臨床生化方法學(xué)評價

1、臨床生化方法學(xué)評價,一、與方法學(xué)評價有關(guān)的幾個名詞,1、真值：　　采用一組最可靠的參考方法測得的近似真實的數(shù)值。2、定值：　標(biāo)定的質(zhì)控材料的已知值。,3、準(zhǔn)確度：　　指測定結(jié)果與真值接近的程度?！　y定的是不準(zhǔn)確度，即重復(fù)測定的均值與真值之差，即系統(tǒng)誤差，用偏差系數(shù)CB表示。,CB=,真值－X,,,,,真值,×100,一般CB﹤5％,4、精密度：　　指對同一樣品重復(fù)分析的結(jié)果間的符合性?！　y定的是不精密度，代表

2、隨機誤差，用標(biāo)準(zhǔn)差(SD)或變異系數(shù)(CV)表示。,SD=,∑(Xi－X)2,,,N －1,,,,CV%＝,SD,,,X,×100,一般CV﹤5％,5、特異性：　　指只對待測物質(zhì)起反應(yīng)，不與其他結(jié)構(gòu)類似的物質(zhì)反應(yīng)?！　∪纾貉菧y定的四種方法：6、干擾：　　指標(biāo)本中存在某些本身不與分析試劑反應(yīng)的物質(zhì)，但卻可使待測物測定值偏高或偏低。　　但目前又提出：特異性用干擾試驗評價。,7、決定性方法：　　指經(jīng)過徹底研究未發(fā)現(xiàn)任何

3、不精密和不準(zhǔn)確因素的方法，準(zhǔn)確度最高，系統(tǒng)誤差最小，測定結(jié)果為“確定值”，與“真值”最接近。只用于發(fā)展及評價參考方法和一級標(biāo)準(zhǔn)品。8、參考方法：　　指經(jīng)過充分證實認(rèn)為精密度與準(zhǔn)確度稍低于決定性方法，其各種輕度干擾因素為已知的分析方法。用于鑒定常規(guī)方法與二級標(biāo)準(zhǔn)品，及為質(zhì)控血清定值，評價商品試劑盒。,9、常規(guī)方法：　　指性能指標(biāo)符合臨床或其它目的需要，有適當(dāng)?shù)姆治龇秶?，而且?jīng)濟適用的分析方法?！　〕Ｒ?guī)方法在做出評價后，經(jīng)有關(guān)學(xué)術(shù)組

4、織認(rèn)可，可以作為推薦方法。,10、醫(yī)學(xué)決定水平：　　　又稱醫(yī)學(xué)決定性濃度，指在診斷及治療工作中，對決定疾病診斷或治療起關(guān)鍵性作用的某一被測成分的濃度?！　∪纾貉牵骸　　?.8　　6.7　　 8.9　　16.8mmol/L　　低血糖　空腹DM 糖耐量　高血糖11、檢出限：　　指能與適當(dāng)?shù)摹翱瞻住弊x數(shù)相區(qū)別的待測物的最小量。,12、誤差：　定義：指測定值與真值或定值的不符合性。　分類：　　(1)系統(tǒng)誤差(SE)：

5、　　　恒定系統(tǒng)誤差(CE)：誤差大小與被測物濃度無關(guān)?！　　　”壤到y(tǒng)誤差(PE)：誤差大小與被測物濃度有關(guān)?！　　?2)偶然誤差/隨機誤差(RE)　　　　允許誤差,,系統(tǒng)誤差：　　定義：指一系列測定結(jié)果與真值或靶值相比存在同一傾向的偏離。　　特點：重復(fù)檢驗時，按一定規(guī)律重復(fù)出現(xiàn)，增加測定次數(shù)不可消除，但改進(jìn)方法等可以校正。表示不準(zhǔn)確度。　　主要見于：方法誤差　　　　　　　儀器、試劑誤差,偶然誤差： 定義：指以偶然

6、的和不可預(yù)料的方式出現(xiàn)的不易測定 的偏差?！√攸c：　　誤差的大小或正負(fù)相等，在均數(shù)兩側(cè)對稱分布，增加測定次數(shù)可以減小，可以控制在一定范圍內(nèi)，但不可避免。表示不精密度。　主要見于：操作誤差　　　　　　方法的線性范圍不夠?qū)挕　　　　　嶒灄l件隨機改變　 注：引起SE與RE的因素是相對的。允許誤差：　　　一般定義為X±1.96SD范圍內(nèi)，即95％可信限以內(nèi)。,,臨床生化方法的選擇,1、選擇要求：由國際臨床化學(xué)

