艾滋病實驗室檢測

1、艾滋病實驗室檢測,平羅縣婦幼保健所徐秀琴,HIV抗體檢測實驗室生物安全,二個方面,二、 HIV抗體檢測,《全國艾滋病檢測技術規(guī)范》 引用文件： 《艾滋病和艾滋病病毒感染診斷標準》（中華人民共和國衛(wèi)生行業(yè)標準，WS293-2008）,常規(guī)HIV抗體檢測的方法,HIV抗體檢測分為篩查試驗（包括初篩和復檢）和確證試驗。 篩查試劑 必須是經國家食品藥品監(jiān)督管理局注冊批準、在有效期內的試劑，其中酶聯(lián)免疫試劑應批批檢合格

2、。推薦使用臨床質量評估敏感性和特異性高的試劑。,HIV抗體檢測要求,1. 實驗室:經衛(wèi)生行政部門考核、審評和批準后2. 檢測場所：符合《全國艾滋病檢測工作規(guī)范》的要求；3. 人員: 經國家或省級艾滋病抗體檢測學習班培訓;4. 試劑: 批批檢合格、進口許可證、生物制品檢定所檢定、5. 保密: 初篩檢測的陽性結果不是最終結果,必須經確證試驗由 HIV抗體確證實驗室出具陽性報告才具有法律效應,且須由衛(wèi)生行政部門選擇適當方式和時

3、間通知其本人及其家屬,不得向無關人員透露有關情況,感染者檔案以機密形式專人負責管理;6. 標本: 及時分離血清(漿)、無變質、無污染、無溶血。7. 天氣炎熱、路途較遠時應低溫用帶蓋不易破損容器專人運送， 并詳細填寫送檢單；城區(qū)24小時、農村48小時內送確證實驗室,篩查樣品和方法,樣品：可采用血清、血漿、濾紙干血斑、唾液和尿液樣品。 （人類免疫缺陷病毒抗體口腔黏膜滲出液診斷試劑 ）

4、方法 1.酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA） 2.化學發(fā)光或免疫熒光試驗 3.快速檢測（RT）及其它檢測試驗 這類試驗簡便快速，適用于應急檢測、門診急診檢測。一般可在10～30分鐘內得出結果。 明膠顆粒凝集試驗（PA） 免疫滲濾試驗 免疫層析試驗,

5、酶聯(lián)免疫吸附試驗,酶聯(lián)免疫吸附試驗簡稱酶標法，是根據酶免疫測定原理發(fā)展的一種技術，目前已廣泛用于各種抗原和抗體的檢測，也是最常用的HIV抗體檢測方法。 目前已推出第四代HIV抗體ELISA檢測試劑，但其基本方法分三類：間接法、雙抗原夾心法和抗原競爭法。,快速試劑的應用,偏遠地區(qū)急診臨床（高危）職業(yè)暴露臨產,HIV快速檢測的優(yōu)點,試劑穩(wěn)定，室溫長期存放不需要大型設備操作簡便、迅速、肉眼可讀特異性、功效率基本與ELISA接

6、近適用于應急檢測和個體檢測,HIV快速的局限性,一般不用于血液篩查有一定的假陽性反應窗口期問題（假陰性）（小于3個月）主觀因素,HIV快速檢測的注意事項,有關部門批準有效的試劑從事人員經過培訓，上崗證嚴格按試劑說明書操作有效期使用，正確儲存18-25℃實驗室環(huán)境下操作嚴格按照試劑說明書的時間要求進行判讀結果，不可早判或晚判建立室內（間）質控體系，定期用質控血清對試劑進行檢測，觀察是否顯色，顯色時間，顯色程度。,HI

7、V快速檢測的注意事項,條帶的色深程度與標本中抗體的濃度不存在線性關系陰性結果不排除有HIV感染的可能出現陽性及可疑結果，還應用ELISA法及時復檢并確證判讀結果雙人核對判讀結果的環(huán)境需要光線充足,篩查程序,（1）初篩試驗 根據檢測目的選用符合要求的篩查試劑對樣品進行初篩檢測，對呈陰性反應的樣品，可出具HIV抗體陰性（-）報告；對呈陽性反應的樣品，需要進一步做復檢試驗和確證試驗。（2）復檢試驗 對初篩呈陽性

