兒童急性白血病MDM2基因與p73基因的表達(dá)及其臨床意義.pdf

1、目的：本課題旨在通過(guò)應(yīng)用逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)方法檢測(cè)MDM2基因與p73基因在兒童急性白血病中的表達(dá)情況，并探討其臨床意義。 材料與方法： 1病例及分組：本研究將2004年1月～2005年6月于我院確診的初診未治急性白血病患兒72例作為實(shí)驗(yàn)組；包括急性淋巴細(xì)胞白血病(acutelymphoblasticleukemia，ALL)組45例、急性髓性白血病(acutemyelocyticleukemia，AML

2、)組27例。ALL組包括L117例、L228例(無(wú)L3病例)；其中40例ALL患兒進(jìn)行了流式細(xì)胞學(xué)分析：T-ALL8例、B-ALL32例。AML組包括M25例、M312例、M44例、M53例、M63例(無(wú)M1、M7病例)。除3例失訪外，其余69例患兒在首次化療緩解后，經(jīng)繼續(xù)治療觀察六個(gè)月，其中50例為持續(xù)完全緩解；19例呈不良預(yù)后(6例部分緩解、9例緩解后再次復(fù)發(fā)、4例死于顱內(nèi)出血)。另將10例非惡性血液病患兒及10例健康兒童作為對(duì)照組

3、。 2標(biāo)本采集及處理：從實(shí)驗(yàn)組、非惡性血液病患兒的骨髓液及健康兒童的外周血標(biāo)本中分離出單個(gè)核細(xì)胞，在提取RNA后應(yīng)用RT-PCR方法得到MDM2、p73及內(nèi)參照β-actin基因的cDNA擴(kuò)增產(chǎn)物。 3電泳分析：經(jīng)瓊脂糖凝膠電泳后，分別測(cè)定MDM2、p73與β-actin的光密度比值，即相對(duì)表達(dá)強(qiáng)度(比值＞0為陽(yáng)性表達(dá))。 4統(tǒng)計(jì)學(xué)分析：應(yīng)用SPSS11.5統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件對(duì)所得數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，結(jié)果表示為：(x)±SD；

4、率的比較采用卡方檢驗(yàn)；相對(duì)表達(dá)強(qiáng)度比較采用t檢驗(yàn)及單因素方差分析；相關(guān)性討論采用相關(guān)分析。 結(jié)果： 1MDM2基因的表達(dá)情況 ①M(fèi)DM2基因在實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組中均為陽(yáng)性表達(dá)，但實(shí)驗(yàn)組患兒中的相對(duì)表達(dá)強(qiáng)度(1.74±-095)明顯高于對(duì)照組(0.10±0.02)，兩者間的差異具有顯著性(P＜0.05)。 ②MDM2基因在ALL組及AML組中的相對(duì)表達(dá)強(qiáng)度比較，其差異無(wú)顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)；在L1與L

5、2、T-ALL與B-ALL中的相對(duì)表達(dá)強(qiáng)度比較，其差異均無(wú)顯著性(P＞0.05)；在AML各亞型(M2、M3、M4、M5、M6)中相對(duì)表達(dá)強(qiáng)度比較，亦無(wú)顯著性差異(P＞0.05)。 ③在50例完全緩解組中，初診時(shí)MDM2基因的相對(duì)表達(dá)強(qiáng)度(1.52±0.88)高于病情緩解后的相對(duì)表達(dá)強(qiáng)度(0.08±0.05)，兩者比較，其差異具有顯著性(t=11.68，P＜0.05)。 ④69例白血病患兒經(jīng)過(guò)化療緩解后繼續(xù)治療觀察6個(gè)月

6、，完全緩解者50例，不良預(yù)后19例。MDM2基因在完全緩解組中初診時(shí)的相對(duì)表達(dá)強(qiáng)度(1.38±0.75)低于不良預(yù)后組(2.69±0.83)，二者比較，其差異具有顯著性(P＜0.05)。 ⑤在不良預(yù)后的19例患兒中有9例于緩解后再次復(fù)發(fā)，MDM2基因在這9例患兒初診時(shí)(1)、緩解時(shí)(2)及復(fù)發(fā)時(shí)(3)的相對(duì)表達(dá)強(qiáng)度分別為1.38±0.95、0.09±0.05、1.53±0.74，(2)與(1)比較，P＜0.05；2與3比較，P＜

7、0.05，其差異均具有顯著性，而(1)與(3)比較，其差異無(wú)顯著性(P＞0.05)。 ⑥MDM2基因表達(dá)水平與初診時(shí)患兒外周血白細(xì)胞計(jì)數(shù)(WBC)呈正相關(guān)(r=0.39，P＜0.05)、與血紅蛋白含量(HGB)及血小板計(jì)數(shù)(PLT)分別呈負(fù)相關(guān)(r=-0.32，P＜0.05；r=-0.33，P＜0.05)。 2p73基因的表達(dá)情況 2.1p73基因在ALL組中的表達(dá)情況 ①p73基因在ALL組中有33.3

