醫(yī)藥衛(wèi)生hav余

1、甲型肝炎與甲肝減毒活疫苗,浙江普康生物技術(shù)股份有限公司 重慶智飛生物制品有限公司,浙江普康生物技術(shù)股份有限公司位于美麗的西子湖畔，是以浙江省醫(yī)學(xué)科學(xué)院為技術(shù)依托建立起來(lái)的高科技企業(yè)。公司創(chuàng)立于1991年。生產(chǎn)甲型肝炎減毒活疫苗(H2減毒株)凍干粉針劑。,甲型肝炎減毒活疫苗（H2毒株)發(fā)明者、中科院院士、公司董事長(zhǎng)毛江森研究員,國(guó)際先進(jìn)水平的生產(chǎn)、檢驗(yàn)設(shè)備,一 概述：,.甲型肝炎是由甲型肝炎病毒HAV（hepatitis

2、A virus）引起的急性傳染性疾病。? 甲型肝炎世界各地都有發(fā)病，年發(fā)病數(shù)>200萬(wàn)。經(jīng)濟(jì)欠發(fā)達(dá)國(guó)家，特別是熱帶、亞熱帶地區(qū)，幼兒期普遍受感染。? 我國(guó)是甲肝高發(fā)的國(guó)家，不少地區(qū)甲肝年發(fā)病率>100/10萬(wàn)。90年代以前全國(guó)年發(fā)病60 ~ 100萬(wàn)例。? 青少年 及兒童是主要的發(fā)病對(duì)象。近幾年，成年人的發(fā)病率也呈上升趨勢(shì)。,流行特征（1）：,甲肝每5-10年為一個(gè)流行周期，冬春季是高發(fā)季節(jié)。甲肝的流行與社會(huì)經(jīng)濟(jì)的

3、發(fā)達(dá)和環(huán)境衛(wèi)生水平密切相關(guān)。甲肝病毒感染率，發(fā)展中國(guó)家高，發(fā)達(dá)國(guó)家低。我國(guó)沿海地區(qū)、北方地區(qū)高，南方地區(qū)低。免疫水平低者，當(dāng)水、食物等被病毒污染時(shí)，就比較容易引起流行。,流行特征（2）：,潛伏期和發(fā)病后幾天內(nèi)的糞便和血液有傳染性。甲肝病毒從糞便中排出起始于發(fā)病前1-2周，發(fā)病時(shí)達(dá)高峰。甲肝的流行通常發(fā)生在人口密集的群體。如幼托機(jī)構(gòu)，學(xué)校，部隊(duì)，廠礦等。病毒可通過(guò)人直接接觸或通過(guò)被病毒污染的食物、飲水和飲料等傳播；多次發(fā)現(xiàn)生吃貝殼

4、類(lèi)食物而引發(fā)流行。,全球最嚴(yán)重的一次甲肝暴發(fā)流行：,1988年上海甲肝暴發(fā)，集中發(fā)病32萬(wàn)例，發(fā)病率4082.6/10萬(wàn)。波及江蘇、浙江等省。 20-39歲年齡占發(fā)病總數(shù)的83.5%。 生食被HAV污染的毛蚶所傳播。,二、甲肝疫苗的種類(lèi),1.甲肝滅活疫苗：Merck（默沙東）的Vaqta；GSK（葛蘭素史克）的Havrix；Baster（巴斯德）的Bavition。甲醛滅活（有效的滅活方法）；可誘導(dǎo)產(chǎn)生

5、高水平的血清抗體和陽(yáng)轉(zhuǎn)率；但無(wú)法阻止HAV在消化道內(nèi)的一級(jí)繁殖；增加HAV的陰性感染。2.甲肝減毒活疫苗：普康的H2 strain(H2毒株）,長(zhǎng)春的 L-A1 strain（L-A1毒株）。安全性好，無(wú)毒力返祖；免疫反應(yīng)全面，保護(hù)作用持久；可阻止HAV在消化道內(nèi)的一級(jí)繁殖。,二、甲肝疫苗的種類(lèi),3.聯(lián)合疫苗：HA-Hb疫苗； HA-Typhoid（甲肝-傷寒）疫苗；毒粒HA疫苗。4.研制中的HA分子疫苗：亞單位疫苗：重組DNA

