細(xì)胞工程學(xué)習(xí)指導(dǎo)

1、1.細(xì)胞工程學(xué)的概念它是應(yīng)用細(xì)胞生物學(xué)和分子生物學(xué)和分子生物學(xué)的理論和方法，按照人們的設(shè)計(jì)藍(lán)圖，在細(xì)胞水平上的遺傳操作及進(jìn)行大規(guī)模的細(xì)胞和組織培養(yǎng)。通過(guò)細(xì)胞工程可以生產(chǎn)有用的生物產(chǎn)品或培養(yǎng)有價(jià)值的植株，并可以產(chǎn)生新的物種或品系。2.植物組織培養(yǎng)的含義（廣義）又叫離體培養(yǎng)，指從植物體分離出符合需要的組織.器官或細(xì)胞，原生質(zhì)體等，通過(guò)無(wú)菌操作，在人工控制條件下進(jìn)行培養(yǎng)以獲得再生的完整植株或生產(chǎn)具有經(jīng)濟(jì)價(jià)值的其他產(chǎn)品的技術(shù)。（狹義）組培指用植

2、物各部分組織，如形成層.薄壁組織.葉肉組織.胚乳等進(jìn)行培養(yǎng)獲得再生植株，也指在培養(yǎng)過(guò)程中從各器官上產(chǎn)生愈傷組織的培養(yǎng)，愈傷組織再經(jīng)過(guò)再分化形成再生植物。3..植物組織培養(yǎng)技術(shù)的發(fā)展及意義：1902年德國(guó)植物生理學(xué)家Haberlt提出了“細(xì)胞的全能性”原理。1962年Marshing和Shong發(fā)明了MS培養(yǎng)基.加速無(wú)性繁殖獲取脫毒苗擴(kuò)大變異范圍：克服遠(yuǎn)緣雜交后代不育性和雜交不親和性。通過(guò)原生質(zhì)體融合獲得體細(xì)胞雜種和胞質(zhì)雜種。倍性育種：通

3、過(guò)胚乳培養(yǎng)獲得三倍體；通過(guò)花粉和花藥培養(yǎng)進(jìn)行單倍體育種。結(jié)合誘變育種在試管內(nèi)進(jìn)行優(yōu)良變異的誘導(dǎo).選擇和繁殖。加速親本材料的純化。一般選育自交系需4－6代花粉培養(yǎng)獲得單倍體植株，染色體加倍后即為純合二倍體。種質(zhì)資源的試管保存。為基因工程的全面實(shí)施人工控制遺傳方向打下基礎(chǔ)。第一篇第一篇植物細(xì)胞工程植物細(xì)胞工程第一章第一章實(shí)驗(yàn)基本技術(shù)原理實(shí)驗(yàn)基本技術(shù)原理1.基本實(shí)驗(yàn)室設(shè)計(jì)準(zhǔn)備室進(jìn)行藥品的保存、配置、消毒、分裝等。器具的洗滌、干燥、消毒。生理生

4、化指標(biāo)的測(cè)定等。要求寬敞明亮，通風(fēng)條件好。接種室進(jìn)行材料的接種。外設(shè)緩沖間—放置拖鞋.工作服.工作帽等。要求封閉性好，干燥清潔，能較長(zhǎng)時(shí)間保持無(wú)菌。培養(yǎng)室植物材料的無(wú)菌培養(yǎng)。外設(shè)緩沖間—放置拖鞋.工作服等。首要要求是要能控制光照和溫度，其次為防止微生物感染，培養(yǎng)室應(yīng)保持干燥和清潔。細(xì)胞學(xué)實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行培養(yǎng)材料的組織學(xué).細(xì)胞學(xué).觀察照相等。要求清潔、明亮、干燥，使各種光學(xué)儀器不受潮濕和灰塵污染。生化分析室在以培養(yǎng)細(xì)胞產(chǎn)物為主要目的的實(shí)驗(yàn)室中，

