血液檢測(cè)原理

1、血液檢測(cè)原理,Sysmex學(xué)術(shù)應(yīng)用部 曹文靜,,,3,,Sysmex’ 血液分析儀家族,,XE-2100,,,XE-2100D/L,,,KX-21N,K-4500,pocH-100i,XT-1800i,XT-2000i,3-part Diff,Low end 5-part Diff,Mid-end 5-part Diff,High-end 5-part Diff,,,,,,,,XE-alpha,HST,XS-800i,XE-50

2、00,,XN,五分類儀器歸總：,規(guī)格：尺寸（機(jī)組）,○：搭載ON：軟件控制下的選擇方式：“選擇” 　　OFF：軟件控制下的選擇方式：“無(wú)選擇” 　　△：作為參考參數(shù)匯報(bào),WB: whole blood, PD: prediluted, BF: body fluid,靈活地適應(yīng)顧客的要求?準(zhǔn)備分析功能不同的2種型號(hào)（XN-10、XN-20）?采用設(shè)備時(shí)，通過(guò)軟件的變更，可將XN-20設(shè)定為2組機(jī)型﹑XN-10設(shè)定為4組機(jī)型,搭配

3、原則：遵循左高右低,,XN2000/3000機(jī)型搭配要求,XN9000機(jī)型搭配原則,可搭配機(jī)型,不可搭配機(jī)型,要符合左高右低搭配的原則，同類型配置原則,吸樣量　　　　所需血液量　全血模式　低值白細(xì)胞模式　稀釋模式※4　　　體液模式,進(jìn)樣器檢測(cè)定※1手動(dòng)測(cè)定微量測(cè)定※2微量測(cè)定※3（微量采血管測(cè)定）微量測(cè)定※2微量測(cè)定※4（微量采血管測(cè)定）手動(dòng)測(cè)定微量測(cè)定※2微量測(cè)定※3（微量采血管測(cè)定）,,,,,

4、,,,,,,88μL88μL88μL88μL70μL70μL88μL88μL88μL,1 mL1 mL0.3 mL160μL0.3 mL140μL（稀釋后 ）1 mL0.3 mL160μL,※1　進(jìn)樣器測(cè)定：試管架自動(dòng)傳送的進(jìn)樣器測(cè)定?！?　微量測(cè)定：為了減少最低體積（dead volume）、打開采血管蓋進(jìn)行的手動(dòng)測(cè)定?！?　微量測(cè)定（微量采血管測(cè)定）：使用微量采血管進(jìn)行的檢測(cè)。開蓋測(cè)定。

5、※4　稀釋模式：將血液7倍稀釋后進(jìn)行測(cè)定的模式。,規(guī)格：吸樣量?所需血液量,以XE2100為例，檢測(cè)原理、通道、參數(shù)信息,檢測(cè)模塊,檢測(cè)原理,檢測(cè)通道,檢測(cè)信息,,,,,,RBC/PLT,WBC,鞘流原理-DC檢測(cè) -,流式細(xì)胞原理,RBC/PLT通道,PLT直方圖,RBC直方圖,WBC散點(diǎn)圖,,,,檢測(cè)參數(shù),PLT,RBC,,WBC/Ba通道,HPC,,HGB,HGB通道,比色法,HGB,全血標(biāo)本,IMI通道,,,,D

6、IFF通道,NRBC通道,RET通道,DIFF散點(diǎn)圖,WBCBaso,NRBC,RETPLT-OIRF,NRBC散點(diǎn)圖,RET散點(diǎn)圖,LymphMonoNeut+BaEo,RET,流式細(xì)胞原理,RF/DC,,,檢測(cè)通道,,RBC/PLT,,,,,,,,,,,,,XN儀器檢測(cè)通道的改善,,RET,,,DIFF,IMI,WNR,PLT-F低值血小板,WPC,1.半導(dǎo)體激光+流式細(xì)胞,半導(dǎo)體激光提供的細(xì)胞信息FSC

