艾滋病實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)

1、艾滋病實(shí)驗(yàn)室檢測(cè),平羅縣婦幼保健所徐秀琴,HIV抗體檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室生物安全,二個(gè)方面,二、 HIV抗體檢測(cè),《全國(guó)艾滋病檢測(cè)技術(shù)規(guī)范》 引用文件： 《艾滋病和艾滋病病毒感染診斷標(biāo)準(zhǔn)》（中華人民共和國(guó)衛(wèi)生行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)，WS293-2008）,常規(guī)HIV抗體檢測(cè)的方法,HIV抗體檢測(cè)分為篩查試驗(yàn)（包括初篩和復(fù)檢）和確證試驗(yàn)。 篩查試劑 必須是經(jīng)國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理局注冊(cè)批準(zhǔn)、在有效期內(nèi)的試劑，其中酶聯(lián)免疫試劑應(yīng)批批檢合格

2、。推薦使用臨床質(zhì)量評(píng)估敏感性和特異性高的試劑。,HIV抗體檢測(cè)要求,1. 實(shí)驗(yàn)室:經(jīng)衛(wèi)生行政部門(mén)考核、審評(píng)和批準(zhǔn)后2. 檢測(cè)場(chǎng)所：符合《全國(guó)艾滋病檢測(cè)工作規(guī)范》的要求；3. 人員: 經(jīng)國(guó)家或省級(jí)艾滋病抗體檢測(cè)學(xué)習(xí)班培訓(xùn);4. 試劑: 批批檢合格、進(jìn)口許可證、生物制品檢定所檢定、5. 保密: 初篩檢測(cè)的陽(yáng)性結(jié)果不是最終結(jié)果,必須經(jīng)確證試驗(yàn)由 HIV抗體確證實(shí)驗(yàn)室出具陽(yáng)性報(bào)告才具有法律效應(yīng),且須由衛(wèi)生行政部門(mén)選擇適當(dāng)方式和時(shí)

3、間通知其本人及其家屬,不得向無(wú)關(guān)人員透露有關(guān)情況,感染者檔案以機(jī)密形式專(zhuān)人負(fù)責(zé)管理;6. 標(biāo)本: 及時(shí)分離血清(漿)、無(wú)變質(zhì)、無(wú)污染、無(wú)溶血。7. 天氣炎熱、路途較遠(yuǎn)時(shí)應(yīng)低溫用帶蓋不易破損容器專(zhuān)人運(yùn)送， 并詳細(xì)填寫(xiě)送檢單；城區(qū)24小時(shí)、農(nóng)村48小時(shí)內(nèi)送確證實(shí)驗(yàn)室,篩查樣品和方法,樣品：可采用血清、血漿、濾紙干血斑、唾液和尿液樣品。 （人類(lèi)免疫缺陷病毒抗體口腔黏膜滲出液診斷試劑 ）

4、方法 1.酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA） 2.化學(xué)發(fā)光或免疫熒光試驗(yàn) 3.快速檢測(cè)（RT）及其它檢測(cè)試驗(yàn) 這類(lèi)試驗(yàn)簡(jiǎn)便快速，適用于應(yīng)急檢測(cè)、門(mén)診急診檢測(cè)。一般可在10～30分鐘內(nèi)得出結(jié)果。 明膠顆粒凝集試驗(yàn)（PA） 免疫滲濾試驗(yàn) 免疫層析試驗(yàn),

5、酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn),酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)簡(jiǎn)稱(chēng)酶標(biāo)法，是根據(jù)酶免疫測(cè)定原理發(fā)展的一種技術(shù)，目前已廣泛用于各種抗原和抗體的檢測(cè)，也是最常用的HIV抗體檢測(cè)方法。 目前已推出第四代HIV抗體ELISA檢測(cè)試劑，但其基本方法分三類(lèi)：間接法、雙抗原夾心法和抗原競(jìng)爭(zhēng)法。,快速試劑的應(yīng)用,偏遠(yuǎn)地區(qū)急診臨床（高危）職業(yè)暴露臨產(chǎn),HIV快速檢測(cè)的優(yōu)點(diǎn),試劑穩(wěn)定，室溫長(zhǎng)期存放不需要大型設(shè)備操作簡(jiǎn)便、迅速、肉眼可讀特異性、功效率基本與ELISA接