6、技術(shù)，Vp1, Vp3的載體表達(dá)合成肽疫苗：Vp1, Vp2, Vp3 存在構(gòu)象依賴(lài)性HAV空殼疫苗：用重組痘苗病毒表達(dá)的核殼多聚蛋白量較少。,甲肝減毒活疫苗的研究,甲肝滅活疫苗的研究,甲肝減毒活疫苗的優(yōu)點(diǎn),活病毒增殖與死抗原刺激的綜合作用活疫苗不但能產(chǎn)生體液免疫（抗體），還能誘導(dǎo)產(chǎn)生細(xì)胞免疫.活疫苗有很強(qiáng)的免疫回憶反應(yīng)。活疫苗保護(hù)作用持久。（實(shí)際觀察已達(dá)15年以上）,三、甲肝活疫苗的安全性,基因序列的改變H2株與野毒株的生

7、物學(xué)特征不同疫苗株口服感染能力的減弱與喪失無(wú)毒力返祖。局部接種反應(yīng)輕微，無(wú)明顯不良反應(yīng)無(wú)疫苗接種相關(guān)病例，已觀察15年以上,,甲型肝炎病毒（Hepatitis A Virus ) 顆粒由60個(gè)衣殼蛋白組成20面立體對(duì)稱(chēng)結(jié)構(gòu),60個(gè)衣殼蛋白,小核糖核酸病毒,無(wú)細(xì)胞壁二十面體,單個(gè)衣殼蛋白結(jié)構(gòu),單股RNA,1、H2疫苗株的減毒基因表現(xiàn),,2、疫苗病毒的遺傳穩(wěn)定性

8、 ---核苷酸序列測(cè)定,3、 甲肝病毒野毒株與H2疫苗株的特性比較,接種H2株疫苗感染途徑改變，口服感染能力減弱或消失,4、疫苗株毒力返祖試驗(yàn),在人二倍體細(xì)胞中于36 0C傳5代; 37 0C傳8代; 35 0C傳11代;猴體內(nèi)傳3代;疫苗接種者排出病毒;疫苗接觸者排出病毒,疫苗株毒力返祖試驗(yàn),樣品來(lái)源 接種猴體毒力測(cè)定

9、 癥狀 血清肝功能 肝臟病理改變疫苗接種者排出-- -KMB17細(xì)胞傳代:-- - 36 0C傳5代-- - 37 0C傳8代-- - 35 0C傳11代-- -猴體內(nèi)傳3代 -- -,疫苗株毒力返祖試驗(yàn),結(jié)果: 無(wú)發(fā)病和明顯肝

10、功能改變 無(wú)肝臟病理變化 無(wú)毒力返祖現(xiàn)象結(jié)論: 疫苗對(duì)人對(duì)環(huán)境無(wú)害,H2株甲肝活疫苗在中國(guó)使用15年，接種人群大于1億，沒(méi)有發(fā)現(xiàn)任何類(lèi)甲肝病例，流行病學(xué)證明，沒(méi)有因接種甲肝活疫苗而發(fā)生甲肝病例。,舉例如下：1、大規(guī)模人體安全性觀察(九五研究) 接種觀察26萬(wàn)人，未有全身及局部副反應(yīng)2、接種一億人份，無(wú)明顯不良反應(yīng)3、浙江省嵊泗縣、椒江市約14萬(wàn)人，接種15年追蹤觀察，沒(méi)有發(fā)現(xiàn)甲

11、肝疫苗接種相關(guān)病例。,四、甲肝減毒活疫苗先進(jìn)的生產(chǎn)工藝,人二倍體細(xì)胞生產(chǎn)（KMB17 Cell Line)提取和純化，純化的活疫苗疫苗保護(hù)劑不含人血白蛋白（國(guó)家專(zhuān)利，避免來(lái)自血液制品的安全風(fēng)險(xiǎn)）,甲肝活疫苗后處理工藝,純化的必要性：細(xì)胞內(nèi)增殖。純化的方法：物理+化學(xué)。純化的結(jié)果：牛血清白蛋白低于規(guī)程標(biāo)準(zhǔn)； 雜蛋白大幅減少；

