微生物 問答題總匯

1、第1頁共4頁問答題五、五、問答題：問答題：(22分，每題分值如下分，每題分值如下)1、革蘭氏染色的原理、步驟及注意事項。革蘭氏染色的原理、步驟及注意事項。（6）答：原理：答：原理：革蘭氏染色是重要的鑒別染色法之一，其原理是G－細菌和G＋細菌細胞壁的成分和結(jié)構(gòu)的不同。通過結(jié)晶紫液初染和碘液媒染后，在細菌的細胞膜內(nèi)可形成不溶于水的結(jié)晶紫與碘的復(fù)合物（CVIdyecomplex）。G＋細菌（如金黃色葡萄球菌，Staphylococcusaur

2、eus，Sa）由于其細胞壁較厚、肽聚糖網(wǎng)層次多和交聯(lián)致密，故遇脫色劑乙醇（或丙酮）處理時，因失水而使網(wǎng)孔縮小，再加上它不含類脂，故乙醇的處理不會溶出縫隙，因此能把結(jié)晶紫與碘的復(fù)合物牢牢留在壁內(nèi)，使其保持紫色。反之，G－細菌（如大腸桿菌，Escherichiacoli，Ec）因其細胞壁薄、外膜層類脂含量高、肽聚糖層薄和交聯(lián)度差，遇脫色劑乙醇后，以類脂為主的外膜迅速溶解，這時薄而松散的肽聚糖網(wǎng)不能阻擋結(jié)晶紫與碘復(fù)合物的溶出，因此細胞褪成無色

3、。這時，再經(jīng)沙黃等紅色染料復(fù)染，就使G－細菌呈現(xiàn)紅色，而G＋細菌則仍保留最初的紫色（實為紫加紅色）了。――――（4分）1min1min步驟：步驟：細菌涂片結(jié)晶紫染液→沖洗盧哥氏碘液→沖洗（吸干）95%乙醇（脫1min未脫色（蘭紫色）沙黃（番紅）→蘭紫色→陽性（G）0.5min色）→沖洗1min脫色（無色）沙黃（番紅）→紅色→陰性（G）――――――――――――――――――（1分）注意事項：注意事項：（1）95%乙醇（脫色）時間0.5min

4、是最關(guān)鍵步驟；（2）取菌量合適，涂片薄而均勻；（3）菌齡以18h為宜；（4）染色時間：1min，1min，0.5min，1min。―――――――――（1分）2、單細胞微生物微生物的典型生長曲線分為哪幾個時期，各時期有何特點，對微生物發(fā)酵生產(chǎn)有何單細胞微生物微生物的典型生長曲線分為哪幾個時期，各時期有何特點，對微生物發(fā)酵生產(chǎn)有何指導(dǎo)意義。指導(dǎo)意義。（6）答：單細胞微生物微生物的典型生長曲線分為四個時期：（1）延滯期：生長速率常數(shù)為零，細胞

5、形態(tài)變大，rRNA含量增高，合成代謝活躍，對外界不良條件反應(yīng)敏感。影響延滯期長短的因素：①接種齡：采用對數(shù)期“種子”，延滯期較短；而延滯期或衰亡期“種子”延滯期較長；②接種量：接種量大，延滯期較短；接種量小，延滯期較長；③培養(yǎng)基成分：培養(yǎng)基成分豐富的，延滯期較短；培養(yǎng)基成分與種子培養(yǎng)基一致延滯期較短。―――――――――――――――——————（1.5分）（2）指數(shù)期：生長速率常數(shù)R最大，細胞進行平衡生長，酶系活躍，代謝旺盛。影響指數(shù)期代

6、時長短的因素主要有：①菌種：不同菌種的代時差異極大；②營養(yǎng)成分：營養(yǎng)越豐富，代時越短；③營養(yǎng)物濃度：影響微生物的生長速率和總生長量；④培養(yǎng)溫度：影響微生物的生長速率。指數(shù)期微生物是增殖噬菌體的最適宿主菌齡，是發(fā)酵生產(chǎn)中用作“種子”的最佳種齡?！D（1.5分）（3）穩(wěn)定期：生長速率常數(shù)R等于零，即處于新繁殖的細胞數(shù)與衰亡的細胞數(shù)相等，這時的菌體產(chǎn)量達到了最高點。穩(wěn)定期到來的原因：①營養(yǎng)物質(zhì)被消耗不能滿足生長需要；②代謝廢物或有害物質(zhì)

7、積累到抑制生長水平；③pH、氧化還原勢等物化條件越來越不適宜。穩(wěn)定期是發(fā)酵生產(chǎn)中以菌體為終產(chǎn)品的最佳收獲期；某些代謝產(chǎn)物特別是次生代謝產(chǎn)物發(fā)生在此階段，某些細菌的芽孢也發(fā)生在此階段，故又稱作代謝產(chǎn)物合成期；導(dǎo)致了連續(xù)培養(yǎng)原理的提出和工藝技術(shù)的改進。—————（1.5分）（4）衰亡期：生長速率常數(shù)R為負值，微生物個體的死亡速度超過新生的速度，整個群體呈現(xiàn)負生第3頁共4頁四、問答：（共四、問答：（共40分）分）1比較革蘭氏陽性菌、革蘭氏陰性

