異煙肼片及葡萄糖注射液的鑒別

1、藥物分析實(shí)驗(yàn),,目錄,第一部分：藥物分析實(shí)驗(yàn)?zāi)康募耙蟮诙糠郑簩?shí)驗(yàn)一、異煙肼片及葡萄糖注射液的鑒別、雜質(zhì)檢查 和含量 測(cè)定實(shí)驗(yàn)二、阿司匹林腸溶片的鑒別和含量測(cè)定實(shí)驗(yàn)三、復(fù)方磺胺甲噁唑片的含量測(cè)定實(shí)驗(yàn)四、三種中藥制劑中黃芩的鑒別實(shí)驗(yàn)五、高效液相色譜法測(cè)定天麻藥材的天麻素含量,1,藥物分析實(shí)驗(yàn)概述及要求,藥物分析是一門綜合性的應(yīng)用學(xué)科。藥物分析實(shí)驗(yàn)是藥物分析課程的重要組成部分，是理論聯(lián)系實(shí)際的重要環(huán)節(jié)。,加深學(xué)生

2、對(duì)藥物分析基本理論與概念的理解培養(yǎng)學(xué)生具有研究藥品質(zhì)量的基本思路和方法獲得從事藥品質(zhì)量分析研究與檢驗(yàn)的基本操作技能,學(xué)生應(yīng)達(dá)到以下要求：,1.全面了解藥物分析工作的程序及各環(huán)節(jié)的要求。2 .掌握藥物分析常用方法的原理及操作技術(shù)。3.能運(yùn)用本課程基本理論及有關(guān)專業(yè)知識(shí)分析和解決 實(shí)驗(yàn)中的問題。4.培養(yǎng)實(shí)事求是的科學(xué)態(tài)度和嚴(yán)謹(jǐn)認(rèn)真的工作作風(fēng)。,實(shí)驗(yàn)要求,學(xué)生實(shí)驗(yàn)前必須預(yù)習(xí)，明確實(shí)驗(yàn)?zāi)康?，了解?shí)驗(yàn)內(nèi)容與方法

3、，考慮實(shí)驗(yàn)中應(yīng)注意的事項(xiàng)及安排實(shí)驗(yàn)的進(jìn)程。實(shí)驗(yàn)中應(yīng)認(rèn)真操作，仔細(xì)觀察實(shí)驗(yàn)現(xiàn)象并加以分析，作好原始記錄，認(rèn)真分析實(shí)驗(yàn)結(jié)果，力求做出準(zhǔn)確可靠的結(jié)論。應(yīng)遵守課堂紀(jì)律和實(shí)驗(yàn)室規(guī)則，注意安全、保持整潔。,實(shí)驗(yàn)報(bào)告的寫作方法及要求,寫作方法結(jié)構(gòu)完整、條理分明、文字簡(jiǎn)練、書寫工整、措辭注意科學(xué)性和邏輯性，盡量使用科學(xué)術(shù)語。,,實(shí)驗(yàn)題目 突出實(shí)驗(yàn)的主要內(nèi)容實(shí)驗(yàn)?zāi)康?言簡(jiǎn)意賅的說明實(shí)驗(yàn)預(yù)期達(dá)到的結(jié)果實(shí)驗(yàn)藥品及儀器實(shí)驗(yàn)方法

4、 按照實(shí)驗(yàn)教材上的步驟以及自己 實(shí)際操作的步驟書寫（原始記錄）實(shí)驗(yàn)結(jié)果與討論 實(shí)驗(yàn)報(bào)告最重要的部分，包括實(shí)驗(yàn)原始記錄及實(shí)驗(yàn)后進(jìn)過歸納的結(jié)果思考題,原始記錄,實(shí)驗(yàn)環(huán)境：日期、室溫、濕度實(shí)驗(yàn)藥品：實(shí)驗(yàn)方法：稱量記錄 滴定記錄實(shí)驗(yàn)現(xiàn)象：顏色 氣泡 渾濁 沉淀實(shí)驗(yàn)記錄本 尊重實(shí)驗(yàn)事實(shí)及時(shí)做好完整確切的記錄 鋼筆或圓珠筆書寫 字體端正 （手上 紙條 其他本子上 不能再腦子里暫記）

5、記錄有誤 不能涂改 雙線劃去,,實(shí)驗(yàn)討論：應(yīng)針對(duì)實(shí)驗(yàn)所觀察的現(xiàn)象與結(jié)果，聯(lián)系課堂講授的理論知識(shí)進(jìn)行分析和討論，切不可離開實(shí)驗(yàn)結(jié)果去空談理論，抓住重點(diǎn)。判斷實(shí)驗(yàn)結(jié)果是否為預(yù)期的，如果非預(yù)期應(yīng)分析其可能的原因，應(yīng)指出實(shí)驗(yàn)中的不足和存在的問題。,,實(shí)驗(yàn)結(jié)論（1）結(jié)論包括：檢驗(yàn)依據(jù) 檢驗(yàn)結(jié)果（2）全項(xiàng)檢驗(yàn)或部分項(xiàng)目檢驗(yàn)結(jié)論1.本品按《 》檢驗(yàn)，結(jié)果符合規(guī)定（或不符合規(guī)定）2.本品按《 》檢驗(yàn)上述項(xiàng)目，結(jié)果