7、前向散射光：細(xì)胞大小SSC側(cè)向散射光：細(xì)胞內(nèi)容物復(fù)雜程度SFL側(cè)向熒光：細(xì)胞內(nèi)核酸含量,主要原理WNR WDFRET/PLT-OPLT-F激光633nm熒光染色聚次甲基噁嗪 流式,2.阻抗+射頻,主要原理RBC/PLT-I鞘流阻抗法,11,前鞘流：避免多顆粒同時(shí)通過(guò)寶石孔——少計(jì)數(shù) 避免顆粒側(cè)流——多計(jì)數(shù)后鞘流：避免顆?；亓鳌嘤?jì)數(shù),血細(xì)胞通過(guò)→電阻值發(fā)生變化

8、→脈沖被檢測(cè)當(dāng)血細(xì)胞通過(guò)檢測(cè)部小孔時(shí)，電阻信號(hào)①信號(hào)的大小與通過(guò)的細(xì)胞體積呈正比②電阻變化的次數(shù)＝細(xì)胞數(shù),3.SLS-血紅蛋白法,HGB通道,十二烷基磺酸鈉：無(wú)氰無(wú)毒,,,,IGHPC,NRBCRETRET-HEIRF,IPF,幼稚細(xì)胞和異常標(biāo)本的檢出,粒系,紅系,巨核系,0.7%,添加實(shí)驗(yàn),,幼稚細(xì)胞靈敏度高達(dá),各通道檢測(cè)原理,,,,,,,XE系列,XN系列,和XE相比較，LYMPH和MONO的散點(diǎn)群更加明確地得以劃分。

9、,原理：WDF通道,,病例 未分類樣本改善,,XE5000,XN2000,,報(bào)警信息：原始細(xì)胞？異淋? 有核紅？白細(xì)胞散點(diǎn)圖異常核左移？單核細(xì)胞增加？嗜堿細(xì)胞增加？幼稚細(xì)胞？,,5分類NRBC 0.9%,未分類NRBC?,,報(bào)警信息：原始細(xì)胞？白細(xì)胞散點(diǎn)圖異常核左移？單核細(xì)胞增加？幼稚細(xì)胞存在？,,?WDF通道中，對(duì)白細(xì)胞進(jìn)行計(jì)數(shù)并分類為中性粒細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、單核細(xì)胞以及嗜酸性粒細(xì)胞,?同時(shí)定量檢出幼稚粒細(xì)

10、胞(IG%，#）以及異型淋巴細(xì)胞（,HFLC%，#）等的異常細(xì)胞。?對(duì)相關(guān)異常參數(shù) 的復(fù)檢規(guī)則制定更具定量化。,1.WDF通道：IG和HFLC的定量參數(shù),檢測(cè)參數(shù)：　NEUT, LYMPH, MONO, EO, IG,病例：IG增高病例,,,,鏡檢圖片：,Sysmex儀器對(duì)于異常細(xì)胞檢出的靈敏度為0.7%,,WDF通道的要點(diǎn),①散點(diǎn)圖基本上和XE系列的DIFF通道無(wú)區(qū)別。②試劑得以改良（溶血?jiǎng)┑淖饔幂^XE系列穩(wěn)定。）③

11、新的SFLAS算法應(yīng)用， 使得LY和MO間距拉寬，除散點(diǎn)位置外還綜合散點(diǎn)重心、形態(tài)等，使得得以更加明確地劃分。,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,FSC：前向散射光,溶血?jiǎng)篖ysercell WNR染色液：Fluorocell WNR,WNR散點(diǎn)圖,SFL：側(cè)向熒光,BASO,WBC,NRBC,Debris,2.WNR：有核紅細(xì)胞計(jì)數(shù)為常規(guī)報(bào)告參數(shù),New,嗜堿性粒細(xì)胞,淋巴細(xì)胞,單核細(xì)胞粒細(xì)胞（中性粒

12、細(xì)胞?嗜酸性粒細(xì)胞等）,有核紅細(xì)胞紅細(xì)胞,中,弱極弱,中,中極弱,(SFL)強(qiáng),側(cè)向熒光 前向散射光,(FSC)強(qiáng),項(xiàng)目：WBC, NRBC, BASO報(bào)警信息PLT Clumps?, NRBC Present,WBC Abnormal Scattergram細(xì)胞膜通過(guò),溶血,熒光,病例：外周血有核紅病例,,,NRBC升高見于：,有效降低推片復(fù)檢率,WNR通道W

