鹽藻NAD-3-磷酸甘油脫氫酶同工酶基因功能域的克隆及功能鑒定.pdf

1、Yj2i2242四川大學碩士學位論文題目墊鎣盟叁望二≥生墮鹽漁匿氫墮園三睦基旦盈絲域盟盤隆作者鹽壹韭完成日期2QQ!生!旦至魚旦指導教師萱墼墼蕉專業(yè)絲生塹鱟授予學位日期生旦旦四川大學碩士學位論文鹽生杜氏藻NAD3一磷酸甘油脫氫酶同工酶基因功能域的克隆及功能鑒定微生物學專業(yè)研究生孫曉菲指導教師曹毅中文摘要植物在受到高鹽(高滲)、干旱和寒冷等脅迫時，體內(nèi)會產(chǎn)生并積累大量的調(diào)滲物以改變細胞的滲透壓，防止細胞過度失水。鹽生杜氏藻(Dunalie

2、llasalina，簡稱鹽藻Ds)是目前發(fā)現(xiàn)的世界上最耐鹽的真核光合生物，可以在01～55mol／LNaCI的環(huán)境中生存。鹽藻作為一種典型的嗜鹽生物，調(diào)滲物的合成是其主要的耐鹽策略。其適應外界高鹽環(huán)境主要是通過甘油的合成與轉(zhuǎn)化來調(diào)節(jié)滲透壓，恢復其原來的形狀和大小。鹽藻細胞內(nèi)甘油含量與外部NaCl濃度呈線性關系。其甘油代謝的基本過程與酵母細胞中的十分類似，在此代謝途徑中，NAD一3一磷酸甘油脫氫酶(glycerol3phosphatede

3、hydrogenase，簡稱GPD)是甘油合成途徑中的關鍵酶，它在NADH的參與下可催化磷酸二羥基丙酮向3磷酸甘油的轉(zhuǎn)化。3一磷酸甘油脫氫酶(GPD)具有多種同工酶形式，廣泛的存在于生物體中發(fā)揮不同的作用。釀酒酵母(Saccharomycescerevisiae)細胞中存在三種GPD同工酶；擬南芥(Arabidopsisthaliana)中也有三種GPD同工酶；杜氏藻(Dunaliellatertiolecta)GPD同工酶的研究側重于

4、其天然蛋白的分離和純化，現(xiàn)己發(fā)現(xiàn)三種以NAD為輔基的GPD同工酶；果蠅(Drosophilamelanogaster)中存在相同結構基因編碼的三種不同NADGPD同工酶。鹽生杜氏藻(Dunaliellasalina)中也存在多種GPD同工酶。在實驗室前期工作中，我們首次在基因水平上對鹽藻GPD同工酶進行研究。得到了3條GPD同工酶基因的EST序列，經(jīng)過比對將其分別命名為M4D例)D，、NADGPD2和FADGPD。實驗室的前期工作主要側