6、符合規(guī)定（只檢驗(yàn)少數(shù)項(xiàng)目）3.本品按《 》檢驗(yàn)，除xxxx項(xiàng)未檢外，其他項(xiàng)目符合規(guī)定,如：阿司匹林腸溶片的鑒別和含量測(cè)定,一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?. 掌握水楊酸類藥物的鑒別反應(yīng)實(shí)驗(yàn)原理。2. 掌握比色法檢查阿司匹林片劑中游離水楊酸的實(shí)驗(yàn)原理。3. 掌握兩步滴定法測(cè)定阿司匹林片劑中藥物含量的實(shí)驗(yàn)原理。 二、實(shí)驗(yàn)原理（按以下三部分內(nèi)容書寫，不必拘泥于講義，簡(jiǎn)煉、準(zhǔn)確說明原理）1. 阿司匹林腸溶片鑒別的原理： 2. 游離水

7、楊酸雜質(zhì)限量檢查原理：3. 阿司匹林腸溶片中阿司匹林的含量測(cè)定原理：,,11,三、主要器材（寫所用藥品信息與最主要的儀器） 1 阿司匹林腸溶片的信息：生產(chǎn)廠家、規(guī)格、生產(chǎn)批號(hào)、生產(chǎn)日期、有效期2 試劑： 名稱 規(guī)格 2主要儀器：如分析天平、納氏比色管、容量瓶、酸式滴定管、堿式滴定管、滴定臺(tái)、水浴鍋等。,四、實(shí)驗(yàn)方法（按以下三部分內(nèi)容書寫，不能照抄講義，按實(shí)際操作情況書寫）1. 阿司匹林腸溶片鑒別的操作：2. 游離水楊酸

8、雜質(zhì)限量檢查的操作：3. 阿司匹林腸溶片中阿司匹林含量測(cè)定的操作：,五、結(jié)果與分析（按以下四部分內(nèi)容書寫）,1. 阿司匹林腸溶片的鑒別結(jié)果：即說明樣品管的變色情況。2. 游離水楊酸雜質(zhì)限量檢查的結(jié)果：即說明樣品管與對(duì)照管的顏色深淺情況。,3. 腸溶片中阿司匹林含量測(cè)定的結(jié)果與分析： 測(cè)定數(shù)據(jù)：V0 =？；V = ？ 結(jié)果計(jì)算：要求將各實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)代入下列公式，計(jì)算出阿司匹林腸溶片的標(biāo)示量百分?jǐn)?shù)。 （誤差較大的計(jì)算結(jié)

9、果，即標(biāo)示量百分?jǐn)?shù)不在90%-110%范圍內(nèi)的結(jié)果，需要認(rèn)真分析說明結(jié)果誤差較大的原因4. 通過鑒別、檢查及含量測(cè)定實(shí)驗(yàn)得出完整的結(jié)論：（如本品為阿司匹林腸溶片, 雜質(zhì)游離水楊酸的量低于限量，阿司匹林的含量與藥品標(biāo)示量基本一致。本品為合格產(chǎn)品。）,14,實(shí)驗(yàn)類型與學(xué)時(shí)要求,1.實(shí)驗(yàn)類型：驗(yàn)證性實(shí)驗(yàn) 設(shè)計(jì)性實(shí)驗(yàn)2.實(shí)驗(yàn)學(xué)時(shí)：30學(xué)時(shí) 五次實(shí)驗(yàn)3.教學(xué)方式：集中授課，分小組實(shí)驗(yàn),藥物分析實(shí)驗(yàn),實(shí)驗(yàn)一：異煙肼的雜質(zhì)檢

10、查和異煙肼片的含量測(cè)定,,,1 實(shí)驗(yàn)?zāi)康?,,2 實(shí)驗(yàn)原理,,,3 儀器與試劑,,,4 實(shí)驗(yàn)步驟,,,5 實(shí)驗(yàn)結(jié)果,,,6 注意事項(xiàng),,,7 思考題,,,17,,,,1,2,掌握薄層色譜檢查雜質(zhì)的實(shí)驗(yàn)原理和操作技能。,掌握溴酸鉀法測(cè)定異煙肼含量測(cè)定原理和操作方法。,,18,1.游離肼的