7、協(xié)會(IFCC)提出 ①實用性：快速、微量 費用低廉 方法簡便 安全可靠 ②可靠性：精密度 準(zhǔn)確度與特異性 檢測能力,,,臨床生化方法的選擇,2、選擇步驟： ①查閱文獻(xiàn)，選擇適宜本實驗室的方法 ②

8、選定候選方法：考慮儀器、試劑、參考物、費用、效益等，確定候選方法。 ③初步實驗： A.標(biāo)準(zhǔn)曲線及重復(fù)性實驗 B.質(zhì)控血清或新鮮標(biāo)本的重復(fù)試驗 C.與參考方法比較，分析待測物濃度不同的標(biāo)本 D.要有足夠的試驗證明儀器與試劑能符合要求,評價實驗一、評價實驗的內(nèi)容與過程：,1、評價前實驗：包括候選方法最適條件的研究，如：試劑濃度、緩沖液種類、離子強度及PH、標(biāo)本與試劑體積比，溫度與時間，吸收曲線與波長，線性范圍等。

9、現(xiàn)采用特征曲線表面方法學(xué)(RSM)，利用二次回歸正交設(shè)計的原理，減少了測定次數(shù)。2、初步評價實驗：批內(nèi)與天內(nèi)重復(fù)性，回收實驗、干擾試驗。3、最后評價實驗：天間重復(fù)性、方法比較試驗，根據(jù)誤差結(jié)果判斷方法可否接受。4、評價后實驗：臨床相關(guān)研究，如確定參考值，特殊病人標(biāo)本的測定。5、方法應(yīng)用：QC等。,評價實驗與分析誤差類型的關(guān)系,三、評價實驗,重復(fù)性試驗回收試驗干擾試驗方法比較試驗檢測能力測定,（一）重復(fù)性試驗,1、定義：

10、 對同一材料分成數(shù)份試驗樣品，進(jìn)行多次分析測定。2、目的：考察RE。3、形式與方法： 批內(nèi)重復(fù)性實驗 天內(nèi)重復(fù)性實驗 天間重復(fù)性實驗 病人標(biāo)本的平行雙份測定4、分析樣品的選擇： 標(biāo)準(zhǔn)液：作批內(nèi)重復(fù)性，簡便穩(wěn)定，代表

11、最好的重復(fù)性。 凍干質(zhì)控血清：作天間重復(fù)性，穩(wěn)定、方便。 病人標(biāo)本： 混合血清：5、分析物濃度的選擇：醫(yī)學(xué)決定水平。,,,（二）回收試驗,1、定義：分析方法正確測定加入常規(guī)分析樣品中的純分析物的能力。2、目的：測定PE，衡量準(zhǔn)確度。3、方法： 分析樣品：病人樣品＋被分析物的純品標(biāo)準(zhǔn)液 基礎(chǔ)樣品：病人樣品＋相同量的無分析物的溶劑 兩樣品測定結(jié)果之差為回收量。

12、 再求回收率。,,回收率計算，以測定血清鈣為例：,(1)樣品制備：?、倩A(chǔ)樣品：血清2ml＋蒸餾水0.1ml?、诜治鰳悠罚貉?ml＋4mmol/L鈣標(biāo)準(zhǔn)液0.1ml?、鄯治鰳悠罚貉?ml＋ 25mmol/L鈣標(biāo)準(zhǔn)液0.1ml(2)計算公式及計算結(jié)果：,加入濃度=,標(biāo)準(zhǔn)液濃度×,標(biāo)準(zhǔn)液量(ml),,血清量(ml)+標(biāo)準(zhǔn)液量(ml),回收濃度=分析樣品測得濃度－基礎(chǔ)樣品測得濃度,回收率(%)=,回收濃度,加入濃度,