13、BC總數(shù)：9.67*109/L,,WDF通道WBC總數(shù)：9.51*109/L,,正常情況，兩個(gè)通道WBC總數(shù)相差不大,,①　由于在CBC模式下該通道用于WBC測(cè)定，因此可以在全體樣本中測(cè)得NRBC計(jì)數(shù)，以及由NRBC數(shù)修正過(guò)的WBC數(shù)據(jù)。②　由于采用熒光染色進(jìn)行檢測(cè)，紅細(xì)胞沒有被染色，所以不存在紅細(xì)胞溶血不良所造成的影響?！。▋x器評(píng)估檢測(cè)時(shí)也未出現(xiàn)溶血不良的例子）?刪除“RBC Lyse Resistance?”的報(bào)警。,2.W

14、NR通道要點(diǎn)：,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,SFL：側(cè)向熒光,FSC：前向散射光,試劑溶血?jiǎng)篖ysercell WPC染色液：Fluorocell WPC,SSC：側(cè)向散射光,WBC,BlastWBCAbn Lymph,Blast,WPC散點(diǎn)圖Abn Lymph,報(bào)警信息Abnormal lymph?, Blasts?,Atypical lymph?,異常淋巴細(xì)胞

15、原始細(xì)胞成熟白細(xì)胞,溶血,染色,側(cè)向熒光 前向散射光 側(cè)向散射光(SFL) (FSC) (SSC),中～強(qiáng)弱～中中,弱強(qiáng)弱～強(qiáng),弱弱弱～強(qiáng),HPC,HPC,3.WPC：通過(guò)REFLEX設(shè)置選擇性檢測(cè),New,主界面,研究界面,HPC散點(diǎn)圖,HPC通道測(cè)定時(shí)，HPC區(qū)域中出現(xiàn)的粒子顯示為紫紅色

16、。 (全血模式時(shí)顯示為紅色)。,HPC,,外周血中，可見白細(xì)胞數(shù)增加、貧血，成熟淋巴細(xì)胞增加（93％）。淋巴細(xì)胞的體積大約是紅細(xì)胞體積的2倍左右，細(xì)胞質(zhì)面積小，嗜堿性弱。核為類圓形，核染色質(zhì)濃縮。核仁不顯眼。另外，在標(biāo)本上可見大量的破碎細(xì)胞核的輪廓。,病例（一）： (B-CLL)淋系白血病,,,外周血中，可見白細(xì)胞數(shù)增加、貧血、血小板數(shù)減少。原始細(xì)胞的形態(tài)為中型，核質(zhì)比較低。核為類圓形，或可見切跡。核染色質(zhì)為較大，且纖細(xì)，可觀察到明顯的

17、核仁。零散地可見有Auer小體（ ?）的原始細(xì)胞。另外，在核和細(xì)胞質(zhì)中可觀察到空泡。,病例（二）：( AML-M2 )髓系白血病,,,使用WPC通道進(jìn)行復(fù)檢，可降低推片率,,,3.WPC通道要點(diǎn)：,①　選擇性使用：通過(guò)reflex對(duì)懷疑類報(bào)警追加WPC檢測(cè)在WPC通道，采用熒光染色可以檢出類似Abnormal Lymph和Blast的異常細(xì)胞。②　試劑無(wú)臭味：通過(guò)試劑的改良，區(qū)別與原先IMI通道。③　特異性高：在保持高靈敏度前提下，

18、不僅區(qū)分髓系還能區(qū)分淋系。④ 降低推片率，縮短TAT。異常淋巴細(xì)胞(Abnormal Lymph)：易著色，體積較小。原始細(xì)胞(Blast)：不易被染色，體積較大。,4.原理：RET通道,稀釋劑：CELLPACK DFL染色液：Fluorocell RET,RET散點(diǎn)圖,SFL：側(cè)向熒光,FSC：前向散射光,項(xiàng)目　RET, RET-He標(biāo)志　RET Abnormal scattergram, Fragments?,R