11、檢查異煙肼是一種不穩(wěn)定的藥物，可能會(huì)在制備時(shí)由原料引入游離肼，或在貯藏過程中降解產(chǎn)生游離肼.肼是一種誘變劑和致癌物質(zhì)，因此應(yīng)對(duì)其進(jìn)行限量檢查。本實(shí)驗(yàn)采用薄層色譜法檢查，利用藥物與雜質(zhì)利用異丙醇-丙酮（3 : 2）下展開后，肼能與對(duì)二甲氨基苯甲醛反應(yīng)生成腙顯色，進(jìn)行比較檢查。,2.實(shí)驗(yàn)原理,2.片劑的含量測(cè)定異煙肼結(jié)構(gòu)中的酰肼基團(tuán)具有還原性，在強(qiáng)酸性介質(zhì)中可與溴酸鉀定量反應(yīng)，反應(yīng)式如下：,,3.實(shí)驗(yàn)材料、試劑及儀器,,,,,試

12、劑,異煙肼片、硫酸肼、異丙醇、丙酮、乙醇、對(duì)二甲基苯甲醛、甲基橙、鹽酸、溴酸鉀等,,,,,儀器,分析天平、容量瓶、酸式滴定管、滴定臺(tái)、硅膠G薄層板、點(diǎn)樣毛細(xì)管、層析缸等,4.實(shí)驗(yàn)步驟,,1.異煙肼中游離肼雜質(zhì)檢查取本品，加水制成50 mg/ml的異煙肼水溶液，作為供試品溶液。另取硫酸肼加水制成每1 ml中約含有0.20 mg（相當(dāng)于游離肼50 µg）的溶液，作為對(duì)照品溶液。照薄層色譜法，吸取供試品溶液10 µ

13、l和對(duì)照品溶液2 µl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以異丙醇-丙酮（3 : 2）為展開劑，展開，晾干，噴以乙醇制的對(duì)-二甲氨基苯甲醛試液，放置15分鐘后檢視。在供試品溶液主斑點(diǎn)前方與對(duì)照品溶液主斑點(diǎn)相應(yīng)位置，不得顯黃色斑點(diǎn)。,4.實(shí)驗(yàn)步驟,2.異煙肼片的含量測(cè)定 取異煙肼片20片，精密稱定，研細(xì)，精密稱取適量（約相當(dāng)于異煙肼0.2 g），置于100 ml容量瓶中，加水適量，振搖使異煙肼溶解并稀釋至刻度，搖勻.用干燥濾紙濾

14、過，精密量取續(xù)濾液25 ml，加水50 ml，鹽酸20 ml與甲基橙指示劑1滴，溴酸鉀滴定液（0.01667 mol/L）緩緩滴定（溫度保持在18~25℃）至粉紅色消失.每1 ml溴酸鉀滴定液（0.01667mol/L）相當(dāng)于3.429 mg的C6H7N3O。,5.結(jié)果與分析,1. 游離肼的檢查：薄層色譜示意圖如右圖所示，待展開結(jié)束顯色后，供試品溶液中異煙肼主斑點(diǎn)呈橙黃色，對(duì)照品溶液中游離肼主斑點(diǎn)呈鮮黃色，且游離肼的比移值大于異煙肼

15、的比移值。觀察在供試品溶液主斑點(diǎn)前方與對(duì)照品溶液主斑點(diǎn)相應(yīng)位置，是否顯示鮮黃色斑點(diǎn)?？芍悷熾缕杏坞x肼的含量是否低于藥典規(guī)定的限量。,5.結(jié)果與分析,2. 異煙肼片的含量測(cè)定：,,上式中，F(xiàn)為濃度校正因數(shù)，本實(shí)驗(yàn)中指溴酸鉀滴定液（0.01667 mol/L）的濃度校正因數(shù)；T為溴酸鉀滴定液（0.01667 mol/L）對(duì)異煙肼的滴定度；V為供試品消耗滴定液的體積數(shù)；W平均為藥片的平均片重；W總為稱取的藥品細(xì)粉重量；稀釋倍數(shù)為配置的藥品

16、體積是量取的續(xù)濾液體積的倍數(shù)；標(biāo)示量為片劑“規(guī)格”項(xiàng)下的標(biāo)示值(mg)。,中國藥典（2010版）規(guī)定，本品含異煙（C6H7N3O）應(yīng)為標(biāo)示量的95.0-105.0%。,6.注意事項(xiàng),,,,,異煙肼片溶液過濾前需充分振搖，使其完全溶解。,過濾用的漏斗、燒杯必須干燥，并棄去初濾液。,滴定過程中指示劑褪色不可逆，滴定過程中必須充分振搖，避免滴定劑局部過濃造成指示劑以前褪色。,,雜質(zhì)檢查過程中供試品和對(duì)照品點(diǎn)樣后，須待斑點(diǎn)干燥后方可放入層析缸

