微生物大小及數(shù)量的測(cè)定

1、1微生物大小及數(shù)量的測(cè)定微生物大小及數(shù)量的測(cè)定09級(jí)生科一班安明玉（200900140001）同組者：陳汶燦、陳肖然、程彬、高琳璐、秦瑤一、一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康膶?shí)驗(yàn)?zāi)康?.學(xué)習(xí)并掌握用測(cè)微尺測(cè)定微生物細(xì)胞大小的方法。2.了解血細(xì)胞計(jì)數(shù)板的構(gòu)造及計(jì)數(shù)原理。3.掌握使用血細(xì)胞計(jì)數(shù)板進(jìn)行微生物計(jì)數(shù)的方法。二、實(shí)驗(yàn)原理二、實(shí)驗(yàn)原理1.微生物大小測(cè)定原理微生物細(xì)胞的大小是微生物的形態(tài)特征之一，也是分類鑒定的依據(jù)之一。其測(cè)量工具有目鏡測(cè)微尺和鏡臺(tái)測(cè)微尺。鏡

2、臺(tái)測(cè)微尺是中央部分刻標(biāo)準(zhǔn)刻尺的載玻片，其尺度總長(zhǎng)為1mm，精確分為10個(gè)大格，每個(gè)大格又分為10個(gè)小格，共100小格，每一小格長(zhǎng)度為0.01mm，即10μm。如圖1。圖1鏡臺(tái)測(cè)微尺中央部分及鏡臺(tái)測(cè)微尺校正目鏡測(cè)微尺目鏡測(cè)微尺，如圖2，是一塊可放入接目鏡內(nèi)的圓形小玻片，其中央有精確的等分刻度，一般有等分為50小格和100小格兩種。測(cè)量時(shí)，需將其放在接目鏡中的隔板上，用以測(cè)量經(jīng)顯微放大后的細(xì)胞物象。由于不同顯微鏡或不同的目鏡和物鏡組合放大倍

3、數(shù)不同，目鏡測(cè)微尺每小格在不同條件下所代表的實(shí)際長(zhǎng)度也不一樣。圖2目鏡測(cè)微尺2.血球計(jì)數(shù)板測(cè)定微生物數(shù)量的原理血細(xì)胞計(jì)數(shù)板是一塊特制的載玻片，其上由4條槽構(gòu)成3個(gè)平臺(tái)。中間較寬的平臺(tái)又被一段橫槽隔成兩半，每一邊的平臺(tái)上各刻有一個(gè)方格網(wǎng)，每個(gè)方格網(wǎng)共分9個(gè)大方格，中間的大方格即為計(jì)數(shù)室。計(jì)數(shù)室的刻度一般有兩種規(guī)格，一種是一個(gè)大方格分成25個(gè)中3用同樣的方法換成高背景和油鏡進(jìn)行校正，分別測(cè)出在高倍鏡和油鏡下，兩重合線之間兩尺分別所占的格數(shù)。

4、(注意：觀察時(shí)光線不宜過強(qiáng)，否則難以找到鏡臺(tái)微尺的刻度；換高倍鏡和油鏡校正時(shí)，務(wù)必十分細(xì)心，防止接物鏡壓壞鏡臺(tái)微尺和損壞鏡頭。)（3）對(duì)枯草芽孢桿菌用簡(jiǎn)單染色法制片（4）菌體大小的測(cè)定①枯草芽孢桿菌大小的測(cè)定目鏡測(cè)微尺校正完畢后，取下鏡臺(tái)測(cè)微尺，換上細(xì)菌染色制片。先用低倍鏡和高倍鏡找到標(biāo)本后，換油鏡測(cè)枯草芽孢桿菌的寬度和長(zhǎng)度。測(cè)定時(shí)，通過轉(zhuǎn)動(dòng)目鏡微尺和移動(dòng)載玻片，測(cè)出細(xì)菌直徑或?qū)捄烷L(zhǎng)所占目鏡測(cè)微尺的格數(shù)。最后將所測(cè)得的格數(shù)乘以目鏡測(cè)微尺

5、（用油鏡時(shí)）每格所代表的長(zhǎng)度，即為該菌的實(shí)際大?、诮湍妇笮〉臏y(cè)定測(cè)定酵母菌時(shí)，先將酵母菌培養(yǎng)物制成水浸片，然后用高倍鏡或油鏡測(cè)出寬和長(zhǎng)各占目鏡微尺的格數(shù)，最后，將測(cè)得的格數(shù)乘上目鏡微尺（用高倍鏡或油鏡時(shí)）每格所代表的長(zhǎng)度，即為酵母菌的實(shí)際大?。ㄗ⒁猓嚎蛇x擇有代表性的3~5個(gè)細(xì)胞進(jìn)行測(cè)定；細(xì)菌的大小需用油鏡測(cè)定，以減少誤差）（5）測(cè)定完畢，取出目鏡測(cè)微尺后將接目鏡放回鏡筒，再將目鏡測(cè)微尺和鏡臺(tái)測(cè)微尺分別用擦鏡紙擦拭干凈，放回盒內(nèi)保存。2

6、、顯微鏡直接計(jì)數(shù)法（1）鏡檢計(jì)數(shù)室在加樣前，先對(duì)計(jì)數(shù)板的計(jì)數(shù)室進(jìn)行鏡檢。若有污物，則需清洗，吹干后才能進(jìn)行計(jì)數(shù)。（2）加樣品將清潔干燥的血細(xì)胞計(jì)數(shù)板蓋上蓋玻片，再用無菌的毛細(xì)滴管將搖勻的釀酒酵母菌懸液由蓋玻片邊緣滴一小滴，讓菌液沿縫隙靠毛細(xì)滲透作用自動(dòng)進(jìn)入計(jì)數(shù)室，一般計(jì)數(shù)室均能充滿菌液（注意：要搖勻菌液；加樣時(shí)計(jì)數(shù)室不可有氣泡產(chǎn)生）（3）顯微鏡計(jì)數(shù)5min，然后將血細(xì)胞計(jì)數(shù)板置于顯微鏡載物臺(tái)上，先用低倍鏡找到計(jì)數(shù)室所在位置，然后換成高倍

7、鏡進(jìn)行計(jì)數(shù)。調(diào)節(jié)顯微鏡光線的強(qiáng)弱適當(dāng)，對(duì)于用反光鏡采光的顯微鏡還要注意光線不要偏向一邊，否則視野中不易看清楚計(jì)數(shù)室方格線，或只見豎線或只見橫線。（4）清洗血細(xì)胞計(jì)數(shù)板完畢后，將血細(xì)胞計(jì)數(shù)板在水龍頭用水沖洗干凈，切勿用硬物洗刷，洗完后自行晾干，鏡檢，觀察每小格內(nèi)是否有殘留菌體或其他沉淀物。若不干凈，則必須重復(fù)洗滌至干凈為止。五、實(shí)驗(yàn)結(jié)果五、實(shí)驗(yàn)結(jié)果1菌體大小的測(cè)量(1)目鏡測(cè)微尺校正結(jié)果物鏡物鏡倍數(shù)目鏡測(cè)微尺格數(shù)鏡臺(tái)測(cè)微尺格數(shù)目鏡測(cè)微尺每