實(shí)時(shí)定量觀察MUC1基因在急性白血病表達(dá)的臨床意義.pdf

1、MUC1基因位于人類1號(hào)染色體長臂2帶1區(qū)，其編碼產(chǎn)物MUC1粘蛋白是一種分布于人上皮細(xì)胞表面的高度糖化的糖蛋白，在部分血液系統(tǒng)腫瘤細(xì)胞表達(dá)水平上調(diào)，糖基化不全而致抗原表位暴露或形成新的抗原表位。MUC1基因在胃癌、卵巢癌等多種實(shí)體惡性腫瘤中異常表達(dá)。在血液腫瘤中異常表達(dá)，可望成為監(jiān)測(cè)血液腫瘤病情變化、判斷預(yù)后指導(dǎo)治療的分子生物學(xué)標(biāo)志物以及血液腫瘤生物治療新的靶點(diǎn)。 目的: 用實(shí)時(shí)定量PCR方法測(cè)定MUC1基因在急性白血

2、病(AL)的表達(dá)量及觀察各病期MUC基因表達(dá)量與生存時(shí)間關(guān)系，同時(shí)觀察MUC1基因與急性白血病染色體核型異常關(guān)系，進(jìn)一步為MUC1基因成為監(jiān)測(cè)微小殘留病灶、判斷病情變化和預(yù)后的分子生物學(xué)指標(biāo)提供理論依據(jù)以及初步判斷MUC1基因?qū)毙园籽∈欠窬哂刑囟ǖ倪z傳學(xué)意義。 1. 病人資料：經(jīng)臨床、細(xì)胞形態(tài)學(xué)檢查、組織化學(xué)檢查以及流式細(xì)胞儀檢查細(xì)胞表面標(biāo)志確診的非M3的初發(fā)或復(fù)發(fā)AL 93例，男58例，女35例。年齡4-85歲，平均年齡3

3、1.3歲。經(jīng)過常規(guī)細(xì)胞遺傳學(xué)檢查21例。其中急性髓細(xì)胞白血病(AML)56例，急性淋巴細(xì)胞白血病(ALL)33例，急性混合型白血病(AMLL)4例，同期取骨髓形態(tài)學(xué)檢查大致正常者骨髓15例作為正常對(duì)照。取MCG-803細(xì)胞株作為陽性對(duì)照，HL-60細(xì)胞株作為陰性對(duì)照。 2. 實(shí)驗(yàn)方法：按常規(guī)方法分別采集AL患者和正常對(duì)照者的外周血或骨髓，分離單個(gè)核細(xì)胞，提取總RNA，根據(jù)文獻(xiàn)設(shè)計(jì)并合成引物，采用RT-PCR方法擴(kuò)增MUC1基因并

4、電泳觀察，對(duì)MUC1定性檢查陽性組、陰性組和正常對(duì)照組運(yùn)用實(shí)時(shí)定量逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(RQ-RT-PCR)方法檢測(cè)MUC1基因的表達(dá)量，觀察MUC1表達(dá)量與AL完全緩解率(CR)的關(guān)系，并進(jìn)行追蹤研究，觀察白血病細(xì)胞MUC1基因表達(dá)量在不同病程中的變化規(guī)律以及MUC1基因表達(dá)陽性患者染色體核型變化。 3.統(tǒng)計(jì)方法：率的比較采用卡方檢驗(yàn)，兩組均數(shù)比較采用t檢驗(yàn)，三組均數(shù)比較采用方差檢驗(yàn)。上述統(tǒng)計(jì)使用統(tǒng)計(jì)軟件SPSS 13.0完成。

5、 結(jié)果: 1. AL患者M(jìn)UC1基因表達(dá)的觀察93例AL中MUC1基因表達(dá)陽性49例，陽性率為52.7％。其中AML,56例中陽性31例，陽性率為55.4％，ALL33例中陽性15例，陽性率為45.5％；4例AMLL中陽性3例，陽性率為75％； ALL、AML及AMLL組MUC1基因表達(dá)陽性率無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p=0.4379)。15例骨髓形態(tài)學(xué)檢查大致正常者骨髓MUC1基因表達(dá)全為陰性。AL組與正常對(duì)照組的MUC1表達(dá)率有

