物等 體液中，含有大量HIV,,,,無癥狀潛伏期 8-10年

3、 特點：HIV抗體+臨床癥狀出現(xiàn) 平均10年的潛伏期后出現(xiàn)艾滋病病人 臨床癥狀出現(xiàn)后1年發(fā)展為病人死亡 無抗病毒治療情況下，半年到2年的時間，病人死于艾滋病 HIV抗體（-） HIV抗體（+），無癥狀 HIV抗體+

4、 有癥狀 艾滋病 4-8周 8—10年 1年 0.5—2年左右 個體感染艾滋病病毒后的自然發(fā)展過程,,,,,,,,,,,,,,HIV檢測是艾滋病防治的一項重要保證措施,明確

5、HIV感染者（診斷）及早醫(yī)學(xué)干預(yù)合宜的治療指標(biāo)和效果評估疫苗效果考評發(fā)現(xiàn)HIV陰性者做好減少危險（不安全性行為和藥癮者）的咨詢開展VCT的基礎(chǔ)流行病學(xué)監(jiān)測和專題研究公共衛(wèi)生規(guī)劃（政策形成、保險、控制等）職業(yè)保護,達到保證措施的必要條件,貫徹有關(guān)HIV檢測的法規(guī)（實驗室網(wǎng)絡(luò)、人員、儀器設(shè)備、房屋等條件）有效的檢測方法和檢測試劑常規(guī)質(zhì)量控制和質(zhì)量保證,艾滋病檢測工作管理文獻,1990. 全國HIV檢測管理規(guī)

6、范（試行）1997.9. 全國艾滋病檢測工作規(guī)范2004.8. 全國艾滋病檢測技術(shù)規(guī)范（試行） ----- “規(guī)范”2003. 全國艾滋病檢測工作管理辦法 ----- “辦法”2004.12全國艾滋病檢測技術(shù)規(guī)范（正式）2009 全國艾滋病檢測技術(shù)規(guī)范（修訂版）,HIV感染的實驗診斷,檢測方法HIV培養(yǎng)，核酸測定，P24抗原檢測，血清抗體測定金標(biāo)準(zhǔn)血清抗體測定，HIV

7、感染后平均25天檢出，待12周時幾乎全檢出HIV抗體檢測兩個階段（篩查和確認(rèn)）三個程序（初篩－復(fù)檢－確認(rèn)）2＋3標(biāo)本（血清，全血，唾液，尿液，濾紙干血）,HIV篩查試劑要求和種類,--- 要求SFDA 注冊批準(zhǔn)中檢所 批批檢合格CDC 臨床評估質(zhì)量優(yōu)良使用 有效

8、期內(nèi) 采供血機構(gòu) 必須使用HIV-1/2,--- 種類 酶聯(lián)免疫試劑（EIA） 顆粒凝集試劑（PA） 其它快速試劑（RT）,檢測注意事項,--- HIV抗體檢測工作應(yīng)該按照《全國艾滋病檢測技術(shù)規(guī)范》，在合格的艾滋病檢測實驗室進行--- 為了減少檢測的錯誤和誤差，應(yīng)采取嚴(yán)格的質(zhì)量保證、質(zhì)量控制和質(zhì)量評價措施--- 注意實驗室生物安全防護和職業(yè)暴露預(yù)防--- 嚴(yán)格遵守實驗室標(biāo)準(zhǔn)操作程序（SOP

9、），按照試劑盒說明書操作，注意防止樣品間交叉污染,檢測程序,--- 篩查試驗--- 重復(fù)檢測--- 確認(rèn)試驗,HIV抗體篩查,---職責(zé)經(jīng)省衛(wèi)生行政部門指定驗收專家組，驗收合格的HIV篩查實驗室---方法、試劑酶聯(lián)免疫實驗：第三代雙抗原夾心法試劑（ELISA）快速檢測 明膠顆粒凝聚實驗 斑點ELISA 斑點免疫膠體金 艾滋病唾液檢測卡,采集標(biāo)本,血液標(biāo)本

10、一般采集肘正中靜脈血液3-5ml嬰幼兒可選擇頸外靜脈,采集標(biāo)本,以肘靜脈取血為例。選擇適宜靜脈，在上臂扎上壓脈帶。先用25g/L碘酊棉簽于欲穿刺處皮膚從內(nèi)向外做環(huán)形消毒，待干后再用0.75L/L乙醇棉簽以同樣方式擦去碘跡。,采集標(biāo)本,取無菌注射器，按牢針頭，使針頭斜面與針筒刻度平行，并查看有無阻塞和漏氣。采用一次性注射器還應(yīng)注意包裝是否密封，有無過期，否則不得使用。,采集標(biāo)本,囑病人緊握拳頭，使靜脈顯露。左手拇指固定穿刺部位下端，右手

11、持注射器，使針筒刻度向上，先以約30º角度沿靜脈正面進針，快速穿過皮膚刺入靜脈中央。見回血后，右手固定注射器，用左手緩緩抽出注射器針?biāo)ǎ了柩亢?，解除壓脈帶，放松拳頭，以消毒棉簽壓住穿刺孔，拔出針頭。,采集標(biāo)本,取下針頭，將血液沿管（瓶）壁緩慢注入容器內(nèi)，待血液自行凝固。血塊收縮后，即可分離出血清。如需全血或血漿，則將血液注入事先準(zhǔn)備的抗凝管（瓶）中，輕輕混勻，防止凝固，即為抗凝血。經(jīng)適當(dāng)離心可分離出血漿。血清和血漿的主要

