3-磷酸甘油醛脫氫酶在CMV侵染過程中的作用機(jī)制.pdf

1、黃瓜花葉病毒（Cucumber Mosaic Virus，CMV），是雀麥花葉病毒科(Bromoviridae)黃瓜花葉病毒屬（Cucumovirus）的成員之一。能夠侵染超過1200種的單子葉植物和雙子葉植物。寄主的普遍性和引起病害的重要性已成為全球范圍內(nèi)最重要的植物病毒之一，也是研究寄主與病毒互作的模型。為了研究CMV與寄主的互作機(jī)制，本論文利用膜蛋白酵母雙雜交系統(tǒng)篩選參與CMV復(fù)制的寄主因子，主要結(jié)果如下:
　　一、以CMV

2、1a蛋白為誘餌蛋白篩選與其互作的寄主因子
　　1)通過文庫(kù)篩選，獲得5個(gè)陽性互作蛋白，其中一寄主因子為細(xì)胞質(zhì)3磷酸-甘油醛脫氫酶(Glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase, GapC2)。
　　2)膜蛋白酵母雙雜交分析1a與本氏煙和擬南芥中GapC同源蛋白互作，結(jié)果表明復(fù)制酶1a與本氏煙NbGapC1、2和擬南芥AtGapC1、2均有互作。
　　3)，將1a蛋白分為2個(gè)區(qū)域N端的

3、甲基轉(zhuǎn)移酶和C端的解旋酶分別克隆到pBT3-C載體中，確定了GapC2與1a蛋白互作發(fā)生在1a蛋白的甲基轉(zhuǎn)移酶結(jié)構(gòu)域。
　　二、1a和2a的亞細(xì)胞定位和1a與GapC2的體內(nèi)互作及其共定位
　　1)通過研究1a和2a的亞細(xì)胞定位情況。結(jié)果表明1a定位于液泡上，2a大部分定位于細(xì)胞質(zhì)中;當(dāng)復(fù)制酶1a和2a同時(shí)存在于細(xì)胞中，1a將2a招募到液泡膜上。
　　2)利用雙分子熒光互補(bǔ)技術(shù)(BiFC)證明1a和GapC2在寄主體內(nèi)

4、發(fā)生互作。
　　3)通過研究1a和GapC2的共定位情況。發(fā)現(xiàn)GapC2主要定位于細(xì)胞質(zhì)中，少量均勻定位于液泡上，當(dāng)有1a存在的情況下，1a將GapC2招募到液泡膜上的局部區(qū)域，形成聚集。
　　三、本氏煙中GapC含量下調(diào)對(duì)CMV侵染的影響
　　利用VIGS技術(shù)，下調(diào)本氏煙中GapC的含量后接種CMV，通過Northern blot和Westernblot分析病毒RNA基因組含量和蛋白含量。結(jié)果表明下調(diào)GapC增加CM