6、近適用于應(yīng)急檢測(cè)和個(gè)體檢測(cè),HIV快速的局限性,一般不用于血液篩查有一定的假陽(yáng)性反應(yīng)窗口期問(wèn)題（假陰性）（小于3個(gè)月）主觀因素,HIV快速檢測(cè)的注意事項(xiàng),有關(guān)部門(mén)批準(zhǔn)有效的試劑從事人員經(jīng)過(guò)培訓(xùn)，上崗證嚴(yán)格按試劑說(shuō)明書(shū)操作有效期使用，正確儲(chǔ)存18-25℃實(shí)驗(yàn)室環(huán)境下操作嚴(yán)格按照試劑說(shuō)明書(shū)的時(shí)間要求進(jìn)行判讀結(jié)果，不可早判或晚判建立室內(nèi)（間）質(zhì)控體系，定期用質(zhì)控血清對(duì)試劑進(jìn)行檢測(cè)，觀察是否顯色，顯色時(shí)間，顯色程度。,HI

7、V快速檢測(cè)的注意事項(xiàng),條帶的色深程度與標(biāo)本中抗體的濃度不存在線性關(guān)系陰性結(jié)果不排除有HIV感染的可能出現(xiàn)陽(yáng)性及可疑結(jié)果，還應(yīng)用ELISA法及時(shí)復(fù)檢并確證判讀結(jié)果雙人核對(duì)判讀結(jié)果的環(huán)境需要光線充足,篩查程序,（1）初篩試驗(yàn) 根據(jù)檢測(cè)目的選用符合要求的篩查試劑對(duì)樣品進(jìn)行初篩檢測(cè)，對(duì)呈陰性反應(yīng)的樣品，可出具HIV抗體陰性（-）報(bào)告；對(duì)呈陽(yáng)性反應(yīng)的樣品，需要進(jìn)一步做復(fù)檢試驗(yàn)和確證試驗(yàn)。（2）復(fù)檢試驗(yàn) 對(duì)初篩呈陽(yáng)性

8、反應(yīng)的樣品，應(yīng)使用原有試劑和另外一種不同原理（或廠家）的試劑，或另外兩種不同原理或不同廠家的試劑進(jìn)行復(fù)檢試驗(yàn)。如果初篩檢測(cè)使用抗原抗體聯(lián)合試劑，則復(fù)檢必須包括一種抗原抗體聯(lián)合試劑。如兩種試劑復(fù)檢均呈陰性反應(yīng)，則報(bào)告HIV抗體陰性（-）；如均呈陽(yáng)性反應(yīng)，或一陰一陽(yáng)，需送艾滋病確證實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行確證試驗(yàn)（圖1）。如果抗原抗體聯(lián)合試劑檢測(cè)呈陽(yáng)性反應(yīng)，而抗體試劑檢測(cè)為陰性反應(yīng)，則應(yīng)考慮進(jìn)行HIV-1 p24抗原或核酸檢測(cè)，必要時(shí)進(jìn)行隨訪。艾滋病檢

9、測(cè)篩查實(shí)驗(yàn)室復(fù)檢判定為陽(yáng)性反應(yīng)的樣品，確證實(shí)驗(yàn)室可以直接進(jìn)行確證試驗(yàn)。,,HIV,HIV抗體初篩檢測(cè)的局限性,1. 陽(yáng)性反應(yīng)樣本不能確證，需用本法和其它方法復(fù)檢，如仍為陽(yáng)性，需確證試劑進(jìn)一步確證。2. 陰性結(jié)果不能排除HIV感染：HIV感染后血清陽(yáng)轉(zhuǎn)前的“窗口期”，HIV抗體檢測(cè)為陰性，晚期艾滋病患者某些抗體（如P24等）可能檢測(cè)不到。3. 可能出現(xiàn)假陽(yáng)性或假陰性結(jié)果：了解試劑供應(yīng)商因其使用抗原和包被方法技術(shù)存在一定差異。4.不能

10、診斷<18月齡新生兒的母嬰垂直感染。,篩查試驗(yàn)結(jié)果的報(bào)告,篩查試驗(yàn)（-） 出具“HIV抗體陰性”報(bào)告 篩查試驗(yàn)（+） 出具“HIV抗體待復(fù)查”，不能出陽(yáng)性報(bào)告 篩查試驗(yàn)呈陽(yáng)性反應(yīng)樣品的轉(zhuǎn)送 如需送上級(jí)實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行復(fù)檢，需要核對(duì)身份，補(bǔ)充個(gè)人信息（如姓名和身份證號(hào)碼），必要時(shí)采集第二份血樣，持HIV抗體篩查報(bào)告，送當(dāng)?shù)匕滩『Y查中心實(shí)驗(yàn)室，或直接送確證實(shí)驗(yàn)室復(fù)檢。 兩次檢測(cè)均陽(yáng)性或一陰一陽(yáng)報(bào)告為 “HIV抗體待確證

