藥物的雜質(zhì)檢查藥物分析學(xué)習考試

1、1,,,第三章 藥物的雜質(zhì)檢查,第一節(jié) 概述第二節(jié) 一般雜質(zhì)的檢查方法第三節(jié) 特殊雜質(zhì)的檢查方法,第三章,2,,,第一節(jié) 概述,第三章,一. 藥物的純度概念與要求,藥物的純度與雜質(zhì)藥物的純度：指藥物的純凈程度。藥物的雜質(zhì)：任何影響藥品純度的物質(zhì)。,3,,2 .控制藥物中雜質(zhì)的意義研究發(fā)現(xiàn)，藥物在臨床使用中產(chǎn)生的不良反應(yīng)除了與藥品本身的藥理活性有關(guān)外，有時也藥品中存在的雜質(zhì)也有很多關(guān)系。例如：青霉素類抗生素-聚合物-引起的

2、過敏反應(yīng)所以規(guī)范地進行雜質(zhì)的研究，并將其控制在一個安全，合理的限度范圍之內(nèi)，將關(guān)系到藥品的質(zhì)量可控性和安全性,4,第三章,評定藥物的純度：綜合考慮藥物的性狀、雜質(zhì)檢查和含量測定。雜質(zhì)檢查 是控制藥物純度非常重要的方面。藥物的純度檢查也稱為雜質(zhì)檢查。,5,第一節(jié) 概 述,3. 藥用規(guī)格與試劑規(guī)格,共同點：均規(guī)定所含雜質(zhì)的種類和限量. 不同點：符合純度要求的藥品為藥用規(guī)格,主要從 用藥安全、有效和對藥物穩(wěn)定性等方面 考慮

3、,只有合格品和不合格品.,6,,,第三章,第一節(jié) 概 述—藥物的純度要求,b.化學(xué)試劑的規(guī)格——是從雜質(zhì)可能引起的化學(xué)變化對使用的影響加以規(guī)定,它不考慮雜質(zhì)對生物體的生理作用及毒副作用.化學(xué)試劑——一般分為4個等級〔基準試劑、優(yōu)級純或特種試劑(光譜純、色譜純)、分析純和化學(xué)純〕,7,,,第三章,例如：硫酸鋇（BaSO4）試劑規(guī)格 對酸溶性鋇鹽不做檢查. 檢查：氯化物、鐵、灼燒失重等藥用規(guī)格 如存在酸溶性鋇鹽則導(dǎo)致

4、 醫(yī)療事故. 檢查：酸溶性鋇鹽、重金屬、砷鹽等,化學(xué)試劑不能代替藥品使用,8,,,第三章,二. 雜質(zhì)的來源與種類,藥品質(zhì)量標準中雜質(zhì)系指在按照國家有關(guān)藥品監(jiān)督管理部門依法批準的規(guī)定工藝和規(guī)定原輔料生產(chǎn)的藥品中，由其生產(chǎn)工藝或原料帶入的雜質(zhì)，或者貯存過程中產(chǎn)生的雜質(zhì)。雜質(zhì)的主要來源：生產(chǎn)過程中引入 貯存過程中產(chǎn)生,9,5. 合成工藝中使用的設(shè)備、器皿可能

5、引入重金屬、砷鹽等。,1.合成工藝中未反應(yīng)完全的原料、 合成中間體、副產(chǎn)物等；2. 生產(chǎn)制劑中原輔料帶入的雜質(zhì),3.低效、無效以及有毒異構(gòu)體和多晶型4.殘留的試劑及有機溶劑；,（一） 生產(chǎn)過程中引入的雜質(zhì),10,第三章,例： 阿斯匹林由水楊酸乙酰化制得,11,,,第三章,制劑過程中可能產(chǎn)生新物質(zhì),如： 制備過程中加熱滅菌鹽酸普魯卡因注射劑 進一步脫羧轉(zhuǎn)化

6、對氨基苯甲酸 苯胺 引起毒性反應(yīng),,,,12,第三章,(1)貯存的條件不當,(2)包裝不當,(二） 貯藏過程中引入的雜質(zhì),13,,第三章,14,,第三章,例2： 四環(huán)素在酸性條件下可發(fā)生差向異構(gòu)化反應(yīng), 生成差向四環(huán)素(毒性高、活性低),15,,第三章,藥品質(zhì)量標準中的雜質(zhì)不包括變更生產(chǎn)工藝或變更原輔料而產(chǎn)生的新的雜質(zhì)；不包括摻入或污染的外來物質(zhì),注意的幾點問題,16,