17、進(jìn)行展開。,7.思考題,甲基橙指示劑如何判斷滴定終點(diǎn)？,一. 實(shí)驗(yàn)?zāi)康?葡萄糖注射液的分析,1.掌握注射液性狀，雜質(zhì)檢查以及含量測(cè)定的方法。 2.掌握剩余碘量法測(cè)定含量的方法。,二. 實(shí)驗(yàn)原理,葡萄糖注射液的分析,1. 鑒別（Fehling反應(yīng)）葡萄糖分子中的醛基可以將 Fehling試劑（堿性酒石酸銅試液）還原，生成了氧化亞銅磚紅色沉淀，用于葡萄糖的定性鑒別。,葡萄糖注射液的分析,紅色沉淀,2. 含量測(cè)定（碘量法）

18、碘在堿性溶液中可將葡萄糖氧化成葡萄糖酸，剩余的碘液用硫代硫酸鈉滴定液滴定。 具體原理見下：,葡萄糖注射液的分析,碘與NaOH作用可生成次碘酸鈉(NaIO)，葡萄糖(C6H12O6)能定量地被次碘酸鈉(NaIO)氧化成葡萄糖酸(C6H12O7)。在酸性條件下，未與葡萄糖作用的次碘酸鈉可轉(zhuǎn)變成碘(I2)析出，因此只要用Na2S2O3標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定析出的I2，便可計(jì)算出C6H12O6的含量。其反應(yīng)如下：,葡萄糖注射液的分析,⒈ I2與Na

19、OH作用：I2＋2NaOH = NaIO＋NaI＋H2O ⒉ C6H12O6和NaIO定量作用：C6H12O6＋NaIO = C6H12O7＋NaI ⒊ 總反應(yīng)式：I2＋C6H12O6＋2NaOH = C6H12O7＋2NaI＋H2O⒋ C6H12O6作用完后，剩下未作用的NaIO在堿性條件下發(fā)生歧化反應(yīng)：3NaIO = NaIO3＋2NaI⒌ 在酸性條件下：NaIO3＋5NaI＋3H2SO4 = 3I2＋3Na2SO4＋3H

20、2O⒍ 析出過量的I2可用標(biāo)準(zhǔn)Na2S2O3溶液滴定：I2＋2Na2S2O3 = Na2S4O6＋2NaI,葡萄糖注射液的分析,三.實(shí)驗(yàn)方法鑒別取本品，緩緩滴入溫?zé)岬膲A性酒石酸銅試液中，即生成氧化亞銅的紅色沉淀。,葡萄糖注射液的分析,2. 檢查（1）pH值 應(yīng)為3.2 ~5.5。（2）5-羥甲基糠醛 精密量取本品適量（約相當(dāng)于葡萄糖1.0 g），置100 ml量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，照分光光度法，在284 nm 的波長(zhǎng)

21、處測(cè)定，吸收度不得大于0.32。,葡萄糖注射液的分析,3. 含量測(cè)定（剩余碘量法） 精密量取本品適量0.5 ml(約相當(dāng)于葡萄糖50 mg)，置碘瓶中，加蒸餾水10ml，精密加入碘滴定液（0.05 mol/L）10 ml，分四次加入0.1 mol/L的氫氧化鈉溶液20 ml，每次5 ml，每次加入時(shí)密塞振搖約10 s，加完后密塞，暗處放置10 min，加稀硫酸2 ml，用硫代硫酸鈉滴定液（0.1 mol/L）滴定至近終

22、點(diǎn)（呈微黃色），加淀粉指示劑1 ml，繼續(xù)滴定至藍(lán)色消失，并將滴定結(jié)果用空白試驗(yàn)校正。每1 m1碘滴定液（0.05 mol/L）相當(dāng)于9.908 mg的葡萄糖(C6H12O6.H2O)。,葡萄糖注射液的分析,中國藥典（2010版）規(guī)定，本品為葡萄糖或無水葡萄糖的滅菌水溶液，含葡萄糖（C6H12O6·H2O）應(yīng)為標(biāo)示量的95.0~105.0%。,葡萄糖注射液的分析,四. 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與討論 記錄各項(xiàng)實(shí)驗(yàn)結(jié)果，并針對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果

23、和實(shí)驗(yàn)過程中的特殊現(xiàn)象進(jìn)行討論。 0.5 ml的10%葡萄糖注射液相當(dāng)于50 mg的葡萄糖（C6H12O6·H2O），應(yīng)消耗碘滴定液（0.05 mol/L）體積為： 允許5％的誤差，碘消耗體積應(yīng)該為5.05 ml ± 5%，即為4.80~5.30 ml。,,葡萄糖注射液的分析,五.思考與分析寫出剩余碘量法的化學(xué)方程式。碘量法的誤差有哪些?如何避免？,葡萄糖注射液的分析,附注：