11、”； 兩次檢測(cè)均陰性報(bào)告為“HIV抗體陰性（-）”。 HIV抗體復(fù)檢報(bào)告需由1名檢驗(yàn)人員和1名審核人員簽字。,初篩檢測(cè)中值得注意的幾個(gè)問(wèn)題(1),1、初篩檢測(cè)的陽(yáng)性結(jié)果不是最終結(jié)論，不能通知受檢者及其他人員，陽(yáng)性樣本需用該試劑和另一種試劑復(fù)檢，如仍為陽(yáng)性，應(yīng)及時(shí)送HIV抗體確證試驗(yàn)室用確證試驗(yàn)檢測(cè)；2、初篩檢測(cè)的宗旨是要盡可能檢出所有的陽(yáng)性樣本，因此應(yīng)選用敏感性高的試劑，且必須為HIV-1/2混合型，使用不符合規(guī)定的試劑可

12、能導(dǎo)致錯(cuò)誤結(jié)果和法律糾紛，甚至造成嚴(yán)重后果；3、各單位可根據(jù)不同目的、檢測(cè)對(duì)象、人群流行率、成本-效 益比、實(shí)驗(yàn)室設(shè)備、和技術(shù)水平等選擇不同初篩實(shí)驗(yàn)方法。,初篩檢測(cè)中值得注意的幾個(gè)問(wèn)題(2),4、不同廠家及同一廠家生產(chǎn)的不同批次試劑的敏感性和特異性可能存在一定差異，各實(shí)驗(yàn)室最好應(yīng)用標(biāo)準(zhǔn)質(zhì)控血清對(duì)新購(gòu)試劑及在每次檢測(cè)時(shí)進(jìn)行質(zhì)量控制和質(zhì)量評(píng)價(jià)，以確保檢測(cè)工作結(jié)果的準(zhǔn)確可靠性；5、針對(duì)HIV感染的不同時(shí)期選用不同的檢測(cè)方法：6、H

13、IV抗體的檢測(cè)反應(yīng)強(qiáng)度與HIV感染的概率： 許多HIV抗體檢測(cè)方法既是一種定性實(shí)驗(yàn)，也是一種半定量實(shí)驗(yàn)。ELISA方法可根據(jù)OD值的強(qiáng)度確定抗體量的多少。反應(yīng)性越強(qiáng)的血清，含有HIV抗體的可能性越大。,濾紙干血斑標(biāo)本（dry blood spot （DBS）on filter paper）,是將采集的新生兒血樣滴在篩查專(zhuān)用濾紙上而制成的圓形均勻斑狀血樣一般專(zhuān)用于新生兒疾病篩查實(shí)驗(yàn)檢測(cè)。濾紙片是血液標(biāo)本采集和運(yùn)輸?shù)臉O好載體，

14、應(yīng)用全血滴在濾紙片上制成濾紙片干血斑，便于儲(chǔ)存和運(yùn)輸，且有很好的生物穩(wěn)定性，因此，特別適用于發(fā)展中國(guó)家邊遠(yuǎn)地區(qū)的樣本采集、貯存與運(yùn)輸。,濾紙干血斑標(biāo)本 （DBS）的采集,采血對(duì)象和采血時(shí)機(jī)(新生兒生后3天（或48~72小時(shí)）進(jìn)行 )材料和器具采血方法和技巧DBS血斑質(zhì)量標(biāo)本收集方法標(biāo)本保存方法,材料和用具,載血濾紙：S&S903的專(zhuān)用濾紙 采血卡,其他材料,信息卡 穿刺針 采血卡支架 75%酒精和消毒干棉球熱

15、水袋或熱敷用毛巾,采血方法,符合美國(guó)臨床實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)化委員會(huì)（NCCLS）標(biāo)準(zhǔn)《新生兒篩查計(jì)劃》中濾紙血片的采集方法,采血前準(zhǔn)備,登記，查對(duì)，填卡，洗手，戴口罩 采血部位清潔，保暖，血循環(huán)良好（可用40-42℃熱敷）,采血部位選擇,足跟兩側(cè)涂黑處允許采血,穿刺和擠壓,一次性使用穿刺針。進(jìn)針2~3毫米。拭去最初少許血滴（含碎片）待穿刺點(diǎn)的蒼白區(qū)消褪后，用母、食指和手掌握持足部，適當(dāng)施壓。,取血,血液順利流出，等血滴夠大時(shí)，用載血