7、,第三章,按來源可分為,一般雜質(zhì) ——指在多種藥物的生產(chǎn)和貯存過程中容易引入的雜質(zhì).如：酸、堿、水分、氯化物、砷鹽等。,特殊雜質(zhì) ——指在特定藥物的生產(chǎn)和貯藏過程中引入的雜質(zhì)，包括：化學(xué)反應(yīng)的前體、中間體、付產(chǎn)物和降解產(chǎn)物等。,（三）雜質(zhì)的種類,17,,第三章,必須重視異構(gòu)體和多晶型對藥物有效性和安全性的影響. 控制藥物中低效、無效以及具有毒性的異構(gòu)體和多晶型。,18,按理化性質(zhì)分為,1.有機雜質(zhì)工藝中引入的雜質(zhì)

8、和降解產(chǎn)物等，可能是已知的或未知的、揮發(fā)性的或不揮發(fā)性的。由于這里雜質(zhì)的化學(xué)結(jié)構(gòu)一般與活性成分相似或具淵源關(guān)系，故通常又稱為有關(guān)物質(zhì)。2. 無機雜質(zhì)指在原料藥劑制劑生產(chǎn)或傳遞中產(chǎn)生的雜質(zhì)，這些雜質(zhì)通常是已知的，主要包括：反應(yīng)試劑、配位體、催化劑、重金屬、其他殘留的金屬、無機鹽、助濾劑、活性碳等。,19,3. 殘留溶劑指在原料藥及制劑生產(chǎn)過程中使用的有機溶劑。4. 對映異構(gòu)體,20,,第三章,1 雜質(zhì)限量,——在不影響藥物療效、穩(wěn)

9、定性及不發(fā)生毒性的前提下,藥物中所含雜質(zhì)的最大允許量.,百分之幾表示( %)百萬分之幾表示( ppm),限量表示方 法,三. 雜質(zhì)的限量,21,,第三章,2 雜質(zhì)限量檢查方法,對照法靈敏度法比較法,雜質(zhì)限量的控制方法分為：限量檢查法，雜質(zhì)含量測定法（外標法）,22,操作:平行原則.,管2（對照管）,,管1（樣品管）,,第三章,取一定量被檢雜質(zhì)的標準溶液與一定量供試品在相同條件下處理后, 比較反應(yīng)結(jié)果, 判斷供試液中所含雜質(zhì)是

10、否符合規(guī)定.,（1）對照法,23,在供試品溶液中加入一定量的試劑,在試驗條件下反應(yīng),不得出現(xiàn)正反應(yīng)，判斷供試品中雜質(zhì)是否符合規(guī)定。,,第三章,如：純化水中氯化物的檢查,5滴 1mL,（2）靈敏度法,24,,取一定量供試品,在規(guī)定條件下測定待檢雜質(zhì)的參數(shù)（吸光度，薄層斑點，峰面積等） 與規(guī)定限量比較, 判斷供試品中雜質(zhì)限量是否符合規(guī)定.,第三章,（3）比較法,25,,例：腎上腺素中酮體的檢查,第三章,,供試

11、品液(2.0mg/ml),鹽酸溶液,樣品,,(0.05mol/L),,A310nm,規(guī)定：A310nm≯0.05,26,例如：對照法寫成：,,3 限量計算公式,第三章,27,對于制劑，雜質(zhì)限量表示為標示百分含量，如鹽酸普魯卡因注射液中，對氨基苯甲酸的限量是不低于標示量的1.2%。,28,注意: ①單位是否統(tǒng)一 ②供試品取量部分還是整體 ③已知其中三個量可計算另一個量,,第三章,29,,例1. 對乙酰氨基酚中

12、氯化鈉的檢查,,,,對照品溶液: 標準NaCl溶液(10?gCl-/ml),方法：取5.0ml?同法操作比較,濁度不得更大.計算：氯化物限量是多少(% )？,第三章,30,規(guī)定：含重金屬≯百萬分之五(5ppm)計算：應(yīng)取標準鉛溶液(10?gPb/ml)多少ml？,例2. 葡萄糖中重金屬的檢查,第三章,方法：,31,一氯化物檢查法,1. 原理　 利用氯化物在硝酸酸性條件下與硝酸銀反應(yīng), 生成氯化銀白色渾濁液,

