隴南地區(qū)不同海拔區(qū)域內(nèi)小麥條銹菌群體遺傳多樣性的分

1、Mycosystema菌物學(xué)報15July200928(4):496503jwxt@im.ISSN16726472CN115180Q?2009InstituteofMicrobiologyCASallrightsreserved.基金項(xiàng)目：國家“973”項(xiàng)目（No.2006CB100203）；現(xiàn)代農(nóng)業(yè)產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系建設(shè)專項(xiàng)資金；國家“十一五”支撐計劃（No.2006BAD08A05）；教育部長江學(xué)者和創(chuàng)新團(tuán)隊(duì)發(fā)展計劃資助項(xiàng)目（No.200

2、558）；教育部“111”引智項(xiàng)目（No.B07049）Crespondingauth.Email:kangzs@nwsuaf.gsninghai@收稿日期:20090208接受日期:20090326隴南地區(qū)不同海拔區(qū)域內(nèi)小麥條銹菌群體遺傳多樣性的分析陸寧海12王建鋒12詹剛明1黃麗麗1康振生121西北農(nóng)林科技大學(xué)植物保護(hù)學(xué)院楊凌7121002西北農(nóng)林科技大學(xué)陜西省農(nóng)業(yè)分子生物學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室楊凌712100摘要：小麥條銹病是世界范圍內(nèi)小麥

3、上最重要的流行性病害之一，可造成嚴(yán)重的產(chǎn)量損失。隴南地區(qū)是我國小麥條銹菌主要越夏易變區(qū)和新小種發(fā)源地，了解該地區(qū)不同海拔高度區(qū)域內(nèi)條銹菌遺傳多樣性有重要意義。本研究采用TPM13SSR熒光標(biāo)記技術(shù)對11個種群330個小麥條銹菌分離株基因組DNA進(jìn)行了SSR標(biāo)記分析。不同海拔區(qū)域的條銹菌遺傳多樣性有明顯的差異，高山區(qū)的遺傳多樣性比較豐富，半山區(qū)次之，川道區(qū)相對比較低。不同生態(tài)區(qū)域內(nèi)，小麥條銹菌群體遺傳分化程度不同，高山區(qū)和半山區(qū)遺傳分化程

4、度大，基因流小，川道區(qū)群體遺傳分化程度比較小，基因流大。來自不同海拔區(qū)域的菌系具有相同的基因型，這一結(jié)果從分子水平證明了在隴南地區(qū)小麥條銹菌在山區(qū)與川地之間存在廣泛的菌源交流可就地完成周年循環(huán)。關(guān)鍵詞：小麥條銹菌，遺傳分化，海拔，SSR標(biāo)記SSRanalysisofpopulationgeicdiversityofPucciniastriifnisf.sp.triticiindifferentaltituderegionsofLongn

5、anGansuLUNingHai12WANGJianFeng12ZHANGangMing1HUANGLiLi1KANGZhenSheng121CollegeofPlantProtectionNthwestAgriculture&FestryUniversityYangling712100China2ShaanxiKeyLabatyofMolecularBiologyNthwestAgriculture&FestryUniversityY

6、angling712100ChinaAbstract:Striperust(yellowrust)ofwheat(Triticumaestivum)causedbyPucciniastriifmisf.sp.triticiisoneofthemostimptantdiseasesofwheatwldwide.ItisveryimptanttoresearchthepopulationgeicdiversityofP.striifnisf

7、.sp.triticiindifferentaltituderegionsofLongnanoneofthelargestthemostimptantoversummeringareasinChina.UsingtheTPM13SSRpopulationgeicdiversityvariationofP.striifmisf.sp.triticicontaining330isolates11collectionsfromdifferen

8、taltitudeareaofLongnanwereinvestigated.TheimptantconclusionisthatP.striifnisf.sp.triticipopulationsfromdifferentaltitudeareasweregeicallydifferent.Geicdiversityfthepathogenpopulationfromhighmountainousareaismuchhigher498

9、Mycosystema然后轉(zhuǎn)移至適宜環(huán)境內(nèi)潛育發(fā)病。葉片出現(xiàn)花斑后，剪去多余心葉，每花盆只保留1株發(fā)病最好的植株，加表1小麥條銹菌標(biāo)樣的采集地點(diǎn)、數(shù)目和海拔高度Table1ThelocationaltitudecodenumberofsamplesofPucciniastriifmisf.sp.triticicollectedfromLongnaninGansu采樣地點(diǎn)Location數(shù)量Numberofisolates海拔（m）Alt

10、itude(m)編碼Code高樓山Gaoloumountain30GL米倉山Micangmountain30MC高山區(qū)Highmountain齊壽山Qishoumonutain3017002000QS鳳凰山Fenghuangmountain30FH云山Y(jié)unmountain30YS橫嶺山Henglingmountain30HL半山區(qū)dlemountain平南Pingnan3015001700PN30CX30HX30WN川道區(qū)Lowls紅

11、川Hongchuan江洛Jiangluo渭南Weinan中灘Zhongtan3011001500ZT上隔離罩，防止交叉污染。接種后約13－15d，接種葉片即開始產(chǎn)生夏孢子。分別用收集管收集每株發(fā)病葉片上的孢子，直至病葉不再產(chǎn)孢。收集的菌種抽真空封存，70℃?zhèn)溆谩?.3基因組DNA提取方法基因組DNA的提取參照Wang（2007）的方法加以改進(jìn)：取5－10mg新鮮小麥條銹菌夏孢子于1.5mLeppendf離心管中，加入抽提緩沖液50μL；

12、用電鉆加研磨棒研磨樣品（冰上操作），再加入300μL抽提緩沖液，渦旋混勻；每管加30μL20%的SDS、20μL5molLNaCl和30μLCTABNaCl溶液，顛倒混勻，65℃溫育1h（20min顛倒一次）；加等體積（350μL）的苯酚：氯仿：異戊醇，輕輕顛倒混勻，4℃、12500rmin離心12min；取上清液，加300μL的氯仿，輕輕顛倒混勻后4℃、12500rmin離心10min；取上清液加入等體積的異丙醇（預(yù)冷），20℃放置1

13、－2h；4℃、13000rmin離心15min，棄液體，加70%乙醇（預(yù)冷）400μL清洗兩次，每次洗后4℃離心10min，然后室溫干燥；加30μLTE，置4℃溶解，20℃保存。加4μLRNaseA酶37℃溫育3－4h，加等體積的氯仿顛倒混勻后，4℃、10000rmin離心，取上清液20℃保存。采用ND1000UVVis微量紫外可見分光光度計（NanoND1000Spectrophotometer）測定DNA純度和濃度。將提取的模板DN

14、A稀釋為50ngμL待用。1.4TPM13SSR體系的SSR引物和M13熒光引物的合成本研究采用了11對SSR引物，每對引物的正鏈進(jìn)行了熒光標(biāo)記。其中，RJ18、RJ20、RJ21、RJ24和RJ27引用Enjalbertetal.（2002）；CPS15、CPS34、CPS36、CPS08、CPS09和CPS10是本課題組設(shè)計開發(fā)的（Chenetal.2008）。TPM13SSR（TailedPrimerM13SSR）引物的合成，在T