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1、1專題一基因工程知識(shí)點(diǎn)匯總11DNADNA重組技術(shù)的基本工具重組技術(shù)的基本工具一、基因工程的原理:基因工程是指按照人們的愿望,進(jìn)行嚴(yán)格的設(shè)計(jì),通過體外和,賦予生物以新的遺傳特性,創(chuàng)造出更符合人們需要的新的生物類型和生物產(chǎn)品。由于基因工程是在水平上進(jìn)行設(shè)計(jì)和施工的,因此又叫做。1.“分子手術(shù)刀”——(1)來源:主要是從中分離純化出來的。(2)功能:能夠識(shí)別雙鏈DNA分子的,并且使每一條鏈中特定部位的兩個(gè)核苷酸之間的斷開,因此具有性。(3)
2、結(jié)果:經(jīng)限制酶切割產(chǎn)生的DNA片段末端通常有兩種形式:和。(4)這類酶在生物體內(nèi)能將外來的DNA切斷,即能夠限制異源DNA的侵入并使之失去活力,但對(duì)自己的DNA卻無損害作用,這樣可以保持細(xì)胞原有的遺傳信息。2.“分子縫合針”——(1)兩種DNA連接酶(EcoliDNA連接酶和T4DNA連接酶)的比較:①相同點(diǎn):都縫合。②區(qū)別:EcoliDNA連接酶來源于,只能將雙鏈DNA片段互補(bǔ)的末端之間的磷酸二酯鍵連接起來;而T4DNA連接酶能縫合,
3、但連接的之間的效率較低。(2)與DNA聚合酶作用的異同:DNA聚合酶只能將加到已有的核苷酸片段的末端,形成磷酸二酯鍵。DNA連接酶是連接的末端,形成磷酸二酯鍵。3.“分子運(yùn)輸車”——載體(1)基因操作過程中使用載體兩個(gè)目的:一是用它作為運(yùn)載工具,將目的基因轉(zhuǎn)移到宿主細(xì)胞中去;二是利用它在宿主細(xì)胞內(nèi)對(duì)目的基因進(jìn)行大量的復(fù)制。(2)現(xiàn)在通常使用的載體是,它是一種相對(duì)分子質(zhì)量較小、獨(dú)立于之外,并具有自我復(fù)制能力的DNA分子的環(huán)狀DNA,有的細(xì)
4、菌中有一個(gè),有的細(xì)菌中有多個(gè)。(3)質(zhì)粒通過細(xì)菌間的接合由一個(gè)細(xì)菌向另一個(gè)細(xì)菌轉(zhuǎn)移,可以復(fù)制,也可整合細(xì)菌擬核DNA中,隨著擬核DNA的復(fù)制而復(fù)制。(4)其他載體還有和等。(5)作為載體必須具備以下條件:①能夠在宿主細(xì)胞中;②具有多個(gè),以便33、不同的受體細(xì)胞及目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞的方法不同,基因表達(dá)載體的構(gòu)建上也會(huì)有所差別。三、將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞三、將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞(一)轉(zhuǎn)化:目的基因進(jìn)人受體細(xì)胞內(nèi),并在受體細(xì)胞內(nèi)維持穩(wěn)定和
5、過程。(二)方法1、將目的基因?qū)胫参锛?xì)胞(1)農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法①農(nóng)桿菌特點(diǎn):易感染植物和裸子植物,對(duì)___________植物沒有感染力;Ti質(zhì)粒的可轉(zhuǎn)移至受體細(xì)胞,并整合到受體細(xì)胞的染色體上。②轉(zhuǎn)化:目的基因插入的上,形成重組質(zhì)粒????進(jìn)入農(nóng)桿菌→→目的基因整合到植物細(xì)胞染色體上→通過方法培養(yǎng)成再生植株,目的基因的遺傳特性得以穩(wěn)定維持和表達(dá)。(2):是單子葉植物中常用的一種基因轉(zhuǎn)化方法,但是成本較高。(3):這是我國(guó)科學(xué)家獨(dú)創(chuàng)的一種方
6、法,是一種十分簡(jiǎn)便經(jīng)濟(jì)的方法。(我國(guó)的轉(zhuǎn)基因抗蟲棉就是用此種方法獲得的)2將目的基因?qū)雱?dòng)物細(xì)胞(1)方法:技術(shù)。(2)操作程序:目的基因表達(dá)載體→取卵(受精卵)→顯微注射→注射了目的基因的受精卵移植到____性動(dòng)物的______________________內(nèi)發(fā)育→新性狀動(dòng)物。3將目的基因?qū)胛⑸锛?xì)胞(1)原核生物特點(diǎn):繁殖快、多為單細(xì)胞、遺傳物質(zhì)相對(duì)較少等。(2)轉(zhuǎn)化:處理細(xì)胞→細(xì)胞→表達(dá)載體與感受態(tài)細(xì)胞混合→___細(xì)胞吸收DN
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