13、與一定量標準氯化鈉溶液在相同條件下產(chǎn)生的氯化銀渾濁程度比較, 濁度不得更大. Cl-+Ag+ H+ AgCl,,,第三章,32,2．操作方法,樣品管,對照管,第三章,葡萄糖中氯化物檢查,1.0mL,用水稀釋至50mL,6.0mL,0.60g,0.01%,(濃度：10?gCl－/ml),一氯化物檢查法,33,3. 結(jié)果觀察方法,,黑色的背景上 自上而下的觀察,,對照管,樣品

14、管,34,4．注意事項及討論,,平行試驗加稀硝酸的目的氯化物的最適檢測濃度范圍放置5min的目的供試品溶液有色時的處理方法有機藥物中有機氯雜質(zhì)排除主藥的干擾,第三章,35,⑤ 供試品溶液有色時的處理方法,內(nèi)消色法如氯法齊明（棕紅色）中氯化物的檢查.,第三章,,,除去樣品中的氯,36,在堿性溶液中加熱使水解，使有機氯雜質(zhì)形成氯化物，再依法檢查。,⑥藥物中有機氯雜質(zhì),37,⑦排除主藥的干擾,碘中氯化物和溴化物的檢查

15、取本品1.0g，置乳缽中，分次加水40ml研細后，過濾，過濾中加少量鋅粉使褪色；分取溶液10ml，依次緩緩加氨試液5ml與硝酸銀試液5ml，放置5分鐘，過濾，濾液移至50ml納氏比色管中，加水使成40ml，滴加硝酸使遇石蕊試紙顯中性反應(yīng)后，再加硝酸1ml與水適量使成50ml，與對照液比較，不得更濃。,38,二重金屬檢查法,重金屬系指在實驗條件下能與硫代乙酰胺或硫化鈉作用顯色的金屬雜質(zhì). 如：Ag、Pb、Hg等.

16、 重金屬存在影響藥物的穩(wěn)定性及安全性. 鉛易在體內(nèi)積蓄中毒,以Pb為代表.,第三章,1.重金屬的概念,39,二重金屬檢查法,適用于溶于水、稀酸和乙醇的藥物.,第三章,第一法 硫代乙酰胺法,40,二重金屬檢查法,1 原 理,,41,甲管,乙管,丙管,2 操作方法,42,判斷結(jié)果：當丙管的顏色不淺于甲管時，乙管的顏色不得深于甲管。當丙管的顏色淺于甲管時，應(yīng)取樣按第二法重新檢查。如在甲管中滴加稀焦糖

17、溶液或其它無干擾的有色溶液，仍不能使顏色一致時，應(yīng)取樣按第二法檢查。,43,,3.結(jié)果觀察：,,對照管,樣品管,44,二重金屬檢查法,①  標準鉛溶液濃度②  硫代乙酰胺試液③  溶液的pH④  供試品溶液有顏色時的處理⑤  干擾物的排除方法,第三章,4．討論,45,二重金屬檢查法,①  標準鉛溶液濃度,適

18、宜目視比色的濃度范圍:每27ml溶液中含10μg~20 μg相當于：鉛標準溶液含Pb2+ 10?g/ml ： 1~2ml,第三章,46,二重金屬檢查法,②  硫代乙酰胺試液,H2S試液：惡臭和毒性；不穩(wěn)定；易被空氣氧化而析出硫；濃度難以控制.,第三章,改用硫代乙酰胺為顯色劑（95版藥典）硫代乙酰胺在實驗條件下水解產(chǎn)生H2S,與重金屬離子反應(yīng).,47,二重金屬檢查法,pH在3.0~3.5時,

19、呈色較完全.酸度增大, 呈色變淺甚至不呈色.,第三章,溶液的pH對于金屬離子與硫化氫呈色影響較大.,③  溶液的pH,48,二重金屬檢查法,④ 供試品溶液有顏色時的處理,第三章,a.外調(diào)色法 b.內(nèi)消色法,49,二重金屬檢查法,⑤ 干擾物的排除方法,干擾：弱酸性溶液中Fe3+氧化H2S析出S,產(chǎn)生混濁影響檢查.,供試品中微量高價Fe3+存在,第三章,如：葡萄糖酸亞鐵中重

