典型抗生素菌渣殘留效價檢測方法及其利用的初步研究.pdf

1、隨著抗生素產量增多，抗生素菌渣的處理問題已逐漸成為了限制制藥業(yè)發(fā)展的重要問題。由于菌渣中的殘留效價會引發(fā)耐藥風險，故抗生素菌渣已被列為危廢。本論文選擇土霉素和桿菌肽為典型,通過對菌渣樣品前處理條件（提取、凈化）及色譜條件（色譜柱、柱溫、流動相、檢測波長）的優(yōu)化，建立檢測菌渣中殘留效價的方法,并以桿菌肽菌渣為研究對象,探究了抗生素菌渣用作飼料添加劑的可行性。
　　對于土霉素菌渣，用甲醇/冰乙酸提取土霉素，采用分散固相萃取技術，用GC

2、B和C18各50mg及1mgNaSO4作為吸附藥劑凈化樣品，色譜條件為：PLRP-S色譜柱分離，柱溫30℃，流動相為甲醇/0.05mol/L草酸，檢測波長為355nm，結果顯示，土霉素在0.1~2000mg/L范圍內線性良好，回收率為86.86~97.33％，RSD為2.45~4.38%，LOD和LOQ分別為0.0506和0.1533，所建立的方法簡單有效。在此基礎上，建立了土霉素三種降解產物E-OTC、α-OTC與β-OTC的檢測方法

3、。E-OTC是OTC的同分異構體，結構和性質相似，因此采用與OTC相同的提取和凈化方式。檢測E-OTC的色譜條件為：PLRP-S色譜柱分離，流動相選用乙腈/0.2%甲酸水，檢測波長270nm。α-OTC與β-OTC是同分異構體，結構性質相似，可一同提取、凈化和檢測，提取劑選用甲醇/冰乙酸/0.02mol/LNa2EDTA，用Waters Sep-Pak C18固相萃取柱凈化提取液，甲醇、超純水、Na2EDTA溶液活化小柱，5ml超純水淋

4、洗，2ml甲醇和1ml乙酸乙酯洗脫，檢測α-OTC與β-OTC的色譜條件為：PLRP-S色譜柱分離，甲醇/乙腈/磷酸鹽緩沖溶液(pH=8)為流動相，波長為254nm。經檢測，E-OTC、α-OTC和β-OTC的回收率分別為75.98~84.73%、59.22~76.76%和63.91~72.57%，RSD分別為2.23~4.26%、2.12~4.85%、2.79~5.04%，LOD和LOQ分別為0.0658~0.0774和0.1990~

5、0.2346。
　　對于桿菌肽菌渣，用甲醇/0.1%甲酸水提取桿菌肽A，加入乙腈除蛋白，用正己烷進行二次除脂，然后過Oasis HLB固相萃取柱，5ml甲醇和5ml超純水活化，3ml超純水淋洗，3ml甲醇洗脫。檢測桿菌肽A的色譜條件為：Aglient TC-C18色譜柱分離，流動相為0.1%甲酸乙腈和0.1%甲酸水，柱溫30℃，檢測波長254nm。經檢測，桿菌肽A在0.1~1000mg/L范圍內相關系數是0.9997，呈良好線性，

6、回收率為87.89~97.33%，相對標準偏差為3.05%~5.18%。最后探究了桿菌肽菌渣用作飼料添加劑的可行性。對桿菌肽菌渣進行成分分析，將菌渣中常規(guī)營養(yǎng)成分含量及各氨基酸含量與幾種常規(guī)飼料對比，表明菌渣中的營養(yǎng)成分符合飼料水平，且菌渣中有毒重金屬含量均低于規(guī)定的最大允許值，屬無毒產品。在此基礎上設計并優(yōu)化了菌渣制備飼料添加劑的工藝。最后對菌渣中的耐藥基因進行了檢測，檢測到菌渣中含有bcrB基因，雖然bcrB基因單獨存在時不足以引發(fā)