8、反應的樣品，應使用原有試劑和另外一種不同原理（或廠家）的試劑，或另外兩種不同原理或不同廠家的試劑進行復檢試驗。如果初篩檢測使用抗原抗體聯(lián)合試劑，則復檢必須包括一種抗原抗體聯(lián)合試劑。如兩種試劑復檢均呈陰性反應，則報告HIV抗體陰性（-）；如均呈陽性反應，或一陰一陽，需送艾滋病確證實驗室進行確證試驗（圖1）。如果抗原抗體聯(lián)合試劑檢測呈陽性反應，而抗體試劑檢測為陰性反應，則應考慮進行HIV-1 p24抗原或核酸檢測，必要時進行隨訪。艾滋病檢

9、測篩查實驗室復檢判定為陽性反應的樣品，確證實驗室可以直接進行確證試驗。,,HIV,HIV抗體初篩檢測的局限性,1. 陽性反應樣本不能確證，需用本法和其它方法復檢，如仍為陽性，需確證試劑進一步確證。2. 陰性結果不能排除HIV感染：HIV感染后血清陽轉前的“窗口期”，HIV抗體檢測為陰性，晚期艾滋病患者某些抗體（如P24等）可能檢測不到。3. 可能出現假陽性或假陰性結果：了解試劑供應商因其使用抗原和包被方法技術存在一定差異。4.不能

10、診斷<18月齡新生兒的母嬰垂直感染。,篩查試驗結果的報告,篩查試驗（-） 出具“HIV抗體陰性”報告 篩查試驗（+） 出具“HIV抗體待復查”，不能出陽性報告 篩查試驗呈陽性反應樣品的轉送 如需送上級實驗室進行復檢，需要核對身份，補充個人信息（如姓名和身份證號碼），必要時采集第二份血樣，持HIV抗體篩查報告，送當地艾滋病篩查中心實驗室，或直接送確證實驗室復檢。 兩次檢測均陽性或一陰一陽報告為 “HIV抗體待確證

11、”； 兩次檢測均陰性報告為“HIV抗體陰性（-）”。 HIV抗體復檢報告需由1名檢驗人員和1名審核人員簽字。,初篩檢測中值得注意的幾個問題(1),1、初篩檢測的陽性結果不是最終結論，不能通知受檢者及其他人員，陽性樣本需用該試劑和另一種試劑復檢，如仍為陽性，應及時送HIV抗體確證試驗室用確證試驗檢測；2、初篩檢測的宗旨是要盡可能檢出所有的陽性樣本，因此應選用敏感性高的試劑，且必須為HIV-1/2混合型，使用不符合規(guī)定的試劑可

12、能導致錯誤結果和法律糾紛，甚至造成嚴重后果；3、各單位可根據不同目的、檢測對象、人群流行率、成本-效 益比、實驗室設備、和技術水平等選擇不同初篩實驗方法。,初篩檢測中值得注意的幾個問題(2),4、不同廠家及同一廠家生產的不同批次試劑的敏感性和特異性可能存在一定差異，各實驗室最好應用標準質控血清對新購試劑及在每次檢測時進行質量控制和質量評價，以確保檢測工作結果的準確可靠性；5、針對HIV感染的不同時期選用不同的檢測方法：6、H

13、IV抗體的檢測反應強度與HIV感染的概率： 許多HIV抗體檢測方法既是一種定性實驗，也是一種半定量實驗。ELISA方法可根據OD值的強度確定抗體量的多少。反應性越強的血清，含有HIV抗體的可能性越大。,濾紙干血斑標本（dry blood spot （DBS）on filter paper）,是將采集的新生兒血樣滴在篩查專用濾紙上而制成的圓形均勻斑狀血樣一般專用于新生兒疾病篩查實驗檢測。濾紙片是血液標本采集和運輸的極好載體，

14、應用全血滴在濾紙片上制成濾紙片干血斑，便于儲存和運輸，且有很好的生物穩(wěn)定性，因此，特別適用于發(fā)展中國家邊遠地區(qū)的樣本采集、貯存與運輸。,濾紙干血斑標本 （DBS）的采集,采血對象和采血時機(新生兒生后3天（或48~72小時）進行 )材料和器具采血方法和技巧DBS血斑質量標本收集方法標本保存方法,材料和用具,載血濾紙：S&S903的專用濾紙 采血卡,其他材料,信息卡 穿刺針 采血卡支架 75%酒精和消毒干棉球熱

