牛乳脂肪中甘油三酯Sn-2位棕櫚酸檢測方法的研究.pdf

1、母乳中所含的甘油三酯占總脂肪的95％～98％。母乳脂肪中棕櫚酸的含量約占總脂肪酸的24％～26％，其中Sn-2位棕櫚酸約占總棕櫚酸的50％～70％；而牛乳脂肪中棕櫚酸的含量約占總脂肪酸的26％～35％，但Sn-2位棕櫚酸只占總棕櫚酸的32％～40％。棕櫚酸在甘油三酯中酰基化位置的不同，直接影響了棕櫚酸在人體內的生理功能。棕櫚酸在甘油三酯Sn-2位置上，能夠促進人體對脂肪酸的吸收。尤其是對于嬰幼兒來說，甘油三酯Sn-2位棕櫚酸在體內被消化

2、吸收，能夠防止體內鈣、鎂等骨骼礦物質的流失，降低大便硬度。近年來，越來越多的研究轉向母乳化配方奶粉，就是將牛乳中Sn-2位棕櫚酸的含量提高到與人乳含量相同。因此，對牛乳脂肪中甘油三酯Sn-2位棕櫚酸的檢測方法的研究是非常重要的。本試驗以前人的研究結果為基礎，開發(fā)更加快捷、準確且分離效果更好的Sn-2脂肪酸的分離方法，進一步測定牛乳脂肪中Sn-2位棕櫚酸的含量，具體研究內容和結果如下：
　　 1.試驗使用結構甘油三酯作為材料，采用

3、GB5413.27-2010中乙酰氯-甲醇法將結構甘油三酯甲酯化，用氣相色譜對結構甘油三酯總脂肪酸組成進行分析，通過試驗確定檢測?；视王ニ玫纳V柱；并對氣相色譜儀器條件進行調試，確定氣相色譜分離脂肪酸的分流比、程序升溫等條件。通過試驗所得出的最優(yōu)條件結果為：采用DB-23色譜柱，載氣為高純氮氣(≥99.99％)，色譜柱內載氣流量為10 mL/min，柱前壓力為17.869 psi。進樣口加熱器溫度為270℃；檢測器溫度為250℃。進

4、樣量為1.0μL。程序升溫設定為初始溫度160℃，保持2min，以5℃/min升至215℃，保持2min；分析時間為15min。分流比分別設定為30:1。
　　 2.使用專一性胰脂肪酶，對結構甘油三酯進行水解，采用氣相色譜儀器檢測甘油三酯的水解程度，通過單因素試驗確定水解樣品的取樣量、加入胰脂酶量和水解時間的最優(yōu)條件，結果為：牛乳樣品取樣量為30.0mg，加入胰脂酶量為30.0mg(30～90U/mg)，水解時間為2min。采用

5、氨基固相萃取柱，使用不同體積比的正己烷-乙酸乙酯配制的淋洗液和不同體積比的二氯甲烷-甲醇配制的洗脫液，分離模擬甘油三酯水解后的溶液，將單甘酯從混合溶液中分離出來，采用氣相色譜法檢測分離后所得到的溶液，通過試驗確定淋洗液和洗脫液配比、淋洗和洗脫次數(shù)的最優(yōu)條件，結果為：氨基固相萃取柱用4.0mL正己烷分2次活化，淋洗液為85:15(v：v)的正己烷-乙酸乙酯混合溶液；洗脫液為2:1(v：v)的二氯甲烷-甲醇混合溶液；淋洗次數(shù)和洗脫次數(shù)分別為

6、4次，每次2.0mL。采用兩種脂肪酸甲酯化方法：乙酰氯-甲醇法和氫氧化鉀-甲醇法，對結構甘油三酯總脂肪酸進行甲酯化衍生，用氣相色譜檢測甲酯化后的溶液，根據GC色譜圖中各脂肪酸含量，確定使用的最佳甲酯化方式，結果為：氫氧化鉀-甲醇法。以上試驗確定了甘油三酯Sn-2位棕櫚酸的檢測中的樣品處理方法。
　　 3、試驗使用結構甘油三酯作為材料，使用專一性胰脂肪酶，對結構甘油三酯進行水解，分別用氨基固相萃取法和傳統(tǒng)的薄層層析法對水解后的結構

7、甘油三酯進行分離，比較兩種分離方法的回收率：氨基固相萃取法分離Sn-2單甘酯的回收率為93.5％～95％，薄層層析分離法所測回收率為81.5％～87.25％。結果顯示氨基固相萃取法回收率較高，方法簡便準確，操作過程更省時。
　　 4、采用羅茲法和氯仿-甲醇法對牛乳脂肪進行提取，比較兩種方法的脂肪提取率，選擇提取率較高的方法用于對牛乳脂肪的提取，結果為：羅茲法提取液態(tài)奶中的脂肪含量為3.22％～3.77％，而氯仿-甲醇法所提脂肪含