12、差別是，血清中無纖維蛋白原。采樣完畢后應(yīng)同時填寫采樣登記表,標(biāo)本處理,將采集好的血液標(biāo)本放入離心機3000轉(zhuǎn)/分離心5分鐘取出標(biāo)本，用移液器（或一次性滴管）將血清移入血清儲存管中（1.5ml）檢測完畢后將血清儲存管蓋緊，放入冰箱冷凍室保存至少2個月,膠體金快速檢測技術(shù),一、原理,本品采用膠體金免疫層析技術(shù)，在玻璃纖維膜上預(yù)包被金標(biāo)記HIVgp 160和gp3 6抗原，在硝酸纖維膜檢測線和質(zhì)控線上分別包被HIVgp41、gp3 6混

13、合抗原和抗HIVgp41抗體，當(dāng)檢測進行時，樣品中HIV抗體可與金標(biāo)記的HIV抗原結(jié)合形成復(fù)合物，由于層析作用,使復(fù)合物沿試紙條向前移動。若樣品中含有可被檢測的HIV抗體，則與檢測線預(yù)包被的HIV抗原結(jié)合形成“金標(biāo)記HIV抗原-HIV抗體一HIV包被抗原"復(fù)合物凝聚顯色；若樣品中沒有HIV抗體或HIV抗體的含量低于檢測限時，則不形成復(fù)合物而不顯色。,二、試劑盒組成,1. HIV(1／2)抗體膠體金試紙條／板50人份／盒，

14、( 5條)／lO袋。 2. 說明書1份。 3. 稀釋液l份， 4ml／瓶。,三、操作步驟,根據(jù)試劑盒說明書進行操作！一般操作步驟： 1．將密封袋打開，取出所需試紙條／板。 2．樣本檢測：取4 O ul待檢樣本加在試紙條／板的加樣區(qū)，再在近加樣區(qū)上方加1滴稀釋液。 3． 3 0分鐘內(nèi)觀察并記錄試驗結(jié)果。,四、結(jié)果判斷,陽性結(jié)果：在試紙條／板的檢測窗和質(zhì)控窗位置上各出現(xiàn)一條紫

15、紅色條帶。 陰性結(jié)果：僅在試紙條／板的質(zhì)控窗位置上出現(xiàn)一條紫紅色條帶。 無效結(jié)果：在試紙條／板的檢測窗和質(zhì)控窗位置上均未出現(xiàn)紫紅色條帶為試驗無效。,五、實驗結(jié)果判斷示意圖,,六、注意事項,1．被檢樣品、試劑應(yīng)在室溫2 O℃左右平衡30分鐘后檢測。被檢品應(yīng)為新鮮樣品。如發(fā)現(xiàn)試紙條／板密封袋破損則需廢棄。 2．高血脂和高膽紅素樣品對檢測結(jié)果無顯著性影響，但溶血樣品，尤其是大量溶血樣品對檢測結(jié)果有顯著影響。

16、3．當(dāng)質(zhì)控窗與檢測窗上均不出現(xiàn)紫紅色條帶時，應(yīng)重新測試，如果問題仍然存在，應(yīng)立即停止使用此批號產(chǎn)品并與當(dāng)?shù)毓┴浬搪?lián)系。,七、膠體金快速試劑實物,,HIV檢測中的保密的認(rèn)識,HIV檢測前后咨詢中獲得的隱私HIV檢測結(jié)果與專業(yè)人員的討論在各種場合中對受檢者的討論（包括會議）檔案記錄與保存受檢者，家屬，朋友和單位傳報醫(yī)院匿名檢測系統(tǒng)能確保保密，但不利于醫(yī)學(xué)管理,初篩結(jié)果處理,--- 初篩（-） 出具“HIV抗體陰性”報告

17、 初篩（+） 可出具“HIV抗體待復(fù)檢”的報告，但不能出具陽性報告。,重復(fù)檢測,--- 職責(zé) HIV篩查實驗室 或 HIV確認(rèn)實驗室 [篩查實驗室擬作復(fù)檢，加強自我質(zhì)量控制],--- 試劑 選擇：兩種不同原理或廠家 品種： 酶聯(lián)免疫試劑 快速檢

18、測試劑,重復(fù)檢測結(jié)果處理,---復(fù)檢（-）出具“HIV抗體陰性”報告 復(fù)檢（+） 可出具“HIV抗體待復(fù)查”的報告，但不能出具陽性報告。---送確認(rèn) 填寫復(fù)查送樣單，兩人簽字 原樣或新樣連同送樣單送確認(rèn)實驗室,確認(rèn)實驗,--- 職責(zé) 確認(rèn)實驗室---檢測方法 免疫印跡實驗（WB） 線性免疫實驗（LIA） 免疫熒光實驗 （IFA）,確認(rèn)結(jié)果解釋,1.確認(rèn)陰性（-）進行陰性咨詢2.確認(rèn)陽性（+）進行陽