12、 滅活可能存在的其它病原體。,甲肝活疫苗（H2株）2002 – 2003年牛血清蛋白含量(本結(jié)果為中國(guó)生物制品檢定所抽檢結(jié)果）,五、甲肝減毒活疫苗的有效性,抗體陽(yáng)轉(zhuǎn)率免疫效果疫苗接種率與甲肝發(fā)病率的關(guān)系免疫回憶反應(yīng),甲肝疫苗H2株接種后抗HAV-IgG陽(yáng)轉(zhuǎn)率,浙江省紹興縣前瞻性研究4年觀察結(jié)果（1991-1994）,大規(guī)模人群考核 （國(guó)家九五攻關(guān)課題）,疫苗：H2株，浙醫(yī)科院普康，滴度10 7.0 TCID50

13、 研究現(xiàn)場(chǎng)：上海、河北省八個(gè)縣、石家莊市等地方法：個(gè)體隨機(jī)分組研究： 非篩選研究13.5萬(wàn)人； 篩選易感者研究1.6萬(wàn)人。

14、 整群隨機(jī)分組研究： 接種組19.1萬(wàn)人；對(duì)照組16.8萬(wàn)人。 共約50萬(wàn)人的大現(xiàn)場(chǎng)流行病學(xué)考核。,甲肝活疫苗保護(hù)效果,甲肝疫苗接種率與發(fā)病率之間的相關(guān)性 ( 浙江省，嵊泗縣， 1-15歲兒童組 ),甲肝疫苗接種率與甲肝發(fā)病率的相關(guān)性---1 -15歲兒童，椒江區(qū),甲肝活疫苗免疫回憶反應(yīng),免疫回憶反應(yīng)對(duì)于免疫保護(hù)的持久

15、性和有效性來(lái)說(shuō)是非常重要的，記憶性B細(xì)胞的存在和IgG抗體的特異性，確保了再次暴露于同一種抗原的二次反應(yīng)比第一次反應(yīng)更快速和有效。,七、關(guān)于活疫苗的免疫持久性,在免疫學(xué)機(jī)理上，接種活疫苗可持久免疫甲肝活疫苗實(shí)際觀察免疫保護(hù)作用15年以上。甲肝活疫苗與滅活疫苗的對(duì)比研究中，更具優(yōu)越性,甲肝活疫苗與滅活疫苗的對(duì)比研究,活疫苗與滅活疫苗均有較好的免疫效果, 二者幾何平均滴度(GMT) 水平相當(dāng)甲肝活疫苗免后2周抗體陽(yáng)轉(zhuǎn)率及GMT顯著高于

16、滅活疫苗甲肝活疫苗遠(yuǎn)期保護(hù)效果好, 免后24月抗體滴度無(wú)明顯下降.活疫苗細(xì)胞免疫功能持久而明顯 (免后2月淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化率高, 下降緩慢) 在甲肝流行期間, 活疫苗具有更好的應(yīng)急保護(hù)效果*文獻(xiàn)（北京CDC):甲肝滅活疫苗與減毒活疫苗對(duì)不同人群免疫效果的研究. 中國(guó)計(jì)劃免疫, 2002, 8(5):254-257.),甲肝減毒活疫苗加強(qiáng)免疫能誘導(dǎo)很好的免疫回憶反應(yīng), 其免疫學(xué)效果與史克

17、滅活疫苗相當(dāng). 中華醫(yī)學(xué)雜志, 2000, Vol.80, No.6.,凍干甲肝疫苗的應(yīng)用,凍干甲肝減毒活疫苗是在液體甲肝減毒活疫苗基礎(chǔ)研究, 臨床考核及大規(guī)模流行病學(xué)考核取得顯著的免疫保護(hù)效果的基礎(chǔ)上, 研制成功的新劑型疫苗.,凍干甲肝減毒活疫苗H2株,生產(chǎn)工藝獲國(guó)家專(zhuān)利, 達(dá)到國(guó)際先進(jìn)水平進(jìn)口的疫苗生產(chǎn)線國(guó)內(nèi)第一個(gè)向世界衛(wèi)生組織申報(bào)的甲肝疫苗第一個(gè)在國(guó)外（印度）完成注冊(cè)，成功出口 的疫苗,凍干疫苗的優(yōu)點(diǎn),提高了