20、金屬的檢查.,排除：加入抗壞血酸使Fe3+還原為Fe2+.,50,二重金屬檢查法,,1.原理 　　供試品先熾灼破壞后,使有機結(jié)合的重金屬游離, 再按第一法檢查.,第三章,第二法 熾灼后硫代乙酰胺法,適用于含芳環(huán)、雜環(huán)以及不溶于水、稀酸、乙醇的有機藥物.,51,二重金屬檢查法,2. 操作,第三章,緩緩熾灼 放冷 H2SO4 0.5-1.0ml供試品 炭化

21、 加熱 HNO3 500-600℃H2SO4 除盡 放冷 完全灰化 蒸干HCl 2ml 水15ml

22、 中性 甲管 蒸干 氨試液按照第一法操作,,,,,,,,,,52,供試品試液 蒸干 加醋酸鹽緩沖液+水 微熱溶解后 移至乙管 加標準鉛溶液+水 乙管甲管顯示的顏色不得深于乙管,,,,,,,53,二重金屬檢查法,a. H2SO4炭化使有機結(jié)合的金屬釋放；并成硫酸鹽,第三章,3. 討　論,b. HNO3使得

23、到殘渣進一步氧化，破壞完全；要除盡氧化氮。c. 熾灼溫度嚴格控制：500-600℃；,d. HCl使重金屬變成可測定的鹽酸鹽。,54,二重金屬檢查法,e. NH3 T.S （用酚酞）中和多余的鹽酸；,第三章,3. 討　論,f. 含鈉鹽或氟的有機藥物在熾灼時 改用鉑坩堝或硬質(zhì)玻璃 (瑪瑙) 蒸 發(fā)皿.如：鹽酸氟奮乃靜中重金屬檢查,55,二重金屬檢查法,,,第三章,第三法 硫化鈉法,顯色劑

24、,1. 原理,56,二重金屬檢查法,,適用于難溶于稀酸但能溶于堿性溶液的藥物 如：磺胺類與巴比妥類藥物,第三章,57,二重金屬檢查法,,3. 討論,Na2S 對玻璃有腐蝕性,久置產(chǎn)生絮狀物, 應(yīng)臨用新配.,第三章,2. 方法,58,(二) 白田道夫法,(一) 古蔡氏法,(三) Ag-DDC法,第三章,三砷鹽檢查法,59,三砷鹽檢查法,(一) 古蔡氏法（Gutzeit）,1. 原 理,60

25、,第三章,C,三砷鹽檢查法,61,3　操作,供≯標,62,4. 討 論,1)試劑的作用,a. KI的作用——還原劑：As5+→As3+,,第三章,三砷鹽檢查法,63,第三章,三砷鹽檢查法,Ⅰ. (As5+→As3+) 加快反應(yīng)速度,b.酸性SnCl2的作用,64,Ⅱ. 將I2再還原為I-，促進AsH3不斷生成,65,第三章,三砷鹽檢查法,Ⅲ. SnCl2與Zn粒表面形成Zn-Sn齊

26、 ——起去極化作用,使氫氣均勻而連續(xù)地發(fā)生.,66,第三章,三砷鹽檢查法,c.PbAc2棉花的作用,——排除硫化物的干擾,67,a. 供試品是硫化物,亞硫酸鹽,硫代硫酸鹽,排除方法：加入濃硝酸處理,第三章,干擾物的排除,三砷鹽檢查法,68,Fe3+能消耗還原劑(KI、SnCl2), 并能氧化砷化氫.,排除方法：先加酸性SnCl2試液使 Fe3+ → Fe2+,第三章,三

27、砷鹽檢查法,b. 供試品是鐵鹽(Fe3+),69,c. 供試品是環(huán)狀結(jié)構(gòu)的有機藥物 形成共價鍵結(jié)合的砷化物,解決方法：進行有機破壞 ——酸破壞法或堿破壞法,第三章,三砷鹽檢查法,70,堿破壞法　　a 加入氫氧化鈣 500-600 ?C灼燒 　例：酚磺酞　　b 加入無水碳酸鈉堿融 　　　　例：苯甲酸鈉,第三章,三砷鹽檢查法,酸破