15、水袋或熱敷用毛巾,采血方法,符合美國臨床實驗室標準化委員會（NCCLS）標準《新生兒篩查計劃》中濾紙血片的采集方法,采血前準備,登記，查對，填卡，洗手，戴口罩 采血部位清潔，保暖，血循環(huán)良好（可用40-42℃熱敷）,采血部位選擇,足跟兩側涂黑處允許采血,穿刺和擠壓,一次性使用穿刺針。進針2~3毫米。拭去最初少許血滴（含碎片）待穿刺點的蒼白區(qū)消褪后，用母、食指和手掌握持足部，適當施壓。,取血,血液順利流出，等血滴夠大時，用載血

16、濾紙的一面輕觸血滴，使血樣吸進濾紙透過背面一次形成直徑約1厘米的血斑共取3個血斑壓迫止血,,等血滴足夠大時用濾紙輕觸血滴,取數個直徑1cm血斑,晾干,室溫水平放置晾干2-3小時避免熱烤、日曬、紫外線照射、福爾馬林或其他有機溶劑熏染、液體污染等,濾紙干血斑標本的送檢,原則：盡快送往→最佳：于標本采集后24小時內送出規(guī)范要求：采集后1周內送達,方法,①掛號信郵寄②人工投送③專收專投系統(tǒng)（綠色通道 ）是目前最先進的遞送

17、技術,HIV檢測實驗室生物安全,生物安全貫穿實驗室活動的始終,實驗室要求樣品的采集、運送、接收、使用、保存、處理檢測操作中的生物安全儀器設備廢棄物處置意外事故的處理   實驗室生物安全管理,個人防護,1.手部皮膚有開放性傷口及其他不適于工作的情況，應暫停工作。2.皮膚的微小傷口、擦傷、皸裂等，應用防水敷料嚴密覆蓋。3.充足的防護服、一次性乳膠手套、口罩、帽子和覆蓋足背的工作鞋。應將清潔的防護

18、服和其他個人防護用品置于實驗室清潔區(qū)內的專用處存放。4.應急沖洗眼睛裝置。（30米）5.工作人員上崗前必須進行HIV抗體和乙型肝炎病毒、丙型肝炎病毒等肝炎病毒標志物檢測，應接種乙肝疫苗。應每年對工作人員采血檢測HIV抗體，血清應長期保留。6 進實驗室工作前要摘除首飾，修剪長的帶刺的指甲，以免刺破手套。7 嚴禁在實驗室內進食、飲水、吸煙和化妝。,個人防護,8 實驗操作時應穿合適防護服（白大衣、隔離衣或一次性工作服）、戴手套和

19、口罩、穿實驗室專用的工作鞋。如接觸物的傳染性大、應戴雙層手套；含有HIV的液體（樣品或病毒培養(yǎng)液）有可能噴濺時，應戴防護眼鏡、穿防水（如塑料）圍裙。工作完畢，先脫去手套，再脫去防護服，用肥皂和流動水洗手。穿過的污染的防護服應及時放入污物袋中，消毒后方可洗滌或廢棄。 操作過程中，如發(fā)現防護服被污染應立即更換，如手套破損，應立即丟棄、洗手并換上新手套。不能用戴手套的手觸摸暴露的皮膚、口唇、眼睛、耳朵和頭發(fā)等。不要將手套清洗或消毒后

20、再次使用，因為使用表面活性劑清洗可使手套對水的通透性增加，消毒劑可以引起手套的破損。9 禁止使用口腔吸液管，必須使用移液器來操作實驗的所有液體。,意外事故處理,1.皮膚針刺傷或切割傷，應立即用肥皂和大量流水沖洗，盡可能擠出損傷處的血液，用70%乙醇或其它消毒劑消毒傷口。2 皮膚污染：用水和肥皂沖洗污染部位，并用適當的消毒劑浸泡，如70%乙醇或其它皮膚消毒劑。3 粘膜污染：用大量流水或生理鹽水沖洗污染部位。4 衣物污染：盡