實(shí)驗(yàn)三、飲料中咖啡因含量的高效液相色譜分析

1、實(shí)驗(yàn)三、飲料中咖啡因含量的高效液相色譜分析實(shí)驗(yàn)三、飲料中咖啡因含量的高效液相色譜分析――――外標(biāo)法定量外標(biāo)法定量一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康囊?、?shí)驗(yàn)?zāi)康?進(jìn)一步熟悉和掌握高效液相色譜議的結(jié)構(gòu)。2鞏固對(duì)反相液相色譜原理的理解及應(yīng)用。3掌握外標(biāo)法定量及igin軟件繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。二、實(shí)驗(yàn)原理二、實(shí)驗(yàn)原理咖啡因又稱咖啡堿，屬于黃嘌呤衍生物，化學(xué)名為1，3，7－三甲基黃嘌呤，是從茶葉或咖啡中提取的一種生物堿。它能興奮大腦皮層，是使人精神亢奮?？Х纫蛟诳Х戎械暮?/p>

2、約為1.2％～1.8％，在茶葉中約為2.0％～4.7％。可樂(lè)飲料、止痛藥片等均含咖啡因?？Х纫虻姆肿邮綖镃8H10O2N4，結(jié)構(gòu)式為：NNNNOOCH3H3CCH3在化學(xué)鍵合相色譜中，對(duì)于親水性的固定相常采用疏水性流動(dòng)相，即流動(dòng)相的極性小于固定相的極性，這種情況稱為正相化學(xué)鍵合相色譜法。反之，若流動(dòng)相的極性大于固定相的極性，則稱為反相化學(xué)鍵合相色譜法，該方法目前的應(yīng)用最為廣泛。本實(shí)驗(yàn)采用反相液相色譜法，以C18鍵合相色譜柱分離飲料中的咖

3、啡因，紫外檢測(cè)器進(jìn)行檢測(cè)，以咖啡因標(biāo)準(zhǔn)系列溶液的色譜峰面積對(duì)其濃度作標(biāo)準(zhǔn)曲線，再根據(jù)試樣中的咖啡因峰面積，由其標(biāo)準(zhǔn)曲線算出其濃度。三、實(shí)驗(yàn)儀器和試劑三、實(shí)驗(yàn)儀器和試劑1.Agilent1100和Agilent1200高效液相色譜儀2.咖啡因（AR），超純水由純水機(jī)制得，甲醇為色譜純，配溶液的甲醇為分析純。3.咖啡因標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制（1）標(biāo)準(zhǔn)貯備液配制含咖啡因1000ugmL的甲醇溶液，備用。（2）標(biāo)準(zhǔn)系列溶液用上述貯備液配置含咖啡因20u

4、gmL，40ugmL，80ugmL，160ugmL，320ugmL的甲醇溶液，備用。記錄并積分色譜圖。13.打印色譜圖。14.待所有樣品分析完后，單擊Pump圖標(biāo)，進(jìn)入Pump編輯畫面，準(zhǔn)備清洗儀器，本實(shí)驗(yàn)用0.5mLmin的甲醇清洗儀器30min，若實(shí)驗(yàn)過(guò)程用到酸或緩沖鹽做流動(dòng)相，須先用0.5mLmin水清洗儀器60min，再用0.5mLmin的甲醇清洗儀器30min。15.當(dāng)儀器沖洗干凈后，單擊工作站畫面的Off按鈕，關(guān)泵，退出化學(xué)

5、工作站，關(guān)掉BootpServer窗口，關(guān)閉計(jì)算機(jī)（用shutdown關(guān)），最后從下往上關(guān)掉LC電源開關(guān)。再關(guān)總電源。16.實(shí)驗(yàn)結(jié)束后做好儀器使用情況登記，經(jīng)實(shí)驗(yàn)指導(dǎo)老師簽名后方可離開實(shí)驗(yàn)室。六、實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)及處理六、實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)及處理1.處理色譜數(shù)據(jù)，將標(biāo)準(zhǔn)溶液及試樣中咖啡因的保留時(shí)間及峰面積列于表中。保留時(shí)間tRmin峰面積AmVs標(biāo)準(zhǔn)溶液20ugmL標(biāo)準(zhǔn)溶液40ugmL標(biāo)準(zhǔn)溶液80ugmL標(biāo)準(zhǔn)溶液160ugmL標(biāo)準(zhǔn)溶液320ugmL可口可