抗體的選擇和保存指南

1、抗體選擇指南抗體選擇指南抗體保存指南抗體保存指南抗體說明書樣本抗體說明書樣本一抗體選擇指南抗體選擇指南:檢測任何目的靶蛋白都有不止一種抗體可供選擇，為縮小抗體的選擇范圍選中合適的抗體，需要考慮如下幾種因素：1.分析或應(yīng)用的類型2.樣本蛋白的結(jié)構(gòu)性質(zhì)3.樣本的種屬4.抗體宿主的種類5.抗體的標(biāo)記和檢測1分析試驗的應(yīng)用類型分析試驗的應(yīng)用類型一般抗體說明書都列出該抗體經(jīng)試驗驗證過適用于何種分析類型，如：可以應(yīng)用于WBIHCICCELASA分析

2、等，如果抗體說明書沒有提及的應(yīng)用類型，并不意味著該抗體不適用于此種分析應(yīng)用類型，而僅是說明尚未經(jīng)過此種分析試驗驗證，如果抗體不適用某些分析試驗，則會在抗體說明書上標(biāo)注出來不適于某分析試驗。2樣本蛋白的結(jié)構(gòu)性質(zhì)樣本蛋白的結(jié)構(gòu)性質(zhì)了解樣本蛋白的結(jié)構(gòu)性質(zhì)有助于選擇最合適的抗體，至少兩方面因素需要考慮(1)..待測樣本蛋白的結(jié)構(gòu)域：抗體是由各種不同免疫原免疫宿主而制備得來，其中的免疫原包括：全長蛋白、蛋白片斷、多肽、全有機體（如：細(xì)菌）或細(xì)胞，

3、抗體說明書一般都有免疫原的描述，如果打算檢測的是蛋白片斷或一種特殊的同型物或蛋白全長的某一區(qū)域，則必須選擇用含此片段域的免疫原制備出的抗體。如果打算用FACS流式檢測活細(xì)胞的表面蛋白，則需要選擇含該表面蛋白的胞外域來免疫制備的抗體。(2)樣本的提取或處理過程：某些抗體要求樣本經(jīng)過某些特殊處理，例如：許多抗體只識別還原和變性的、表位已暴露不受二級四級結(jié)構(gòu)阻礙的蛋白樣本，另一方面，某些抗體僅識別天然折疊狀態(tài)的蛋白。當(dāng)選擇免疫組化的抗體時，應(yīng)

4、注意某些抗體只識別未固定的冷凍的組織，而另一些抗體則適用于無需抗原修復(fù)解交聯(lián)步聚的甲醛固定石蠟包埋的組織，這些都會在抗體說明書上應(yīng)用部分標(biāo)示出來3樣本的物種樣本的物種應(yīng)選擇物種相同或有交叉反應(yīng)的抗體，抗體可能與不同物種的同種靶蛋白有交叉反應(yīng)，因其氨基酸序列同源性較高，如果樣本的種類未列入抗體說明書上的交叉反應(yīng)種屬表中，并不意味著該抗體不適用于檢測該物種的蛋白，而只是表示該物種尚未用此抗體檢測驗證過，應(yīng)通過序列比對的方法來預(yù)測交叉反應(yīng)，可

5、應(yīng)用Expasy和NCBIBLAST來進行不同物種蛋白同源性比對。4一抗宿主物種的選擇一抗宿主物種的選擇一般說來，在使用偶聯(lián)二抗結(jié)合無偶聯(lián)物的一抗時，一抗宿主動物的物種選擇較為重要，對于免疫組化而言，盡可能選擇與樣本不同種系物種的一抗，從而避免二抗與樣本內(nèi)源性免疫球蛋白產(chǎn)生交叉反應(yīng)，例如：檢測小鼠樣本蛋白，則不應(yīng)選擇小鼠或大鼠源的一抗，最好選兔源的一抗，則二抗則可選擇偶聯(lián)了檢測分子（酶、熒光素、生物素等）的抗兔IgG。如果選擇有偶聯(lián)物的