24、1. 硫代硫酸鈉滴定液（0.1 mol/L） 取硫代硫酸鈉約26 g與無水碳酸鈉（Na2CO3）0.20g，加新沸過的冷水適量使溶解成1000 ml，搖勻，放置１個(gè)月后濾過。,葡萄糖注射液的分析,2. 硫代硫酸鈉滴定液（0.1 mol/L）標(biāo)定 取在120℃干燥至恒重的基準(zhǔn)重鉻酸鉀0.15g，精密稱定，置碘量瓶中，加水50ml使溶解，加碘化鉀2g，輕輕振搖使溶解，加稀硫酸40ml，搖勻，密塞，暗處放置10分鐘，用水250ml稀釋，用本

25、液滴定至近終點(diǎn)時(shí)，加淀粉指示液3ml，繼續(xù)滴定至藍(lán)色消失而顯亮綠色，并將滴定結(jié)果用空白試驗(yàn)校正。每1ml的硫代硫酸鈉滴定液（0.1 mol/L）相當(dāng)于4.903 mg的重鉻酸鉀，根據(jù)本液的消耗量與重鉻酸鉀的取用量算出本液的濃度，即得。,葡萄糖注射液的分析,實(shí)驗(yàn)二：阿司匹林腸溶片的鑒別和含量測(cè)定,,一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?. 掌握水楊酸類藥物的鑒別反應(yīng)實(shí)驗(yàn)原理。2. 掌握比色法檢查阿司匹林片劑中游離水楊酸的實(shí)驗(yàn)原理。3. 掌握兩步滴定法測(cè)定阿

26、司匹林片劑中藥物含量的實(shí)驗(yàn)原理。,42,二、實(shí)驗(yàn)操作及原理,1. 鑒別原理 ：阿司匹林加熱水解后導(dǎo)致游離水楊酸產(chǎn)生，水楊酸及其鹽在中性或弱酸性條件下（pH值4.0-6.0），可以用三氯化鐵溶液鑒別。操作：取本品的細(xì)粉適量（約相當(dāng)于阿司匹林0.1g），加水10ml，煮沸，放冷，加三氯化鐵試液1 滴，即顯紫堇色。,43,,2. 雜質(zhì)檢查：游離水楊酸含有酚羥基，可與高鐵鹽反應(yīng)顯紫堇色，因此，將適量阿司匹林供試品溶液與一定量水楊酸對(duì)照品

27、溶液生成的色澤對(duì)比，即可控制阿司匹林中游離水楊酸的含量（比色法）。,44,二、實(shí)驗(yàn)操作及原理,二、實(shí)驗(yàn)操作及原理,檢查（游離水楊酸）取本品5 片，研細(xì)，用乙醇30 ml分次研磨，并移入100 ml量瓶中，充分振搖，用水稀釋至刻度，搖勻，立即濾過，精密量取濾液6 ml，置50 ml納氏比色管中，用水稀釋至50 ml，立即加新制的稀硫酸鐵銨溶液3ml（硫酸鐵銨溶液配置：取1 mol/L鹽酸溶液1ml，加硫酸鐵銨指示液2 ml后再加水適量使成

28、100 ml），搖勻。30秒鐘內(nèi)如顯色，與對(duì)照液（精密量取0.01％水楊酸溶液4.5 ml，加乙醇3 ml，0.05％酒石酸溶液1 ml ，用水稀釋至50 ml，再加上述新制的稀硫酸鐵銨溶液3ml，搖勻）比較，不得更深(1.5％)。,45,3. 含量測(cè)定：通過兩步滴定法完成，由于阿司匹林中存在酸性的穩(wěn)定劑，所以不能用氫氧化鈉直接滴定，必須使用兩步滴定法。首先用氫氧化鈉滴定液中和制劑中其它的酸性物質(zhì)和阿司匹林上游離的羧酸：,46,二、

29、實(shí)驗(yàn)操作及原理,,3. 含量測(cè)定 取本品40片，研細(xì)，用中性乙醇70 ml，分?jǐn)?shù)次研磨，并移入100 ml量瓶中，充分振搖，再用水適量洗滌研缽數(shù)次，洗液合并于100 ml量瓶中，再用水稀釋至刻度，搖勻，濾過。精密量取濾液10 ml（相當(dāng)于阿司匹林0.3 g），置錐形瓶中，加中性乙醇（對(duì)酚酞指示液顯中性）20 ml，振搖，使阿司匹林溶解。加酚酞指示液3 滴，滴加氫氧化鈉滴定液（0.1mol/L）至溶液顯粉紅色。,47,二、實(shí)驗(yàn)