8、3％的陰性表達(dá)率；而在對(duì)照組中均為陽(yáng)性表達(dá)。在ALL組中p73基因的陰性表達(dá)率明顯高于對(duì)照組(0％)，二者間差異具有顯著性(P＜0.05)。 ②p73基因在L1組及L2組中陰性表達(dá)率之間的差別無(wú)顯著性(P＞0.05)；在T-ALL組及B-ALL組中陰性表達(dá)率之間，亦無(wú)顯著性差異(P＞0.05)。 ③在32例完全緩解的ALL患兒中，p73基因在其初診時(shí)的陰性表達(dá)率(25.00％)高于緩解時(shí)的陰性表達(dá)率(0％)，兩者間比較，

9、其差異具有顯著性(P＜0.05)。 ④42例ALL組(3例失訪)患兒經(jīng)治療緩解后繼續(xù)治療觀察6個(gè)月，32例為持續(xù)完全緩解，10例呈不良預(yù)后。初診時(shí)完全緩解組中p73基因的陰性表達(dá)率(25.00％)低于不良預(yù)后組(70.00％)，兩者間的差異具有顯著性(P＜0.05)。 2.2p73基因在AML組中的表達(dá)情況 ①p73基因在AML組中的相對(duì)表達(dá)強(qiáng)度為1.47±0.63；在對(duì)照組中則為0.64±0.26。在AML組中

10、p73基因的相對(duì)表達(dá)強(qiáng)度明顯高于對(duì)照組，二者間的差異具有顯著性(P＜0.05)。 ②p73基因在AML組的各亞型中的表達(dá)強(qiáng)度相比較，各組間的差異無(wú)顯著性(P＞0.05)。 ③27例AML組病例經(jīng)治療緩解后繼續(xù)治療觀察6個(gè)月，18例為完全緩解，9例呈不良預(yù)后。初診時(shí)完全緩解組中p73基因的表達(dá)強(qiáng)度(1.21±0.50)低于不良預(yù)后組(1.99±0.54)，其差異具有顯著性(P＜0.05)。 ④在完全緩解的18例患兒

11、中，p73基因在其初診時(shí)的表達(dá)強(qiáng)度(1.49±0.52)高于緩解時(shí)(0.67±0.22)，兩者間差異具有顯著性(P＜0.05)。 ⑤在AML組患兒中p73基因表達(dá)水平與初診時(shí)患兒外周血WBC呈正相關(guān)(r=0.78，P＜0.05)、與HGB及PLT分別呈負(fù)相關(guān)(r=-0.73，P＜0.05；r=-0.87，P＜0.05)。3在ALL組p73基因陰性表達(dá)的15例患兒中，MDM2基因的相對(duì)表達(dá)強(qiáng)度(2.27±1.09)高于p73基因陽(yáng)

12、性表達(dá)的30例患兒(1.49±0.72)，其差異具有顯著性(P＜0.05)。4在AML組患兒中，p73基因的相對(duì)表達(dá)強(qiáng)度與MDM2基因的相對(duì)表達(dá)強(qiáng)度進(jìn)行相關(guān)分析：廠=0.36，P＞0.05，在AML組中p73基因的表達(dá)水平與MDM2基因表達(dá)水平之間無(wú)相關(guān)性。 結(jié)論： 1MDM2基因在兒童急性白血病初診時(shí)為高水平表達(dá)，而在白血病緩解期表達(dá)水平明顯下降，但在復(fù)發(fā)時(shí)又再次上升，提示動(dòng)態(tài)檢測(cè)MDM2基因的表達(dá)，有助于判斷病情發(fā)展

13、、估計(jì)預(yù)后，具有重要臨床意義。 2p73基因在ALL組患兒初診時(shí)有較高的陰性表達(dá)率，并在病情緩解后轉(zhuǎn)為陽(yáng)性表達(dá)；與之不同，在AML中p73基因表現(xiàn)為高水平表達(dá)，且其表達(dá)水平隨AML的緩解而降低，提示p73基因在不同類型細(xì)胞的腫瘤中有不同的生物學(xué)行為，且其表達(dá)與不良預(yù)后明顯相關(guān)，因此檢測(cè)p73基因有助于判斷病情，估計(jì)預(yù)后，指導(dǎo)治療。 3在ALL中，p73基因陰性表達(dá)患兒的MDM2基因表達(dá)水平高于p73陽(yáng)性者M(jìn)DM2基因的表