甘油的檢測方法匯總

1、甘油的檢測方法匯總甘油的檢測方法匯總在發(fā)酵行業(yè)中，甘油作為底物，是發(fā)酵液中生物合成的直接前體，會影響外源蛋白的啟動表達效率，其含量的高低直接影響產(chǎn)物的發(fā)酵單位，是決定菌種取舍的重要指標(biāo)，是提高工程菌的發(fā)酵密度，提高產(chǎn)品生產(chǎn)率的關(guān)鍵。在生物柴油生產(chǎn)中，它是副產(chǎn)物，其含量直接影響生物柴油的使用性能，是衡量生物柴油產(chǎn)品品質(zhì)的重要指標(biāo)之一。此外，甘油能與水結(jié)合以防止紅細(xì)胞的冷凍損傷，能延長紅細(xì)胞的保存期，被普遍用作細(xì)胞內(nèi)冷凍保護劑等。由于甘油用

2、途很廣，因此其含量的測定具有非常重要的意義。目前國內(nèi)外甘油含量的測定方法較多，主要有高碘酸氧化法、Cu2絡(luò)合比色法、酶比色法法、紫外可見分光光度法、高效液相色譜法、氣相色譜法、近紅外光譜法以及原子吸收法等。下面將對其進行簡要概述：1、高碘酸法高碘酸法1.1.原理：原理：高碘酸氧化法是目前常見用于甘油含量檢測的方法，利用高碘酸與甘油發(fā)生氧化還原反應(yīng)，剩余高碘酸及反應(yīng)生成的碘酸與碘化鉀反應(yīng)生成碘，再用硫代硫酸鈉進行滴定，根據(jù)消耗的硫代硫酸鈉

3、的量來計算甘油的含量。2.2.操作步驟操作步驟準(zhǔn)確發(fā)酵液10ml于100mL小燒杯中，加少量水溶解，然后轉(zhuǎn)移至100mL容量瓶中，用水稀釋至標(biāo)線，搖勻，靜置。用移液管準(zhǔn)確移取10mL上述溶液于碘量瓶中，加入20mL高碘酸鈉溶液，混合均勻后，于黑暗中避光靜置40min，然后加入碘化鉀溶液和20%鹽酸溶液各15mL，調(diào)節(jié)pH值在0.8～1.0之間，然后用硫代硫酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定，近終點時，加入2mL淀粉指示劑溶液，繼續(xù)滴定至溶液藍色消失。同時

4、做試樣空白。3.3.計算計算：100100045010w12???????MCVV）（式中：w——樣品中甘油的含量，％；V1——空白試樣消耗硫代硫酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液的體積，mL；V2——試樣消耗硫代硫酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液的體積，mL；C——硫代硫酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度，mol／L；M——甘油相對分子質(zhì)量；（2）將甘油標(biāo)準(zhǔn)系列溶液在最佳色譜條件下進行HPLC分析以峰面積外標(biāo)法定量得到甘油標(biāo)準(zhǔn)曲線；（3）按照樣品預(yù)處理方法處理后進樣5微升記錄峰面積代入線性方

5、程中計算其測定值。將計算值乘以稀釋倍數(shù)后即得發(fā)酵液中甘油的含量。4、氣相色譜法氣相色譜法1.原理原理：氣相色譜分析法是用于分離分析復(fù)雜樣品中的化合物的一種方法，其原理是一定量的氣體或液體分析物被注入到柱一端的進樣口中，在載氣帶動下通過色譜柱，分析物的分子會受到柱壁或柱中填料的吸附。由于不同的樣品具有不同的物理和化學(xué)性質(zhì)，與特定的固定相有著不同的相互作用，使得每一種類型的分子都有自己的通過速率，因此，分析物中的各種不同組分就會在不同的時間

6、到達柱的末端，從而得到分離。當(dāng)化合物從柱的末端流出時，它們被檢測器檢測到，產(chǎn)生相應(yīng)的信號，并被轉(zhuǎn)化為電信號輸出，從而確定每一個組分到達色譜柱末端的時間順序以及每一個組分的含量。2.2.操作步驟操作步驟（1）標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制在7個25mL容量瓶中分別準(zhǔn)確稱入0、0.05、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5g甘油（精確至0.1mg），再分別移入2mL內(nèi)標(biāo)貯備液，用混合溶劑定容并搖勻，作為標(biāo)準(zhǔn)工作溶液。其中甘油質(zhì)量濃度分別為0、2、4、8、

7、12、20gL，內(nèi)標(biāo)質(zhì)量濃度均為8gL。（2）樣品的制備在25mL容量瓶中加入5ml的發(fā)酵液樣品，移入2mL內(nèi)標(biāo)貯備液，用混合溶劑定容至刻度并搖勻。（3）GC條件色譜柱：HP5石英毛細(xì)管柱，30m（柱長）0.32mm（內(nèi)徑）0.25μm（膜厚）。柱溫：初始溫度120℃，保留5min，以20℃min升至290℃，保留10min。進樣口溫度：280℃，進樣量：0.2μL，分流比：100∶1。檢測器（FID）溫度：300℃，氫氣流速：40mL