小鼠磷酸甘油脫氫酶gpdh酶聯(lián)免疫分析

1、1小鼠小鼠33磷酸甘油脫氫酶（磷酸甘油脫氫酶（GPDHGPDH）酶聯(lián)免疫分析酶聯(lián)免疫分析試劑盒使用說明書試劑盒使用說明書本試劑僅供研究使用目的：本試劑盒用于測定小鼠血清，血漿及相關(guān)液體樣本中3磷酸甘油脫氫酶（GPDH）的活性。實驗原理：實驗原理：本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標(biāo)本中小鼠3磷酸甘油脫氫酶（GPDH）水平。用純化的小鼠3磷酸甘油脫氫酶（GPDH）抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入3磷酸甘油脫氫酶（GPDH

2、），再與HRP標(biāo)記的3磷酸甘油脫氫酶（GPDH）抗體結(jié)合，形成抗體抗原酶標(biāo)抗體復(fù)合物，經(jīng)過徹底洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的3磷酸甘油脫氫酶（GPDH）呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計算樣品中小鼠3磷酸甘油脫氫酶（GPDH）活性濃度。試劑盒組成試劑盒組成：試劑盒組成48孔配置96孔配置保存說明書1份1份封板膜2片（4

3、8）2片（96）密封袋1個1個酶標(biāo)包被板14819628℃保存標(biāo)準(zhǔn)品：1800UL0.5ml1瓶0.5ml1瓶28℃保存標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液1.5ml1瓶1.5ml1瓶28℃保存酶標(biāo)試劑3ml1瓶6ml1瓶28℃保存樣品稀釋液3ml1瓶6ml1瓶28℃保存顯色劑A液3ml1瓶6ml1瓶28℃保存顯色劑B液3ml1瓶6ml1瓶28℃保存終止液3ml1瓶6ml1瓶28℃保存濃縮洗滌液（20ml20倍）1瓶（20ml30倍）1瓶28℃保存樣本處理及要

4、求樣本處理及要求：1.血清：室溫血液自然凝固1020分鐘，離心20分鐘左右（20003000轉(zhuǎn)分）。仔細收集上清，保存過程中如出現(xiàn)沉淀，應(yīng)再次離心。2.血漿：應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇EDTA或檸檬酸鈉作為抗凝劑，混合1020分鐘后，離心20分鐘左右（20003000轉(zhuǎn)分）。仔細收集上清，保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)該再次離心。3.尿液：用無菌管收集，離心20分鐘左右（20003000轉(zhuǎn)分）。仔細收集上清，保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。胸

5、腹水、腦脊液參照實行。4.細胞培養(yǎng)上清：檢測分泌性的成份時，用無菌管收集。離心20分鐘左右（20003000轉(zhuǎn)33各步加樣均應(yīng)使用加樣器，并經(jīng)常校對其準(zhǔn)確性，以避免試驗誤差。一次加樣時間最好控制在5分鐘內(nèi)，如標(biāo)本數(shù)量多，推薦使用排槍加樣。4請每次測定的同時做標(biāo)準(zhǔn)曲線，最好做復(fù)孔。如標(biāo)本中待測物質(zhì)含量過高（樣本OD值大于標(biāo)準(zhǔn)品孔第一孔的OD值），請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)（n倍）后再測定，計算時請最后乘以總稀釋倍數(shù)（n5）。5封板膜只限

6、一次性使用，以避免交叉污染。6底物請避光保存。7嚴(yán)格按照說明書的操作進行，試驗結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn).8所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。9本試劑不同批號組分不得混用。10.如與英文說明書有異，以英文說明書為準(zhǔn)。計算：以標(biāo)準(zhǔn)物的濃度為橫坐標(biāo)，OD值為縱坐標(biāo)，在坐標(biāo)紙上繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線，根據(jù)樣品的OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度；再乘以稀釋倍數(shù)；或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與OD值計算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的直線回歸方程式，將樣品的OD值代入方程式，