28、壞法 加稀硫酸與溴化鉀溴試液 例：葡萄糖中砷鹽檢查,71,古蔡氏法特點,第三章,三砷鹽檢查法,72,第三章,三砷鹽檢查法,(二) 白田道夫法,對含銻藥物中砷鹽的檢查不能用古蔡氏法,需用白田道夫法.,73,第三章,三砷鹽檢查法,1. 原 理,SnCl2在HCl中能將砷鹽還原為棕褐色的膠態(tài)砷, 與一定量的標準砷溶液按同法處理后進行比較, 判斷供試品中砷鹽的限量.,74,2. 白田

29、道夫法的特點,優(yōu)點：不受Sb干擾,缺點：靈敏度低 ——20?gAs2O3/10ml 加入少量HgCl2,靈敏度提高至2 ?gAs2O3（1.5 ?gAs）/10ml.,第三章,三砷鹽檢查法,75,(三) 二乙基二硫代氨基甲酸銀法 (Ag-DDC法) silver diethyldithiocarbamate,第三章,本法不僅用于砷鹽

30、的限量檢查, 而且可用作微量砷鹽的含量測定.,76,第三章,1. 原 理,Ag－DDC溶液,77,2. Ag-DDC法的特點,a 靈敏度高 0.5 ?gAs/30ml b 可目視或儀器測定,還可定量 c Sb干擾?。?00μg）,第三章,三砷鹽檢查法,78,四鐵鹽檢查法,第一法 硫氰酸鹽法,1. 原理 鐵鹽在鹽酸酸性溶液中與硫氰酸銨生成紅色可溶性硫氰酸鐵配離子,與一

31、定量標準鐵溶液用同法處理后所呈的顏色進行比較.,,第三章,79,四鐵鹽檢查法,,,,,第三章,2. 操作,?,?,?,供試液管與對照液管顏色不一致怎么辦?,80,六熾灼殘渣檢查法,1、熾灼殘渣定義,81,2. 方法,,82,恒重：兩次熾灼的重量差異≯0.3mg,熾灼至恒重的第二次稱重應(yīng)在繼續(xù)熾灼30分鐘后進行。,灰分= 殘渣及坩堝重 - 空坩堝重,83,,問題：如果殘渣需進行重金屬檢查需加熱溫度是多少？,84,七

32、干燥失重,1、定義：藥物在規(guī)定條件下，經(jīng) 干燥后所減失的量。,,干燥至恒重：兩次干燥后的重量差異≯0.3mg,第二次稱重應(yīng)在實驗條件下繼續(xù)干燥1hr后進行。,85,七干燥失重,2、干燥失重的內(nèi)容物：水分、揮發(fā)性物質(zhì)等。,3、測定方法,常壓恒溫干燥法：一般烘箱，105℃干燥至恒重。適用于受熱穩(wěn)定的藥物。,86,七干燥失重,,干燥劑干燥法：常用干燥劑：變色硅膠、P2O5 、硫酸

33、適用于受熱分解或易揮發(fā)的藥物。,減壓干燥法與恒溫減壓干燥法：用減壓干燥器、恒溫減壓干燥箱。 適用于mp較低，受熱不穩(wěn)定，水分難除掉。,87,,,,在程序控制溫度的情況下,測定物質(zhì)的物理、化學(xué)變化與溫度關(guān)系的一類儀器分析方法. 研究藥物的多晶型、純度、熱穩(wěn)定性等,七干燥失重,熱分析法,88,(一) 熱重分析法（TGA） (二) 差示熱分析法（DTA） (三) 差示掃描量熱法（DSC）,89,,,八水

34、分測定法,Ch.P收載測定藥物水分方法有：費休氏法和甲苯測定法 費休氏法可準確測定藥物中的結(jié)晶水、吸附水和游離水。 應(yīng)用具有β－內(nèi)酰胺和酰胺結(jié)構(gòu)的藥物及有引濕性的藥物。,90,1. 原理：,2. 計算,供試品水分的含量％,91,A-----供試品所消耗費休氏試液的體積（ml）B-----為空白所消耗費休氏試液的體積（ml）F-----為每1ml費休氏液相當于水的重量（mg）W----為