5、應(yīng)建立相應(yīng)的分析化基本設(shè)備配置驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室，以便于對(duì)培養(yǎng)物的有效成分隨時(shí)進(jìn)行取樣檢查。2.滅菌方法有哪些，各有何利弊1.高壓蒸氣滅菌；2.燃燒滅菌；3.干熱滅菌：易引起火災(zāi)；4.射線滅菌：適于不耐高溫材料。細(xì)胞工程學(xué)習(xí)指導(dǎo)高麗萍3外植體（explant）是指用于離體培養(yǎng)的活的植物組織、器官等材料外植體的來(lái)源用于外植體分離的母體植物材料一般有三種來(lái)源：一是生長(zhǎng)在自然環(huán)境下的植物；二是有目的培育、在溫室控制環(huán)境條件下生長(zhǎng)的植物；三是無(wú)菌環(huán)境下已

6、經(jīng)離體培養(yǎng)的植物。在不影響培養(yǎng)目的的前提下盡可能選擇自然繁殖器官作外植體；一、二年生草本植物的離體培養(yǎng)比多年生植物容易；生長(zhǎng)季節(jié)和營(yíng)養(yǎng)生長(zhǎng)階段生長(zhǎng)啟動(dòng)快、分化快。木本植物的預(yù)處理可將成年樹(shù)的芽嫁接在實(shí)生苗上，或修剪促其新枝條產(chǎn)生，或?qū)τH本植株進(jìn)行高水平施肥，或用細(xì)胞分裂素噴灑植株，或進(jìn)行扦插繁殖等多種措施，使親本植株部分地返回年輕狀態(tài)之后，再?gòu)挠H本植株上采取外植體，這些措施有可能提高成年樹(shù)外植體的活力9.防止離體培養(yǎng)中材料變褐的方法對(duì)培

7、養(yǎng)基的防褐有三種方法：一是在培養(yǎng)基中加抗壞血酸、檸檬酸或半胱氨酸；或用抗氧化劑浸泡外植體后再接種；或是在培養(yǎng)基中加入1％的活性炭吸附褐色醌類物質(zhì)；或加入多胺類物質(zhì)，如精胺、亞精胺通過(guò)刺激細(xì)胞分裂，加速組織生長(zhǎng)，減少褐化二是減少光照強(qiáng)度或在黑暗條件下培養(yǎng)三是將外植體不斷地轉(zhuǎn)移到新鮮培養(yǎng)基，最好的辦法是外植體在瓶?jī)?nèi)轉(zhuǎn)移到無(wú)褐色物質(zhì)的部位。這三種方法以第三種瓶?jī)?nèi)轉(zhuǎn)移法最簡(jiǎn)便、經(jīng)濟(jì)(節(jié)省培養(yǎng)基)和有效。10.植物材料的常規(guī)消毒步驟1.預(yù)處理－修

8、理。2.消毒：消毒液浸泡。3.材料內(nèi)部帶菌處理。11.植物材料內(nèi)部帶菌處理方法1.莖尖分生組織培養(yǎng)。2.培養(yǎng)基中加入抗生素。12.外植體滅菌方法一次消毒程序先將采集的植物材料用紗布或尼龍網(wǎng)扎緊瓶口置于流水條件下沖洗數(shù)小時(shí)。接著用70％～75％的酒精漂洗植物材料數(shù)秒至半分鐘，以破壞有些植物材料蠟質(zhì)化表面的張力。再用消毒劑消毒。二次消毒程序即在外植體培養(yǎng)3d左右再行一次消毒。灼燒法消毒有的植物材料如胡蘿卜儲(chǔ)存根可采用，即將塊根于95％酒精中

9、浸一下，置于酒精燈上灼燒，然后去除表面層，切取無(wú)菌韌皮部接種培養(yǎng)。降壓法即將植物材料與消毒液一起置于真空抽氣瓶中抽氣，以使消毒液滲入植物材料的表面，達(dá)到消毒的目的。浸沒(méi)法如五針?biāo)芍l，可浸沒(méi)在較低濃度的次氯酸鈉(鈣)消毒劑中浸泡一段時(shí)間，然后按常規(guī)消毒程序再進(jìn)行一次消毒，效果也甚佳。木本植物消毒在樹(shù)木冬季休眠期采取休眠枝條，經(jīng)滅菌后放于24冰箱冷藏4050天，以破除休眠；然后取出枝條再經(jīng)滅菌，放入4050溫水中（無(wú)菌水），在溫室中進(jìn)行溫