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1、母乳中所含的甘油三酯占總脂肪的95%~98%。母乳脂肪中棕櫚酸的含量約占總脂肪酸的24%~26%,其中Sn-2位棕櫚酸約占總棕櫚酸的50%~70%;而牛乳脂肪中棕櫚酸的含量約占總脂肪酸的26%~35%,但Sn-2位棕櫚酸只占總棕櫚酸的32%~40%。棕櫚酸在甘油三酯中?;恢玫牟煌?,直接影響了棕櫚酸在人體內(nèi)的生理功能。棕櫚酸在甘油三酯Sn-2位置上,能夠促進(jìn)人體對(duì)脂肪酸的吸收。尤其是對(duì)于嬰幼兒來(lái)說(shuō),甘油三酯Sn-2位棕櫚酸在體內(nèi)被消化
2、吸收,能夠防止體內(nèi)鈣、鎂等骨骼礦物質(zhì)的流失,降低大便硬度。近年來(lái),越來(lái)越多的研究轉(zhuǎn)向母乳化配方奶粉,就是將牛乳中Sn-2位棕櫚酸的含量提高到與人乳含量相同。因此,對(duì)牛乳脂肪中甘油三酯Sn-2位棕櫚酸的檢測(cè)方法的研究是非常重要的。本試驗(yàn)以前人的研究結(jié)果為基礎(chǔ),開(kāi)發(fā)更加快捷、準(zhǔn)確且分離效果更好的Sn-2脂肪酸的分離方法,進(jìn)一步測(cè)定牛乳脂肪中Sn-2位棕櫚酸的含量,具體研究?jī)?nèi)容和結(jié)果如下:
1.試驗(yàn)使用結(jié)構(gòu)甘油三酯作為材料,采用
3、GB5413.27-2010中乙酰氯-甲醇法將結(jié)構(gòu)甘油三酯甲酯化,用氣相色譜對(duì)結(jié)構(gòu)甘油三酯總脂肪酸組成進(jìn)行分析,通過(guò)試驗(yàn)確定檢測(cè)?;视王ニ玫纳V柱;并對(duì)氣相色譜儀器條件進(jìn)行調(diào)試,確定氣相色譜分離脂肪酸的分流比、程序升溫等條件。通過(guò)試驗(yàn)所得出的最優(yōu)條件結(jié)果為:采用DB-23色譜柱,載氣為高純氮?dú)?≥99.99%),色譜柱內(nèi)載氣流量為10 mL/min,柱前壓力為17.869 psi。進(jìn)樣口加熱器溫度為270℃;檢測(cè)器溫度為250℃。進(jìn)
4、樣量為1.0μL。程序升溫設(shè)定為初始溫度160℃,保持2min,以5℃/min升至215℃,保持2min;分析時(shí)間為15min。分流比分別設(shè)定為30:1。
2.使用專一性胰脂肪酶,對(duì)結(jié)構(gòu)甘油三酯進(jìn)行水解,采用氣相色譜儀器檢測(cè)甘油三酯的水解程度,通過(guò)單因素試驗(yàn)確定水解樣品的取樣量、加入胰脂酶量和水解時(shí)間的最優(yōu)條件,結(jié)果為:牛乳樣品取樣量為30.0mg,加入胰脂酶量為30.0mg(30~90U/mg),水解時(shí)間為2min。采用
5、氨基固相萃取柱,使用不同體積比的正己烷-乙酸乙酯配制的淋洗液和不同體積比的二氯甲烷-甲醇配制的洗脫液,分離模擬甘油三酯水解后的溶液,將單甘酯從混合溶液中分離出來(lái),采用氣相色譜法檢測(cè)分離后所得到的溶液,通過(guò)試驗(yàn)確定淋洗液和洗脫液配比、淋洗和洗脫次數(shù)的最優(yōu)條件,結(jié)果為:氨基固相萃取柱用4.0mL正己烷分2次活化,淋洗液為85:15(v:v)的正己烷-乙酸乙酯混合溶液;洗脫液為2:1(v:v)的二氯甲烷-甲醇混合溶液;淋洗次數(shù)和洗脫次數(shù)分別為
6、4次,每次2.0mL。采用兩種脂肪酸甲酯化方法:乙酰氯-甲醇法和氫氧化鉀-甲醇法,對(duì)結(jié)構(gòu)甘油三酯總脂肪酸進(jìn)行甲酯化衍生,用氣相色譜檢測(cè)甲酯化后的溶液,根據(jù)GC色譜圖中各脂肪酸含量,確定使用的最佳甲酯化方式,結(jié)果為:氫氧化鉀-甲醇法。以上試驗(yàn)確定了甘油三酯Sn-2位棕櫚酸的檢測(cè)中的樣品處理方法。
3、試驗(yàn)使用結(jié)構(gòu)甘油三酯作為材料,使用專一性胰脂肪酶,對(duì)結(jié)構(gòu)甘油三酯進(jìn)行水解,分別用氨基固相萃取法和傳統(tǒng)的薄層層析法對(duì)水解后的結(jié)構(gòu)
7、甘油三酯進(jìn)行分離,比較兩種分離方法的回收率:氨基固相萃取法分離Sn-2單甘酯的回收率為93.5%~95%,薄層層析分離法所測(cè)回收率為81.5%~87.25%。結(jié)果顯示氨基固相萃取法回收率較高,方法簡(jiǎn)便準(zhǔn)確,操作過(guò)程更省時(shí)。
4、采用羅茲法和氯仿-甲醇法對(duì)牛乳脂肪進(jìn)行提取,比較兩種方法的脂肪提取率,選擇提取率較高的方法用于對(duì)牛乳脂肪的提取,結(jié)果為:羅茲法提取液態(tài)奶中的脂肪含量為3.22%~3.77%,而氯仿-甲醇法所提脂肪含
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