油田污染土壤中石油降解菌的篩選、鑒定及其微生物多樣性分析.pdf

1、石油在給人們帶來(lái)巨大經(jīng)濟(jì)利益的同時(shí)，也對(duì)生態(tài)環(huán)境造成了巨大威脅。在其勘察、開(kāi)采、儲(chǔ)存及運(yùn)輸過(guò)程中，油田周圍大面積土壤都受到嚴(yán)重的污染，對(duì)自然環(huán)境及動(dòng)、植物均會(huì)造成不同程度的危害，因此，石油污染土壤的治理具有重要意義。目前，治理石油污染土壤的方法主要有物理修復(fù)、化學(xué)修復(fù)以及生物修復(fù)，其中，生物修復(fù)（包括微生物修復(fù)和植物修復(fù)）方法因具有成本低、效果優(yōu)、無(wú)二次污染、可大面積應(yīng)用等優(yōu)點(diǎn)而受到人們的廣泛關(guān)注。
　　本論文對(duì)中國(guó)江蘇省淮安市金

2、南油田（119°02′26.60″E，32°57′11.53″N）距油井不同距離的石油污染土壤進(jìn)行取樣，通過(guò)氣相色譜法初步分析了采油區(qū)土壤中各組分的分布情況；采用平板分離技術(shù)對(duì)樣本中的石油降解菌株進(jìn)行分離、純化并對(duì)純培養(yǎng)進(jìn)行理化性質(zhì)、降解性能的測(cè)定；運(yùn)用16S rRNA序列鑒別技術(shù)及克隆測(cè)序技術(shù)對(duì)細(xì)菌的序列進(jìn)行比對(duì)分析，并初步分析了功能基因的分布情況；利用 PCR-DGGE微生物群落分析技術(shù)和克隆測(cè)序技術(shù)對(duì)污染源不同距離的石油污染土壤中

3、的微生物多樣性進(jìn)行分析，考察微生物群落多樣性與環(huán)境因子的關(guān)系，識(shí)別污染土壤中的優(yōu)勢(shì)菌群，旨在為石油污染土壤降解菌群的構(gòu)建及原位生物修復(fù)提供理論依據(jù)。
　　分別使用烘干法和氣相色譜法對(duì)選定油井周邊不同距離的土壤進(jìn)行理化指標(biāo)和石油烴類含量的測(cè)定，了解樣本的初始特征及污染程度；以原油為唯一碳源，篩選出9株具有石油降解功能的菌株，分別命名為JSA01、JSA02、JSA03、JSB01、JSB02、JSB03、JSC01、JSC02、JS

4、D01。經(jīng)形態(tài)觀察、生理生化反應(yīng)和分子技術(shù)方法鑒定，確定9株菌隸屬于 Pseudomonas、 Raoultella、 Lysinibacillus、 Escherichia、Klebsiella；進(jìn)一步利用通過(guò)16S rRNA基因序列同源性分析等研究方法對(duì)石油降解菌的系統(tǒng)發(fā)育地位進(jìn)行確定。
　　對(duì)石油降解菌的基因組 DNA及質(zhì)粒 DNA進(jìn)行提取，進(jìn)一步探究alkB、 LmPH、 GSTs三種功能基因的分布情況；結(jié)果表明，GSTs