16、濾紙的一面輕觸血滴，使血樣吸進(jìn)濾紙透過(guò)背面一次形成直徑約1厘米的血斑共取3個(gè)血斑壓迫止血,,等血滴足夠大時(shí)用濾紙輕觸血滴,取數(shù)個(gè)直徑1cm血斑,晾干,室溫水平放置晾干2-3小時(shí)避免熱烤、日曬、紫外線照射、福爾馬林或其他有機(jī)溶劑熏染、液體污染等,濾紙干血斑標(biāo)本的送檢,原則：盡快送往→最佳：于標(biāo)本采集后24小時(shí)內(nèi)送出規(guī)范要求：采集后1周內(nèi)送達(dá),方法,①掛號(hào)信郵寄②人工投送③專(zhuān)收專(zhuān)投系統(tǒng)（綠色通道 ）是目前最先進(jìn)的遞送

17、技術(shù),HIV檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室生物安全,生物安全貫穿實(shí)驗(yàn)室活動(dòng)的始終,實(shí)驗(yàn)室要求樣品的采集、運(yùn)送、接收、使用、保存、處理檢測(cè)操作中的生物安全儀器設(shè)備廢棄物處置意外事故的處理   實(shí)驗(yàn)室生物安全管理,個(gè)人防護(hù),1.手部皮膚有開(kāi)放性傷口及其他不適于工作的情況，應(yīng)暫停工作。2.皮膚的微小傷口、擦傷、皸裂等，應(yīng)用防水敷料嚴(yán)密覆蓋。3.充足的防護(hù)服、一次性乳膠手套、口罩、帽子和覆蓋足背的工作鞋。應(yīng)將清潔的防護(hù)

18、服和其他個(gè)人防護(hù)用品置于實(shí)驗(yàn)室清潔區(qū)內(nèi)的專(zhuān)用處存放。4.應(yīng)急沖洗眼睛裝置。（30米）5.工作人員上崗前必須進(jìn)行HIV抗體和乙型肝炎病毒、丙型肝炎病毒等肝炎病毒標(biāo)志物檢測(cè)，應(yīng)接種乙肝疫苗。應(yīng)每年對(duì)工作人員采血檢測(cè)HIV抗體，血清應(yīng)長(zhǎng)期保留。6 進(jìn)實(shí)驗(yàn)室工作前要摘除首飾，修剪長(zhǎng)的帶刺的指甲，以免刺破手套。7 嚴(yán)禁在實(shí)驗(yàn)室內(nèi)進(jìn)食、飲水、吸煙和化妝。,個(gè)人防護(hù),8 實(shí)驗(yàn)操作時(shí)應(yīng)穿合適防護(hù)服（白大衣、隔離衣或一次性工作服）、戴手套和

19、口罩、穿實(shí)驗(yàn)室專(zhuān)用的工作鞋。如接觸物的傳染性大、應(yīng)戴雙層手套；含有HIV的液體（樣品或病毒培養(yǎng)液）有可能?chē)姙R時(shí)，應(yīng)戴防護(hù)眼鏡、穿防水（如塑料）圍裙。工作完畢，先脫去手套，再脫去防護(hù)服，用肥皂和流動(dòng)水洗手。穿過(guò)的污染的防護(hù)服應(yīng)及時(shí)放入污物袋中，消毒后方可洗滌或廢棄。 操作過(guò)程中，如發(fā)現(xiàn)防護(hù)服被污染應(yīng)立即更換，如手套破損，應(yīng)立即丟棄、洗手并換上新手套。不能用戴手套的手觸摸暴露的皮膚、口唇、眼睛、耳朵和頭發(fā)等。不要將手套清洗或消毒后

20、再次使用，因?yàn)槭褂帽砻婊钚詣┣逑纯墒故痔讓?duì)水的通透性增加，消毒劑可以引起手套的破損。9 禁止使用口腔吸液管，必須使用移液器來(lái)操作實(shí)驗(yàn)的所有液體。,意外事故處理,1.皮膚針刺傷或切割傷，應(yīng)立即用肥皂和大量流水沖洗，盡可能擠出損傷處的血液，用70%乙醇或其它消毒劑消毒傷口。2 皮膚污染：用水和肥皂沖洗污染部位，并用適當(dāng)?shù)南緞┙?，?0%乙醇或其它皮膚消毒劑。3 粘膜污染：用大量流水或生理鹽水沖洗污染部位。4 衣物污染：盡