19、ET參考范圍-衛(wèi)生部正在操作。建議實(shí)驗(yàn)室也可建立自己的參考范圍。,網(wǎng)織紅細(xì)胞檢測(cè)參數(shù),RET-He:網(wǎng)織紅細(xì)胞血紅蛋白含量,LFR:低熒光強(qiáng)度網(wǎng)織紅細(xì)胞比率,MFR：中熒光強(qiáng)度網(wǎng)織紅細(xì)胞比率,HFR:高熒光強(qiáng)度網(wǎng)織紅細(xì)胞比率,IRF：未成熟網(wǎng)織紅細(xì)胞百分比,RET#%網(wǎng)織紅細(xì)胞計(jì)數(shù)的絕對(duì)值和百分比,網(wǎng)織紅檢測(cè)參數(shù),RET通道小結(jié)：,1.XN校準(zhǔn)品種還有RET參數(shù)，具有溯源性。2.IRF：IRF是反映紅系增生減低比較敏感的指標(biāo)，I

20、RF對(duì)腎性貧血的療效判斷具有重要價(jià)值。3.RET-HE:①缺鐵性貧血的鑒別診斷，IDA時(shí)，明顯減低②腎性貧血：建議EPO+鐵劑治療，同時(shí)檢測(cè)RET-HE的變化,稀釋劑：CELLPACK DFL染色液：Fluorocell PLT,PLT-F散點(diǎn)圖,SFL：側(cè)向熒光,FSC：前向散射光,項(xiàng)目　PLT, IPF標(biāo)志　PLT Abnormal scattergram,　PLT Clumps?,5.原理：PLT-F通道,,SFL

21、,PLT-O： α顆粒,PLT-F ：線粒體DNA,XN-3種檢測(cè)通道檢測(cè)PLT,PLT-I：顆粒大小,DC,低值血小板檢測(cè)更加準(zhǔn)確,,,一例燒傷患者的XN PLT-F散點(diǎn)圖,Fragmentated,一例燒傷患者的XE PLT-O散點(diǎn)圖,ErythrocytErythrocytFragmentated,erythrocytes,erythrocytesPlateletsPlatelets使用

22、試劑的區(qū)別：,PLT-O 、PLT-F染色試劑的區(qū)別,低值血小板——重復(fù)性,顯微鏡見極少量RBC碎片,顯微鏡見1%RBC碎片,顯微鏡見極少量RBC碎片,顯微鏡見少量RBC碎片,,,,PLT-F通道檢測(cè)低值血小板的重復(fù)性最佳。,,以PLT-F結(jié)果為準(zhǔn),病例 ：紅細(xì)胞碎片對(duì)血小板計(jì)數(shù)的干擾,,5.PLT-F通道要點(diǎn)：,①在PLT-F通道，使用了不同于RET通道的熒光染料噁嗪 ，而 PLT-O 的熒光染料是聚次甲基+噁嗪。噁嗪對(duì) DNA 極其

23、敏感②由于選擇性染色血小板，故網(wǎng)織紅細(xì)胞難以染色。另外，也不易受到紅細(xì)胞碎片的影響。③血小板低值樣本，5倍計(jì)數(shù)，提高精密度的同時(shí)保證了檢測(cè)的準(zhǔn)確度。,XE/XT體液模式界面及散點(diǎn)圖,BF報(bào)告參數(shù),BF研究參數(shù),WDF: 主畫面,WDF (EXT): 服務(wù)畫面,體液BF模式：散點(diǎn)圖,WDF散點(diǎn)圖,WDF(EXT)散點(diǎn)圖,WDF散點(diǎn)圖,WDF(EXT)散點(diǎn)圖,XN/XE體液功能的變化,46,統(tǒng)一、完整的質(zhì)控校準(zhǔn)體系,完整的質(zhì)控校準(zhǔn)體系

24、統(tǒng)一質(zhì)控品覆蓋全部報(bào)告項(xiàng)目項(xiàng)目，全系列XN儀器通用唯一SFDA注冊(cè)的體液質(zhì)控品唯一含RET校準(zhǔn)項(xiàng)目的校準(zhǔn)品,原理部分Q&A：,1. XN 的 WDF 通道和原來(lái) XE 系列的 DIFF 通道相比，白細(xì)胞分類更好的原因是什么?2.XN機(jī)型中哪些機(jī)型可以測(cè)PLT-F？哪些機(jī)型可以測(cè)RET？3.簡(jiǎn)述WPC通道優(yōu)勢(shì)？4.最能體現(xiàn)最先進(jìn)血液分析儀白細(xì)胞系定量檢測(cè)的參數(shù)為？紅細(xì)胞系可定量檢測(cè)的參數(shù)為？血小板定量檢測(cè)的參數(shù)為？5.