青霉素類抗生素殘留分析的前處理及HPCE檢測(cè)方法研究.pdf

1、青霉素類抗生素廣譜高效,藥物學(xué)性質(zhì)良好,且?guī)缀鯖]有毒性,在畜牧獸醫(yī)領(lǐng)域也得到了廣泛的應(yīng)用,被大量應(yīng)用于動(dòng)物疾病預(yù)防與治療,由于部分養(yǎng)殖單位不合理用藥導(dǎo)致殘留現(xiàn)象嚴(yán)重,人類食用此類存在青霉素類抗生素殘留的動(dòng)物源性產(chǎn)品會(huì)對(duì)身體造成一定危害甚至產(chǎn)生嚴(yán)重過(guò)敏反應(yīng),所以對(duì)動(dòng)物源性食品中此類抗生素殘留的有效監(jiān)測(cè)已經(jīng)成為保障食品安全的一個(gè)重要環(huán)節(jié)。為了適應(yīng)殘留檢測(cè)的需要,建立靈敏度、準(zhǔn)確度和精確度均符合殘留檢測(cè)要求的青霉素類抗生素殘留分析方法成為研究

2、的重點(diǎn)。本實(shí)驗(yàn)結(jié)合國(guó)內(nèi)外對(duì)青霉素類抗生素的藥理研究及殘留分析方法的研究,建立了分析青霉素類抗生素中青霉素、氨芐青霉素、阿莫西林三種藥物的良好前處理方法及毛細(xì)管電泳分離分析方法。 本實(shí)驗(yàn)開展了以下研究工作： 1.雞肌肉組織中青霉素類抗生素殘留分析的四種前處理方法的建立與比較本實(shí)驗(yàn)建立了雞肌肉組織中青霉素類抗生素殘留分析的四種前處理方法,并通過(guò)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)分析比較確定出最優(yōu)的雞肌肉組織中青霉素類抗生素殘留分析前處理方法,為本課題

3、的后續(xù)研究提供實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。本實(shí)驗(yàn)建立了溶劑提取、固相萃取、基質(zhì)固相分散萃取、基質(zhì)固相分散萃取-固相萃取聯(lián)用四種前處理方法,對(duì)所得數(shù)據(jù)及圖譜進(jìn)行分析發(fā)現(xiàn),相比之下固相萃取法具有回收率水平較高、圖譜背景干擾小的特點(diǎn),可滿足殘留分析的要求,且此法操作簡(jiǎn)單,雞肌肉組織中的三種青霉素類抗生素直接采用磷酸鹽緩沖液提取,乙腈去蛋白,然后使用C18固相萃取柱凈化,80％乙腈洗脫,洗脫液40℃高純氮?dú)獯蹈?微孔濾膜過(guò)濾后即可使用儀器檢測(cè)。故最終確定固相萃取

4、法為處理雞肌肉組織樣品的前處理方法。 2.高效毛細(xì)管電泳分離青霉素類抗生素方法建立實(shí)驗(yàn)首先對(duì)幾種緩沖體系進(jìn)行比較,硼砂/鹽酸緩沖體系可對(duì)青霉素、氨芐青霉素、阿莫西林進(jìn)行較好分離,確定為實(shí)驗(yàn)所需緩沖體系。通過(guò)紫外掃描確定198nm為檢測(cè)波長(zhǎng)。然后通過(guò)四因素三水平正交實(shí)驗(yàn),分別對(duì)不同的緩沖液離子濃度、pH值、分離電壓和運(yùn)行溫度對(duì)青霉素、氨芐青霉素、阿莫西林分離效果的影響進(jìn)行分析,結(jié)果表明緩沖液離子濃度為30mmom/L、pH為7.8

5、、分離電壓為18 kV、運(yùn)行溫度為25℃為最佳電泳條件。最終采用的毛細(xì)管電泳分析條件為：彈性石英毛細(xì)管柱(75μm×50cm),二極管陣列檢測(cè)器(PDA),0.6psi進(jìn)樣8s,檢測(cè)波長(zhǎng)198nm,運(yùn)行緩沖液為30mmol/L硼砂緩沖液,pH值7.8(6mol/L HCL調(diào)),分離電壓18kV,溫度2℃。每次進(jìn)樣前均0.1mol/L NaOH洗2min、水洗3min、緩沖液洗5min。在確定的最佳電泳條件下青霉素、氨芐青霉素、阿莫西林完

6、全分離且峰形較佳。 3.SPE-HPCE分析雞肌肉樣品中的青霉素、氨芐青霉素、阿莫西林殘留方法建立實(shí)際雞肌肉樣品采用磷酸鹽緩沖液提取、乙腈去蛋白、正己烷脫脂、SPE凈化后HPCE檢測(cè),對(duì)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析,結(jié)果顯示,SPE-HPCE方法下青霉素的檢測(cè)限為0.2μg/g定量限為0.5μg/g,氨芐青霉素的檢測(cè)限為O.3μg/g定量限為O.7μg/g,阿莫西林的檢測(cè)限為O.1μg/g定量限為0.3μg/g。三者在雞肌肉組織中的回收率范