35、供試品的重量,92,討論：費休氏試液中無水吡啶、無水甲醇的作用。 加入無水吡啶能定量地吸收產(chǎn)物HI和SO3使反應(yīng)向正方向進行;無水甲醇使硫酸酐吡啶穩(wěn)定,93,2. F值用一定量的水標定;3. 終點指示:碘顏色的變化（淡黃→紅棕色），永停滴定法,94,,,,九殘留溶劑測定法,藥物中的殘留溶劑系指在原料藥或輔料的生產(chǎn)中，以及在制劑制備過程使用的，但在工藝過程中未能除去的有機溶劑。,Ch.P2005采用GC

36、法檢查殘留有機溶劑,95,對三類有機溶劑規(guī)定了限量1、色譜條件：采用的色譜柱：填充柱 毛細管柱,96,檢測器： 火焰離子化檢測器（FID) 電子捕獲檢測器(ECD)前者是常用的，對含碳氫的有機化合物；后者對含鹵素的殘留溶劑。,97,2. 系統(tǒng)適應(yīng)性實驗理論板數(shù)：填充柱大于1000 毛細管柱大于5000分離度大于1.5重復(fù)性:n=5，內(nèi)標法 RSD

37、≤ 5％ 外標法 RSD ≤ 10％,98,,,,八有機殘留溶劑,溶液直接進樣法毛細管頂空進樣法毛細管頂空進樣程序升溫法,適用于揮發(fā)性大的組分；樣品處理簡單，可避免供試品中非揮發(fā)性組分對色譜柱的污染。,3. 進樣方法：,99,100,,,第三章,特殊雜質(zhì),是指在該藥物生產(chǎn)和貯藏過程中,根據(jù)其生產(chǎn)方法、工藝條件及藥物本身結(jié)構(gòu)性質(zhì)可能引入的特有雜質(zhì). 阿司匹林——水楊酸

38、 鹽酸普魯卡因注射液——對氨基苯甲酸,101,特殊雜質(zhì)的檢查法,二、光譜分析法,一、色譜分析法,三、物理分析法,四、化學(xué)分析法,102,色譜法 (一) 薄層色譜法(TLC) (二) 高效液相色譜法(HPLC) (三)氣相色譜法(GC) （四）毛細管電泳法（HPCE）,一色譜法,103,根據(jù)藥物與雜質(zhì)對吸附劑的吸附或?qū)φ归_劑的解析能力不同(Rf值的差異), 加以分離和檢查.,一色譜法,(一)薄層

39、色譜法(TLC),104,一色譜法,本法靈敏、簡便、快速； 不需特殊的設(shè)備、費用低； 分離和鑒定同步進行.,1. TLC法特點,105,一色譜法,我國藥典2005年版一部 1146 個品種中薄層色譜鑒別方法 1532項。,106,2.薄層色譜法應(yīng)用1) 雜質(zhì)對照品法,——適用于雜質(zhì)已知并有雜質(zhì)對照品的情況. 方法 根據(jù)雜質(zhì)限量, 取供試品溶液和一定濃度的雜質(zhì)對照品溶液,分別點于同一

40、薄層板上展開,定位后進行檢查.,一色譜法,107,,例：鹽酸左旋咪唑中的“噻唑鹽酸鹽”檢查,供試品溶液：取本品配成0.10g/ml 雜質(zhì)對照品溶液： 0.50mg/ml 吸取上述兩種溶液各0.5μl點于同一硅膠G板展開劑：甲苯－甲醇－冰醋酸(45:8:4)顯色劑：碘蒸汽判斷：供試品中與對照品相應(yīng)的斑點≯對照品斑點,一色譜法,108,一色譜法,——適用于雜質(zhì)的結(jié)構(gòu)不能確定或無雜質(zhì)對照品的情況. 要求

41、供試品與所驗雜質(zhì)對顯色劑所顯顏色相同，靈敏度接近。,2)供試品溶液自身稀釋對照法,109,例：雙氫青蒿素中“有關(guān)物質(zhì)” 檢查供試液:用三氯甲烷配成：20mg/ml對照液:0.4mg/ml(供試液稀釋50倍)判斷:供試液的雜質(zhì)斑點數(shù)≯1個,且供試液的雜質(zhì)斑點顏色≯對照液主斑點顏色.,110,3). 雜質(zhì)對照法與供試品溶液自身稀釋對照法并用 當藥物中存在多個雜質(zhì)，已知雜質(zhì)有對照品，未知雜質(zhì)可用供試品溶液自身稀釋對照法。,11