6、統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p<0.0001)。對(duì)MUC1基因表達(dá)陽性組、陰性組及正常對(duì)照組用RQ-RT-PCR方法進(jìn)行MUC1基因的定量表達(dá)。結(jié)果顯示正常對(duì)照組中MUC1有表達(dá)，表達(dá)量為57.20±29.54拷貝/ABL，在AL組MUC1定性檢查陽性患者表達(dá)量為5494.49±7213.64拷貝/ABL，定性檢查陰性患者表達(dá)量為63.07±27.51拷貝/ABL。MUC1陽性表達(dá)組的表達(dá)量遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于陰性表達(dá)組和正常對(duì)照組，陰性表達(dá)組和正常對(duì)照組比較無統(tǒng)

7、計(jì)學(xué)差異，MUC1定性檢查陽性患者在不同類型AL中的表達(dá)量和AML各亞型中的表達(dá)量無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。 2.MUC1陽性表達(dá)與AL染色體核型改變的關(guān)系10例MUC1表達(dá)陽性的患者中3例染色體核型正常，7例出現(xiàn)染色體畸變，其中1例染色體斷裂位點(diǎn)涉及到1q21，但未見重現(xiàn)性染色體lq21畸變。 3. MUC1基因表達(dá)與AL臨床關(guān)系觀察3.1MUC1基因表達(dá)與初治AL治療療效的觀察完成常規(guī)化療2療程或以上可供分析的初治病例49例，其

8、中ALL17例，獲得完全緩解14例，完全緩解率82.4％，AML31例，獲得完全緩解24例，完全緩解率77.4％，AMLL1例，未得到緩解。設(shè)>1000拷貝/ABL為高表達(dá)，<1000拷貝/ABL為低表達(dá)，MUC1高表達(dá)者完全緩解率高，p=0.0009。但ALL中高表達(dá)組和低表達(dá)組完全緩解率無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。MUC1基因表達(dá)與AL病程關(guān)系的觀察1例誘導(dǎo)后第3個(gè)月處于CR，但MUC1持續(xù)高表達(dá)，第4個(gè)月病情復(fù)發(fā)；第2例一直未獲得CR，MUC1

9、持續(xù)高水平表達(dá)；第3例經(jīng)多次強(qiáng)烈化療后獲得短暫CR，MUC1有過短暫下降；但很快升高；第4例完全緩解后第3個(gè)月MUC1表達(dá)量降低，14個(gè)月病情復(fù)發(fā)時(shí)MUC1升高；第5例為M2復(fù)發(fā)，多次化療未緩解，MUC1持續(xù)高表達(dá)；第6、7例獲得CR后MUC1低水平表達(dá)或陰性，患者無病生存至今；第8、10例未緩解，MUC1表達(dá)量一直較高；第9例為異基因骨髓移植后復(fù)發(fā)的M4病例未能獲得緩解，MUC1基因持續(xù)高水平，患者2月后死亡。 結(jié)論:

10、 1. MUC1在AL表達(dá)總的陽性率為52.7％，其中在AML表達(dá)陽性率為55.4％，在ALL表達(dá)陽性率為45.5％，在AMLL表達(dá)陽性率為75％，三者比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異；在定性檢查陽性、陰性和正常對(duì)照中均有表達(dá)，陽性組高表達(dá)，陰性和正常對(duì)照組低表達(dá)，在ALL、AML和AMLL組中表達(dá)量無差異。 2. MUC1高表達(dá)患者治療完全緩解率為56.5％，低表達(dá)患者治療完全緩解率為96.2％，兩者比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，提示MUC1表達(dá)量高者化

11、療療效較差。 3. 治療前MUC1為陽性的AL患者誘導(dǎo)緩解后長期無病生存者，MUC1表達(dá)水平較低，未能獲得完全緩解者，MUC1可持續(xù)高水平表達(dá)，而在獲得完全緩解時(shí)MUC1仍為陽性者緩解期短，復(fù)發(fā)快，預(yù)后不良。因此認(rèn)為檢測(cè)AL患者M(jìn)UC1基因的表達(dá)，可以監(jiān)測(cè)AL化療后體內(nèi)微小殘留病狀況，并可提前發(fā)現(xiàn)白血病分子生物學(xué)復(fù)發(fā)，對(duì)監(jiān)測(cè)AL的預(yù)后、發(fā)現(xiàn)早期復(fù)發(fā)有一定意義。 4. 10例MUC1基因表達(dá)陽性的AL患者有7例出現(xiàn)染色體畸