30、操作及原理,二、實(shí)驗(yàn)操作及原理,然后在加入過量的氫氧化鈉滴定液，加熱水解，氫氧化鈉中和水解所產(chǎn)生的醋酸，然后用硫酸回滴，測(cè)得中和醋酸所消耗的氫氧化鈉的量。該消耗量和阿司匹林的摩爾比為1:1。,48,,再精密加氫氧化鈉滴定液（0.1 mol/L）40 ml，置水浴上加熱15分鐘并時(shí)時(shí)振搖，迅速放冷至室溫，用硫酸滴定液（0.05 mol/L) 滴定，并將滴定的結(jié)果用空白試驗(yàn)校正。每1ml 氫氧化鈉滴定液（0.1mol/L）相當(dāng)于18.02

31、mg C9H8O4。,49,二、實(shí)驗(yàn)操作及原理,四、計(jì)算,片劑按標(biāo)示量計(jì)算的百分含量定義是：上式中，V0和V分別為空白試驗(yàn)和樣品試驗(yàn)時(shí)消耗硫酸滴定液的體積（ml）；F為硫酸滴定液濃度（0.05mol/L）校正因數(shù)；T為氫氧化鈉滴定液（0.1mol/L）的滴定度；W為供試品片粉的稱取量（g）； W為平均片重（g）；標(biāo)示量為片劑“規(guī)格”項(xiàng)下的標(biāo)示值（mg）。,50,,,,五、實(shí)驗(yàn)結(jié)果與討論記錄鑒別、檢查和含量測(cè)定的結(jié)果，

32、并對(duì)其討論。,51,六、思考題1）請(qǐng)寫出阿司匹林腸溶片含量測(cè)定中含量的計(jì)算公式。2）含量測(cè)定中為什么要在水浴上加熱。,實(shí)驗(yàn)三復(fù)方磺胺甲噁唑片的質(zhì)量分析,實(shí)驗(yàn)?zāi)康?1、熟悉復(fù)方制劑雙波長(zhǎng)計(jì)算分光光度法測(cè)定含量的原理。2、掌握復(fù)方磺胺甲噁唑片實(shí)驗(yàn)的操作條件及原理。,實(shí)驗(yàn)儀器與試劑,儀器：全波長(zhǎng)可見—紫外分光光度儀、可見—紫外分光光度儀、層析缸試劑：磺胺甲噁唑、甲氧芐啶、乙醇、氫氧化鈉、鹽酸、氯化鉀、氯仿、甲醇、二甲基甲酰胺,實(shí)驗(yàn)內(nèi)

33、容,雙波長(zhǎng)分光光度法：測(cè)定復(fù)方磺胺甲噁唑片（ChP）。不經(jīng)分離，直接測(cè)定含量主要成分：磺胺甲噁唑（SMZ）、甲氧芐啶（TMP）測(cè)定方法：定量依據(jù)：樣品在測(cè)定波長(zhǎng)（λ2）和參比波長(zhǎng)（λ1） 處的吸收度的差（ΔA）。如測(cè)磺胺甲噁唑時(shí)，甲氧芐啶在兩個(gè)波長(zhǎng)下的吸光度的差為0.,復(fù)方磺胺甲噁唑的含量測(cè)定,波長(zhǎng)的選擇：被測(cè)組分的最大吸收波長(zhǎng)作為測(cè)定波長(zhǎng)（λ2） ，另選一參比波長(zhǎng)（λ1），使干擾組分在這兩個(gè)波長(zhǎng)處的吸收相等。,1、原理,設(shè)

34、樣品在λ２和λ１處的吸光度分別為Ａ２和Ａ１，測(cè)定組分（為1）在λ２和λ１處的吸光度分別為 和 ，干擾組分（為2）在此二波長(zhǎng)處的吸收度分別為 和 。,,,從以上的推導(dǎo)可以看出，用△A作為定量的依據(jù)，可以消除干擾組分的干擾；又由于在一定條件下，△E為一常數(shù)，所以△A和濃度（C）有線性關(guān)系，因此可以用對(duì)照品比較法測(cè)定藥物的含量。,測(cè)定原理： 設(shè)A與B的混合物，A為干擾物，B為被測(cè)物

35、在λ1處，A1 = A1A + A1B 在λ2處， A2= A2A + A2B A1A = A2A ΔA = A2 - A1 =（A2A + A2B）- （ A1A + A1B ） = A2B - A1B,從以上的推導(dǎo)可以看出，用△A作為定量的依據(jù)，可以消除干擾組分的干擾；,1、TMP（找到具有等