6、一抗則不適用上述情況，除免疫組化外的其它對不含內(nèi)源性免疫球蛋白樣本的檢測方法，則抗體宿主物種的影響不大，如對不含IgG的細(xì)胞裂解物樣本的westernblotting檢測，盡管如此，含有血清的組織裂解物和組織培生物素化的抗體通常用于加強親和素生物素酶或熒光素復(fù)合物（ABC試劑或親和素或鏈霉親和素連接酶或熒光素的信號）抗體保存指南抗體保存指南抗體保存得當(dāng)與否，直接決定了抗體的活性和使用效果！如果抗體保存得當(dāng)，大部分抗體活性都可以維持?jǐn)?shù)月甚

7、至數(shù)年。本指南以abcam抗體保存方法為主，同樣也可以應(yīng)用到其他絕大部分公司的抗體產(chǎn)品！請謹(jǐn)記！無論何時請按照說明書推薦的保存條件正確保存抗體！請按照說明書推薦的保存條件正確保存抗體！1.收到抗體后請務(wù)必在請務(wù)必在12000rpm離心離心2030s后再打開管蓋進行分裝和保存！質(zhì)優(yōu)的抗體使用非常特殊的儲存管，只有在12000rpm離心2030s才能將附著在管壁或蓋內(nèi)的抗體全部離心下來。即使是在10000rpm離心也會導(dǎo)致離心不完全，導(dǎo)致出

8、現(xiàn)抗體的量不足的現(xiàn)象！?對于大部分抗體，比較合適的保存方式是分裝后保存在分裝后保存在20度80度對絕大多數(shù)抗體來說，保存在20度是完全足夠了。沒有任何證據(jù)顯示保存在80度會有更多的好處，?分裝可以最大程度的降低反復(fù)凍融對抗體活性的損害，同時也降低了由于多次從同一管中吸取抗體造成的污染可能性。分裝的量以一次實驗用完為好，最少不能少于10ul每份。因為分裝體積越小，抗體的濃度越可能會受到蒸發(fā)以及管壁吸附的影響復(fù)融后的分裝抗體如果一次用不完，

9、將剩余母液保存在4度，避免再凍起來！抗體工作液應(yīng)該當(dāng)天配制當(dāng)天用完，在4度盡量不要超過1天。絕對避免將抗體保存在自動除霜冰箱中。盡量將抗體保存在冰箱里層，而不是門上3.大部分抗體收到后4度短暫保存12周對抗體活性是沒有影響的。如果抗體很快（12周）會使用，推薦在4度保存，這是為了避免反復(fù)凍融對抗體活性的損害。如果要長期保存則最好是在20度80度。最關(guān)鍵的一點是要根據(jù)說明書推薦的方式來正確的保存抗體！但是，腹水形式的產(chǎn)品請在收到后立即凍起

10、來！因為該類產(chǎn)品含有大量的蛋白酶，長期在4度保存會導(dǎo)致抗體的降解！4.大部分抗體的運輸條件：一般的運輸過程需要12周的時間，所以是在4度的條件下來完成的。4度運輸最主要的目的是為了避免反復(fù)凍融對抗體活性的損害（如果使用干冰運輸，那么收到時抗體是凍起來的，為了分裝就需要解凍。這就多了一次凍融的過程）。所以運輸過程中絕對避免干冰運輸！特殊抗體的保存條件：特殊抗體的保存條件：6.酶聯(lián)抗體酶聯(lián)抗體：永遠(yuǎn)保存在4度，避免凍起來。否則會導(dǎo)致酶活性的

11、下降或者喪失7.偶聯(lián)抗體偶聯(lián)抗體：所有偶聯(lián)抗體都是在棕色管中或使用錫箔紙避光保存。尤其是熒光抗體，對光極為敏感，因此在所有的實驗階段也是要避光操作的！8.IgG3的同型對照的同型對照：永遠(yuǎn)保存在4度，避免凍起來。因為如果出現(xiàn)凍融過程，該抗體非常容易形成多聚體無論是保存還是運輸，絕對避免反復(fù)凍融！無論是保存還是運輸，絕對避免反復(fù)凍融！反復(fù)凍融會導(dǎo)致抗體變性，導(dǎo)致多聚體形成，從而降低抗體的結(jié)合能力！抗體保存其它相關(guān)信息：抗體保存其它相關(guān)信息