13、×100%,血清鈣回收試驗結(jié)果,4、回收試驗注意事項： ① 準(zhǔn)確吸量 ②作高、中、低三個濃度（線性范圍內(nèi)）的回收實驗，計算平均回收率。 ③分析樣品終濃度最好達(dá)醫(yī)學(xué)決定水平。 ④加入標(biāo)準(zhǔn)液的體積要在10％以內(nèi)。 ⑤ 一般標(biāo)準(zhǔn)液濃度比欲增加的濃度至少高10倍。 ⑥最好重復(fù)測定幾次。 ⑦病人樣品數(shù)視具體情況而定。 ⑧最好同時用對比方法測回收。,（三）干擾試驗,1、目的：衡量準(zhǔn)確度。加入一定濃度的干擾物

14、則形成CE，干擾物濃度不同則誤差大小不同，但與被分析物的濃度無關(guān)。2、方法： 分析樣品：病人樣品＋疑有干擾或非特異性反應(yīng)的物質(zhì)。 基礎(chǔ)樣品：病人樣品＋相同量的無干擾或非特異性反應(yīng)物質(zhì)的溶劑 測定兩樣品，結(jié)果之差即干擾值。3、完整的干擾試驗包括： 初篩試驗：確定有無干擾 干擾程度的定量,,,4、可疑干擾物的濃度： 須達(dá)到臨床有價值的范圍，有可

15、能應(yīng)達(dá)到病理標(biāo)本的最高濃度值。確定有干擾后，應(yīng)求得最低可疑物濃度值。5、可疑干擾物： Bil 溶血（Hb、血細(xì)胞組分） 脂血 防腐劑 抗凝劑 藥物,6、消除干擾的方法： ①作空白（對照）試驗：試劑空白 標(biāo)本空白 ②采用各種物理、化學(xué)的方法，分離除去干擾物 ③雙波長或多波長檢測,（四）方

16、法比較試驗,1、目的：考察SE(CE+PE），以考察候選方法是否可被接受的措施之一。2、方法：對一組病人的標(biāo)本用候選方法和對比方法同時測定，最后觀察二者之間的差異。3、比較方法的選擇： 在臨床生化常規(guī)方法的評價時，最好選參考方法。,4、注意事項： ①試驗樣品數(shù)：多于40 ②重要分析：每個樣品最好各測2次，分兩批進(jìn)行，要在一天內(nèi)，最好4h內(nèi)。兩批操作中，樣品順序重排，空白、標(biāo)準(zhǔn)重做。 ③實驗的時間間隔：每天2

17、～5個樣品，約測20天。 ④統(tǒng)計處理： 配對t檢驗 相關(guān)與回歸分析：y=a+bx (a:CE,b:PE,r:兩法相關(guān)性是否密切),,以GOD-POD法為例，探討其方法學(xué)評價過程,1、試劑配方的選擇： ①GOD濃度：　　選用180mg/dlGlu溶液作底物溶液。　　GOD濃度：0.5，1，1.5，2，3，4，20u/ml,,,,,,A

18、0.30.20.1,,,,,,,,,,,10　　　　20　　　　30　　　　40　min,(1.5,2,3,4u/ml),1u/ml,0.5u/ml,選2u/mlGOD，10min達(dá)終點,（6min達(dá)終點）,②POD濃度：　　底物濃度： 180mg/dlGlu溶液　　　　　　　　400mg/dlGlu溶液　　POD濃度：0.025，0.15，0.3，1mg/dl,,,,,,,,,,,,,,,,,,0.15，0.3，1mg/

19、dl,0.025mg/dl,A0.30.20.1,10　20　30　40　50　60　　　min,選A更高的0.3mg/dl濃度,③4-AA濃度：　　底物同上，4-AA為3，5，8mg/dl。,反應(yīng)結(jié)果一致，故選用5mg/dl,④酚濃度：,,底物濃度同上，酚濃度為15，25，50，75，100mg/dl。,選用50mg/dl,2、干擾物質(zhì)對血糖的影響,一般認(rèn)為加入干擾物后血糖測定結(jié)果不超過原測定值的±5 mg/dl

20、可認(rèn)為無干擾,3、實驗條件的選擇,①保溫時間及呈色后的穩(wěn)定性:(37℃),,,,,,,,,,,,,A0.30.20.1,20　　40　　60　　　min,Glu180mg/dl,Glu90mg/dl,②PH的影響：,,,,,,,,,PH＝7.0±0.1最好,③溫度的影響：圖形同上④標(biāo)本的采集及處理：　取血后應(yīng)在20～30min內(nèi)分離血清，含糖量可在6h內(nèi)不變。,4、評價實驗：,①準(zhǔn)確性： Ⅰ.與參考方法HK法比