8、菌及古生菌的細胞壁結(jié)構(gòu)及組成異同比較革蘭氏陽性菌、革蘭氏陰性菌及古生菌的細胞壁結(jié)構(gòu)及組成異同。（8分）分）(1)G菌:肽聚糖層含量多鉸鏈緊密，有肽橋肽尾第三位氨基酸為Lys；含有磷壁酸。（3分）(2)G菌：肽聚糖層薄無肽橋，肽尾第三位氨基酸為二氨基庚二酸；脂多糖。（3分）(3)古細菌古細菌:假肽聚糖；獨特多糖細胞壁；硫酸化的細胞壁；糖蛋白細胞壁；蛋白質(zhì)細胞壁。（2分）2試比較營養(yǎng)物質(zhì)進入微生物細胞的四種方式。試比較營養(yǎng)物質(zhì)進入微生物細胞

9、的四種方式。（6分）分）(1)擴散：動力來自于細胞膜內(nèi)外的被運輸物質(zhì)的濃度差；主要運輸小分子物質(zhì)。（1分）(2)促進擴散：動力來自于細胞膜內(nèi)外的被運輸物質(zhì)的濃度差，需要載體；運輸物質(zhì)為氨基酸、單糖、維生素、無機鹽等。（2分）(3)主動運輸：需要能量，需要載體，可逆濃度運輸。（1分）PTS系統(tǒng)：主動運輸?shù)奶乩?，物質(zhì)在運輸過程中發(fā)生了變化。運輸單糖、氨基酸、有機酸等。（1分）(4)膜泡運輸：細胞膜內(nèi)陷吞噬營養(yǎng)物質(zhì)，主要存在于原生動物中。（1

10、分）3化能自養(yǎng)細菌中，硝化細菌和亞硝化細菌是如何獲得生命活動所需要的化能自養(yǎng)細菌中，硝化細菌和亞硝化細菌是如何獲得生命活動所需要的ATP和還原力。和還原力。（4分）分）（1）硝）硝化細菌和亞硝化細菌為專性好氧G菌，能以氧作為最終電子受體，氧化氨的過程中，通過氧化磷酸化獲得ATP，電子傳遞鏈不完整，產(chǎn)能效率低。（2分）（2）還原力的獲得逆呼吸鏈的方向傳遞，同時需要消耗能量。（2分）4什么是細菌的一步生長曲線？分為幾個階段？各期的特點是什么

11、？（什么是細菌的一步生長曲線？分為幾個階段？各期的特點是什么？（8分）分）（1）細菌接種到定量的液體培養(yǎng)基中，定時取樣測定細胞數(shù)量，以培養(yǎng)時間為橫座標，以菌數(shù)為縱座標作圖，得到的一條反映細菌在整個培養(yǎng)期間菌數(shù)變化規(guī)律的曲線。(2分)（2）一條典型的生長曲線至少可以分為：遲緩期，對數(shù)期，穩(wěn)定期和衰亡期等四個生長時期。(2分)（3）各期的特點：a.遲緩期(Lagphase)：分裂遲緩、代謝活躍.包括細胞形態(tài)變大或增長；細胞體積最大；細胞內(nèi)R

12、NA，尤其是rRNA含量增高，合成代謝活躍，核糖體、酶類和ATP的合成加快，易產(chǎn)生誘導(dǎo)酶對外界不良條件反應(yīng)敏感.(1分)b.指數(shù)生長期(exponentialphase)：以最大的速率生長和分裂，細菌數(shù)量呈對數(shù)增加，細菌內(nèi)各成分按比例有規(guī)律地增加，表現(xiàn)為平衡生長。對數(shù)生長期的細菌個體形態(tài)、化學組成和生理特性等均較一致，代謝旺盛、生長迅速、代時穩(wěn)定，所以是研究微生物基本代謝的良好材料。它也常在生產(chǎn)上用作種子，使微生物發(fā)酵的遲緩期縮短，提高

13、經(jīng)濟效益。(1分)C.穩(wěn)定生長期(Stationaryphase)：穩(wěn)定生長期又稱恒定期或最高生長期，此時培養(yǎng)液中活細菌數(shù)最高并維持穩(wěn)定。(1分)D.衰亡期(Deathphase)：該時期死亡的細菌以對數(shù)方式增加，但在衰亡期的后期，由于部分細菌產(chǎn)生抗性也會使細菌死亡的速率降低，仍有部分活菌存在。(1分)5試述試述F因子在因子在Ecoli中的不同存在方式，以及不同組合雜交時的特點。中的不同存在方式，以及不同組合雜交時的特點。（6分）分）（

14、1）存在方式：1)F菌株，不含F(xiàn)因子，沒有性菌毛，但可以通過接合作用接F因子而變成雄性菌株(1分)2)F菌株，F(xiàn)因子獨立存在，細胞表面有性菌毛。(1分)3)Hfr菌株，F(xiàn)因子插入到染色體DNA上，細胞表面有性菌毛。(1分)4)F′菌株，Hfr菌株內(nèi)的F因子因不正常切割而脫離染色體時，形成游離的但攜帶一小段染色體基因的F因子，特稱為F′因子。細胞表面同樣有性菌毛。(1分)（2）不同組合雜交時的特點:FF雜交:受體菌變?yōu)镕(1分)HfrF雜

15、交:受體菌變?yōu)镕(1分)F′F雜交:受體菌變?yōu)镕′有三中存在狀態(tài).(1分)6說明微生物在氮素循環(huán)中的關(guān)鍵作用。說明微生物在氮素循環(huán)中的關(guān)鍵作用。（8分）分）(1)固氮作用：在固氮微生物作用下將氮氣轉(zhuǎn)變成氨的過程.（2分）(2)氨化作用：在腐生微生物的作用下，將有機氮轉(zhuǎn)變成氨的過程。（2分）(3)硝化作用：在好氧條件下，在硝化細菌作用下，將氨氧化成硝酸鹽的過程。（2分）(4)硝酸鹽還原和反硝化作用：硝酸鹽還原包括同化性硝酸還原和異化性硝酸