42、1,,——選用質(zhì)量符合規(guī)定的與供試品相同的藥物作為對照品.,4) 標準藥物對照法,一色譜法,無適合的雜質(zhì)對照品；雜質(zhì)斑點顏色與主成分斑點的顏色有差異，難以判斷限量。,112,113,,(二) 高效液相色譜法(HPLC),特點 分離效能高、應(yīng)用范圍廣，能準確、快速、分離分析同時進行.,114,高效液相色譜儀簡圖,115,,,,慢中等快,色譜分離,116,,1. 峰面積歸一化法2. 不加校正因子的主成分自身對照法3.

43、加校正因子的主成分自身對照法4. 加校正因子的內(nèi)標法5. 外標法,117,1.不加校正因子的主成分自身對照法,本法的前提是假定雜質(zhì)與主成分的響應(yīng)因子基本相同。一般情況下，如雜質(zhì)與主成分的分子結(jié)構(gòu)相似，其響應(yīng)因子差別不會太大（0.9~1.1)S-供試品的對照品R-雜質(zhì)的對照品,118,,不加校正因子的主成分自身對照法,例：醋酸氫化可的松中“有關(guān)物質(zhì)”的檢查,供試品溶液：本品約17mg →50ml對照溶液：精密吸取1ml →1

44、00ml取對照溶液20μl進樣，調(diào)節(jié)靈敏度，使主峰為滿量程的40％精密量取上述二溶液，分別進樣20 μl,119,,記錄色譜圖三倍主峰的tR最大單個雜質(zhì)峰面積≯對照溶液主峰面積其他單個雜質(zhì)面積≯對照溶液主峰面積的1/2各雜質(zhì)峰面積的和≯對照溶液主峰面積的2倍,120,2.加校正因子的主成分自身對照法,相對響應(yīng)因子超出0.9-1.1范圍時，宜用雜質(zhì)對照品法計算含量，也可用加校正因子的主成分自身對照法。理想的定量方法為已知雜質(zhì)對照

45、品法與未知雜質(zhì)不加校正因子的主成分自身對照法兩者的結(jié)合。,121,,（1）建立方法按內(nèi)標法計算校正因子，直接載入質(zhì)量標準，用于校正雜質(zhì)的實測峰面積。(2)雜質(zhì)的測定按雜質(zhì)限量要求配制對照溶液，調(diào)劑檢測靈敏度，使對照液的主成分峰為滿量程的10～25%，取供試品分析，時間為主峰保留時間的2～3倍。,122,,(三)氣相色譜法(GC),檢查方法:同高效液相色譜法.,——用于藥物中揮發(fā)性雜質(zhì)的檢查, 如藥物中殘留溶劑等.,123,,

46、(一) 紫外分光光度法 （二）紅外光譜法 （三）原子吸收分光光度法,二、光譜法,124,腎上腺素,腎上腺酮,紫外分光光度法——利用藥物和待檢雜質(zhì)對光選擇吸收性質(zhì)的差異進行.,例1: 腎上腺素中酮體的檢查,125,例：腎上腺素中腎上腺酮的檢查,126,規(guī)定：A310nm≯0.05,2. 方法,3. 限量計算 腎上腺酮的,127,紅外分光光度法,主要用于藥物中無效或低效晶型的檢查甲苯咪唑有三種晶型：A,B,CA為無效

47、晶型，C為有效晶型用含A晶型10%的甲苯咪唑為對照品控制A晶型的量 ≯對照品,128,原子吸收分光光度法,主要用于金屬雜質(zhì)的檢測標準加入法對照液：供試品+限度量的待測元素溶液供試品：讀數(shù)b對照液：讀數(shù)ab＜（a-b）合格,129,,例：乙醇中不揮發(fā)物的檢查.,三物理分析法,1、 臭味差異,2、揮發(fā)性差異,130,,根據(jù)藥物與雜質(zhì)溶解度的差異　　　例