18、疫苗的穩(wěn)定性 血清陽(yáng)轉(zhuǎn)率可達(dá)100% GMT 水平: 從 127-212 mIU/ml 到 280-1607 mIU/ml保持有效期: 從5個(gè)月提高到18個(gè)月 減少反復(fù)凍融對(duì)活疫苗感染性滴度的影響. 利于儲(chǔ)運(yùn),便于大規(guī)模推廣使用.使用方便，只需注射一針就可獲得持久保護(hù)。,凍干疫苗的安全性,?基因結(jié)構(gòu)的穩(wěn)定性: 基因組穩(wěn)定,同源性高達(dá)99.5% 抗原決定簇不變, 只有基因亞型的改變?基因序列分析：基因發(fā)生

19、變異，不同于野毒株.?使用經(jīng)過(guò)純化,傳代的二倍體細(xì)胞, 符合WHO的要求 ?穩(wěn)定劑不含任何污染因子? 動(dòng)物及猴體試驗(yàn)：無(wú)肝細(xì)胞損傷。? 人體接種觀察表明，無(wú)明顯不良副反應(yīng), 未有全身及局部副反應(yīng)。,凍干甲肝活疫苗 (H2株)人體接種反應(yīng)觀察,結(jié)果表明：凍干甲肝減毒活疫苗（H2株）不引起人體接種部位局部反應(yīng)和其他不良的全身反應(yīng)。 * 2例為一過(guò)性體溫37.7C0, 隨后正常.,凍干甲肝減毒活疫苗(

20、H2株） 人體接種反應(yīng)觀察,結(jié)果表明：凍干甲肝減毒活疫苗（H2株）免后二個(gè)月 血清ALT無(wú)異常，抗體反應(yīng)良好。,凍干疫苗接種后肝功能SGPT檢測(cè),Examine objects:檢測(cè)對(duì)象；Abnormal objects:出現(xiàn)不正常者,免疫原性強(qiáng),凍干甲型肝炎減毒活疫苗（H2株）具有高度免疫原性，注射一針血清陽(yáng)轉(zhuǎn)率為100%。,凍干甲肝減毒活疫苗（H2株）免后抗體水平測(cè)定,注: (1) * 示數(shù)據(jù)引自中檢所對(duì)批號(hào)G

21、990225凍干苗（H2株）臨床研究報(bào)告。 (2) *血清標(biāo)本同時(shí)由中檢所和浙江醫(yī)科院病毒所同時(shí)檢測(cè) 。,結(jié)果表明,1. 凍干苗一針免疫程序，免后二個(gè)月抗體反 應(yīng)達(dá)到高峰值，免后13個(gè)月該高峰值仍然 保 持不變。2. 與液體劑型苗對(duì)照組相比，凍干劑型苗抗 體滴度高于液體劑型苗數(shù)倍。,幾種甲肝疫苗免后抗體水平的比較,穩(wěn)定性好,凍干甲肝減毒活疫苗, 具有良好的穩(wěn)定性。在4-8℃條件

22、下存放21個(gè)月疫苗病毒CCID50/ml不變.,四個(gè)批號(hào)凍干甲肝減毒活疫苗 4-8 ℃保存穩(wěn)定性測(cè)定,凍干甲肝減毒活疫苗37℃保存熱穩(wěn)定性試驗(yàn),5個(gè)不同批號(hào)的凍干甲肝減毒活疫苗，放置37 ℃恒溫箱7天, 4℃冰箱存放苗作為原始滴度對(duì)照苗，檢測(cè)甲肝病毒細(xì)胞感染性滴度。(見(jiàn)下表),凍干甲肝減毒活疫苗37℃保存穩(wěn)定性測(cè)定,結(jié)果表明：凍干甲肝減毒活疫苗37℃放置7天，細(xì)胞感染性滴度平均下降為0.38CCID50/ml。 (國(guó)

23、家標(biāo)準(zhǔn)≤1.0 CCID50/ml),接種方法,臨用前用1.0ml滅菌注射用水溶解,上臂外側(cè)三角肌附著處，皮膚消毒待干后，皮下一次注射。,貯存、運(yùn)輸及有效期,于8℃以下避光保存和運(yùn)輸有效期18個(gè)月,接種時(shí)注意的問(wèn)題,局部紅、腫、熱、痛一般72小時(shí)內(nèi)自行緩解注射時(shí)不要使消毒劑接觸疫苗 （待酒精揮發(fā)干）接種疫苗時(shí)避免空腹,特殊人群的免疫,對(duì)慢性乙肝病人肝功能正常者及HBsAg陽(yáng)性攜帶者可以接種對(duì)TB 穩(wěn)定期病人可以接種對(duì)孕