36、吸收的波長(zhǎng)λ１ ）2、SMZ（在波長(zhǎng)λ１和 λ2 處測(cè)量標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的A，并求差值△Ar）3、SMZ+TMP（在波長(zhǎng)λ１和 λ2 處測(cè)量供試品的A，并求差值△Ax）,SMZ λ2=257nm， λ1=304nm,SMZ的紫外吸收光譜,甲氧芐啶（TMP）的紫外吸收光譜,,61,TMP λ2=239nm， λ1=295nm,1、SMZ（找到具有等吸收的波長(zhǎng)λ１ ）2、TMP（在波長(zhǎng)λ１和 λ2 處測(cè)量標(biāo)

37、準(zhǔn)物質(zhì)的A，并求差值△Ar）3、SMZ+TMP（在波長(zhǎng)λ１和 λ2 處測(cè)量供試品的A，并求差值△Ax）,又由于在一定條件下，△E為一常數(shù)，所以△A和濃度（C）有線性關(guān)系，因此可以用對(duì)照品比較法測(cè)定藥物的含量。因?yàn)閷?duì)照品和供試品配置的體積相等，所以：,,,計(jì)算公式,計(jì)算公式,,式中，△AX為供試品溶液稀釋液的吸光度差值； △AR為對(duì)照品溶液稀釋液的吸光度差值； mR為SMZ對(duì)照品的稱量（mg）

38、 m為樣品的稱量（g）； 為平均片重（g/片）。,測(cè)定磺胺甲噁唑片中的磺胺甲噁唑時(shí)，因?yàn)樵?57nm處，磺胺甲噁唑有最大吸收,甲氧芐啶吸收較小，并在304nm波長(zhǎng)附近有一等吸收點(diǎn)，故選擇257nm為測(cè)定波長(zhǎng)（λ2），在304nm波長(zhǎng)附近選擇等吸收波長(zhǎng)為參比波長(zhǎng)（λ1）。測(cè)定甲氧芐啶時(shí)，在239nm處甲氧芐啶有較大吸收、磺胺甲噁唑吸收較小，且在295nm波長(zhǎng)附近有一等吸收點(diǎn)，故選擇239nm作為甲氧芐啶的測(cè)定波長(zhǎng)，在2

39、95nm波長(zhǎng)附近作為參比波長(zhǎng)。,,精密稱取在105℃干燥至恒重的磺胺甲噁唑?qū)φ掌?0mg與甲氧芐啶對(duì)照品10mg，分別置100ml量瓶中，各加乙醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，分別作為對(duì)照品溶液(1) 與對(duì)照品溶液(2),2、對(duì)照品溶液的配制,3、供試品母液的制備,取本品10片，精密稱定，研細(xì)，精密稱取適量（約相當(dāng)于磺胺甲噁唑50mg與甲氧芐啶10mg），置100ml 量瓶中，加乙醇適量，振搖15分鐘使磺胺甲噁唑與甲氧芐啶溶解，加乙醇稀釋至刻

40、度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液作為供試品母液。,稀釋液的配制：精密量取供試品母液與對(duì)照品溶液(1)、(2)各1ml ，分別置50ml量瓶中，各加0.4％氫氧化鈉溶液稀釋至刻度，搖勻，即得。參比波長(zhǎng)和測(cè)定波長(zhǎng)的確定：照分光光度法，取對(duì)照品溶液(2)的稀釋液，以257nm 為測(cè)定波長(zhǎng)（λ2 ），在304nm 波長(zhǎng)附近（每間隔0.5nm ）選擇等吸收點(diǎn)波長(zhǎng)為參比波長(zhǎng)（λ1 ），要求△Ａ＝Ａλ2 －Ａλ1 ＝0 。樣液的測(cè)定：再在λ2 與λ1 波

41、長(zhǎng)處分別測(cè)定供試品溶液的稀釋液與對(duì)照品溶液(1) 的稀釋液的吸收度，求出各自的吸收度差值（△Ａ）計(jì)算，即得。,4、磺胺甲噁唑稀釋液的配制和測(cè)定,稀釋液的配制： 精密量取上述供試品母液與對(duì)照品溶液(1)、(2)各2.5ml,分別置50ml 量瓶中，各加鹽酸－氯化鉀溶液〔取0.1mol/L鹽酸溶液75ml與氯化鉀6.9g，加水至1000ml，搖勻〕稀釋至刻度，搖勻，即得。參比波長(zhǎng)和測(cè)定波長(zhǎng)的確定：照分光光度法取對(duì)照品溶液(1) 的稀釋液，

42、以239.0nm 為測(cè)定波長(zhǎng)（λ2 ），在295nm 波長(zhǎng)附近（每間隔0.2nm ）選擇等吸收點(diǎn)波長(zhǎng)為參比波長(zhǎng)（λ1 ），要求△Ａ＝Ａλ2-Ａλ1 ＝0 ，樣液的測(cè)定：再在λ2 與λ1 波長(zhǎng)處分別測(cè)定供試品溶液的稀釋液與對(duì)照品溶液(2) 的稀釋液的吸收度，求出各自的吸收度差值（△Ａ），計(jì)算，即得。,5、甲氧芐啶稀釋液的配制和測(cè)定,實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng),注意取樣量的換算注意配制稀釋液的溶劑測(cè)定時(shí)，參比溶液不得混淆，比色皿一定要清洗干凈注意

