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1、碩士學(xué)位論文Y87368S豬瘟免化弱毒疫苗株cDNA分子克隆與嵌合分子克隆的構(gòu)建COnstructiOnOfthecDNACloneandChimericClOnesofClassicalSwineFeverVirusC—strainvaccine研究生:指導(dǎo)教師:至塑態(tài)垡生查盟塞亟盤(pán)查良型煎撞新疆農(nóng)業(yè)大學(xué)中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院哈爾濱獸醫(yī)研究所本研究得到國(guó)家973項(xiàng)目(2005CB52320)的資助。二00六年六月AbstractCl嬲sica
2、ls、^,inet’ever(cSF),whichiscausedbyclassicalswinefeVerVims(CSFV),isahighlycor婦百0us趾doftenfatalViraldiseaseofpigsnischaracterizedbyhighf曲er鋤dh鋤orrhages,舭dclassi:fiedasanOIElistAdiseaseGreatlossestopigindlls時(shí)worldwidchavcb
3、eenc棚edbymeprevalenceofCSF,especiallyofnontypicalfornlsHogcholeral印irli乃cdvims(HCLV)(alsoI【Ilown髂C—s艦岫,aVerysafe鋤de伍caciousVaccmedeVelopedinCllilHh嬲beenplayingakeymleint圮controlofmediseaseHoweVerpigsvaccinatedbythisvacci
4、necaIlIlmbedis血guished舶m訊l岣pecSFvin?!辴edpigsbyconvemiona王serologicalassaysDevelopmemofmarkerVaccincsmayhelptosolVetllisproblem11lisstudyaimstoconsmlct血e血ll1eng血cDNAcloneofHCLVtoestablisharcVersegeneticssystemaSpIatformfo
5、rstudyofCSFVNiIleprimerpairSweredesigncdaccordingt0mepublishedseq啪cesofHCLVUsingRTPCR,nineoVerlappingcDNA丘agments(Fl一9)covcringtllecompletegenomeofHCLV/HVIuwereanlplified,clonedandsequenced,andthenthecompletegenomesequen
6、cew嬲assembledHomologycomparisonbe錒ecnthcHCLV小VRIsequenceaIldotller7HCLVsequencesshowsmattheHCLVgenomeisrathcrgeneticaIlystableUsingone—steplig砒ionofmuIti如gmentme廿10d,twohalf_1engthcDNAclonespOKl2/F1—5a11dpOKl2/F69wereobt
7、aincdbycloIling行agmentsF1to5andF6to9imopOKl2111enmeMohalflengnlcDNAc10neswcreligated,resultinginme劬llengmcDNAclonepOKl2/Fl一9(p0KHCLV)Byinsertion,substitution,deletion血pOKHCLV,weobtainedaseriesofchimericclonespOKHCLV厄GFP(
8、inseningEGFPgeneintoHCLVgenome),p0KHCLV甩IAVep(insertinganEIAVepitopeintoHCLVgenome),pOKHcLV/3’UTR(substimting3’untr趾slatingregionofShimenfor血atofHCLV),p0KHcLV/shimen(substituting3’halfpanofShimenstrainformatofHCLV),pOKsl
9、limen,HCLV(substituting5’halfpanofshimenstrainforthatofHcLV),pOⅪcLVdel4764(deleting4764bpinthecodingregionofHCLV),aIldp0KCIHCLV(placingHCLVgenomeuIlderthccontmlofCMVpromoter)Themolecularcloneandchimericclonescanbeusedtos
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