43、確定參比波長(zhǎng)的方法,討論與思考題,1、分別說明本品中磺胺甲噁唑和甲氧芐啶雙波長(zhǎng)法測(cè)定含量時(shí)波長(zhǎng)選擇的依據(jù)。2、為何甲氧芐啶含量測(cè)定時(shí)供試液的稀釋倍數(shù)與磺胺甲噁唑測(cè)定時(shí)的要不同？,實(shí)驗(yàn)四 三種中藥制劑中黃芩的鑒別,三種中藥制劑中黃芩的鑒別,一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康模毫私夂驼莆罩兴幹苿┑奶崛》椒私夂驼莆毡由V法在中藥成分鑒別的應(yīng)用,72,,薄層色譜法是中藥鑒別的主要方法，是快速分離和定性分析的一種重要實(shí)驗(yàn)技術(shù)，它是依據(jù)吸附力與分配系數(shù)的不同

44、，使混合物得以分離。薄層色譜層析操作方便，設(shè)備簡(jiǎn)單，顯色容易，展開速度快，混合物易分離，分辨力高。,黃芩苷,黃芩苷的分子式為C21H18O11， 分子量為446.35。理化性質(zhì)：本品為淡黃色結(jié)晶粉末。熔點(diǎn)：223℃，淡黃色細(xì)針晶（甲醇），熔點(diǎn)：223~225℃。藥理作用主要有抗炎、抗變態(tài)反應(yīng)作用；保肝利膽作用；降壓、利尿、鎮(zhèn)靜、解熱作用；醛糖還原酶抑制作用。臨床主要用于傳染性肝炎，急性膽道感染，鉛中毒，清熱解毒，胸悶嘔惡，肺熱咳嗽，腫瘤

45、瘡毒，胎動(dòng)不安。常見的不良反應(yīng)有注射級(jí)藥除個(gè)別人會(huì)出現(xiàn)胃部不適與腹瀉外，無明顯不良反應(yīng)。,73,牛黃解毒片、三黃片、雙黃連口服液、黃芩藥材中均含有黃芩苷。,三、實(shí)驗(yàn)操作,74,（1）牛黃解毒片取本品4片，研細(xì)，加乙醚30ml，超聲處理15分鐘，濾過，棄去乙醚，濾渣置水浴上揮盡乙醚，加甲醇30ml，超聲處理15分鐘，濾過。濾液蒸干，殘?jiān)铀?0ml，加熱使溶解，滴加鹽酸調(diào)節(jié)pH值至2～3，加醋酸乙酯30ml提取，分取醋酸乙醋液。

46、蒸干，殘?jiān)蛹状?ml使溶解，作為供試品溶液。,,（2）三黃片取本品5片,除去糖衣，研細(xì)，加甲醇30ml，加熱回流提取30分鐘，放冷，濾過,濾液作為供試品溶液，蒸干。殘?jiān)铀?5ml攪拌使溶解,濾過，濾液用稀鹽酸調(diào)節(jié)pH值至1～2，用醋酸乙酯提取2次，每次10ml，合并提取液，蒸干。殘?jiān)蛹状?ml使溶解,作為供試品溶液。,75,,（3）雙黃連口服液：取本品1ml,加75%乙醇溶液5ml，搖勻，作為供試品溶液（4）對(duì)照黃

47、芩藥材： 取本品粉末50g，加甲醇1000ml，超聲處理20分鐘，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)蛹状?0ml使溶解，制成每1ml含1mg的溶液，作為供試品溶液。（5）黃芩苷對(duì)照品 黃芩苷對(duì)照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。,76,薄層色譜法,首先，將小的硅膠G板，取三塊，活化30分鐘，然后在每一塊板子上點(diǎn)入黃芩對(duì)照藥材提取液，黃芩苷對(duì)照品溶液，以及上述三種制劑中的一種。每一種溶液吸取各5μl（約

48、6cm），分別點(diǎn)于同一以含4％醋酸鈉的羧甲基纖維素鈉溶液為黏合劑的硅膠G薄層板上，以醋酸乙酯-丁酮-甲酸-水(5:3:1:1)為展開劑，預(yù)平衡30分鐘，展開，取出，晾干，噴以1％三氯化鐵乙醇溶液。,77,,供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)；在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同的暗綠色斑點(diǎn)。然后使用購置的薄層板，在其上點(diǎn)入五種溶液，照上面操作察看結(jié)果。,78,,四、實(shí)驗(yàn)結(jié)果與討論繪制薄層檢查結(jié)果示意圖，并