食品檢驗工高級操作技能試卷及答案

1、1.1.食物中核黃素的測定方法食物中核黃素的測定方法任何一種方法均可。1主題內(nèi)容與適用范圍本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了用微生物法和熒光法測定食物中核黃素含量。本標(biāo)準(zhǔn)適用于各類食物中核黃素的測定。第一微生物法2原理某一種微生物的生長(繁殖)必需某些維生素。例如干酪乳酸桿菌(Lactobacilluscasei，簡稱L.C.)的生長需要核黃素，培養(yǎng)基中若缺乏這種維生素該細(xì)菌便不能生長。在一定條件下，該細(xì)菌生長情況，以及它的代謝物乳酸的濃度與培養(yǎng)基中該維生素

2、含量成正比，因此可以用酸度及混濁度的測定法來測定樣品中核黃素的含量。3試劑本實驗用水均需蒸餾水。試劑純度均為分析純。3.1冰乙酸。3.2甲苯。3.3無水乙酸鈉。3.4乙酸鉛。3.5氫氧化銨。3.6干酪乳酸桿菌(LactobacilluscaseiATCC7469)。3.7鹽酸：0.1molL。3.8氫氧化鈉：1molL和0.1molL。3.90.9%氯化鈉溶液(生理鹽水)：使用前應(yīng)進行滅菌處理。3.10核黃素標(biāo)準(zhǔn)儲備液(25μgmL)：

3、將標(biāo)準(zhǔn)品核黃素粉狀結(jié)晶置于真空干燥器或盛有硫酸的干燥器中。經(jīng)過24h后，準(zhǔn)確稱取50mg，置于2L容量瓶中，加入2.4mL冰乙酸和1.5L水。將容量瓶置于溫水中搖動，待其溶解，冷至室溫，稀釋至2L，移至棕色瓶內(nèi)，加少許甲苯蓋于溶液表面，于冰箱中保存。3.11核黃素標(biāo)準(zhǔn)中間液(10μgmL)：準(zhǔn)確吸取20mL核黃素標(biāo)準(zhǔn)儲備液，加水稀釋至50mL。3.12核黃素標(biāo)準(zhǔn)使用液(0.1μgmL)：準(zhǔn)確吸取1.0mL中間液于100mL容量瓶中，加水

4、稀釋至刻度，搖勻。每次分析要配制新標(biāo)準(zhǔn)使用液。3.13堿處理蛋白陳：分別稱取40g蛋白陳和20g氫氧化鈉于250mL水中?；旌虾?，放于370.5℃恒溫箱內(nèi)，24～48h后取出，用冰乙酸調(diào)節(jié)pH至6.8，加14g無水乙酸鈉(或23.2g含有3分子結(jié)晶水的乙酸鈉)，稀釋至800mL，加少許甲苯蓋于溶液表面，于冰箱中保存。3.140.1%胱氨酸溶液：稱取1gL－胱氨酸于小燒杯中。加20mL水，緩慢加入約5～10mL鹽酸，直至其完全溶解，加水稀

5、釋至1L，加少許甲苯蓋于溶液表面。3.15酵母補充液：稱取100g酵母提取物干粉于500mL水中，稱取150g乙酸鉛于500mL水中，將兩溶液混合，以氫氧化銨調(diào)節(jié)pH至酚酞呈紅色(取少許溶液檢驗)。離心或用布氏漏斗過濾，濾液用冰乙酸調(diào)節(jié)pH至6.5。通入硫化氫直至不生沉淀，過濾，通空氣于濾液中，以排除多余的硫化氫。加少許甲苯蓋于溶液表面，于冰箱中保存。3.16甲鹽溶液：稱取25g磷酸氫二鉀和25g磷酸二氫鉀，加水溶解，并稀釋至500mL

6、。加入少許甲苯以保存之。6.1接種液的制備：使用前一天，將菌種由儲備菌種管中移入已消毒的種子培養(yǎng)液中，同時制做管。在370.5℃保溫16～24h。取出后離心10min(3000rpm)，以無菌操作方法傾去上部液體，用已消毒的生理鹽水淋洗二次，再加10mL消毒生理鹽水，在液體快速混合器上振搖試管，使菌種成混懸體。將此液傾入已消毒的注射器內(nèi)，立即使用。6.2樣品的制備6.2.1將樣品用磨粉機、研缽磨成粉末或用打碎機打成勻漿。6.2.2稱取約

7、含5～10μg的核黃素樣品(谷類約10g，干豆類約4g，肉類約5g)，加入50mL0.1molL鹽酸溶液，混勻。置于高壓鍋內(nèi)，在10.3104Pa(15lbin2)壓力下水解30min。6.2.3冷至室溫，用1molL氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH至4.6(取少許水解液，用澳甲酚綠檢驗，溶液呈草綠色即可)。6.2.4加入淀粉酶或木瓜蛋白酶，每克樣品加入20mg酶。在40℃恒溫箱中過夜，大約16h。6.2.5冷至室溫，加水稀釋到100mL，過濾。對

8、于脂肪量高的食物，可用乙醚提取，以除去脂肪。6.3標(biāo)準(zhǔn)管的制備兩組試管中每管各加核黃素標(biāo)準(zhǔn)使用液0.0、0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0mL，每管加水至5mL，再每管加5mL基本培養(yǎng)儲備液混勻。6.4樣品管的制備6.4.1吸取樣品溶液5～10mL，置于25mL具塞試管中，用0.1molL氫氧化鈉調(diào)節(jié)pH至6.8(取少許溶液，用溴麝香草酚藍(lán)檢驗)，加水稀釋至刻度。6.4.2取兩組試管，各加(6.4.1)樣品稀釋液1、2、3、

9、4mL，每管加水至5mL，每管再加5mL基本培養(yǎng)儲備液混勻。6.5滅菌：將以上樣品管和標(biāo)準(zhǔn)管全部塞上棉塞，置于高壓鍋內(nèi)，在6.9104Pa(10lbin2)壓力下滅菌15min。6.6接種和培養(yǎng)6.6.1待試管冷至室溫，在無菌操作條件下接種，每管加一滴接種液(6.1)，接種時注射器針頭不要碰試管壁，要使接種液直接滴在培養(yǎng)液內(nèi)。6.6.2置于370.5℃恒溫箱中培養(yǎng)約72h，培養(yǎng)時每管必須在同一溫度。培養(yǎng)時間可延長18h或減少12h。必要

10、時可在冰箱內(nèi)保存一夜再滴定。若用混濁度測定法，以培養(yǎng)18～24h為宜。6.7滴定將試管中培養(yǎng)液倒入50mL三角瓶中，加0.001%溴麝香草酚藍(lán)溶液5mL，分二次淋洗試管，洗液倒至該三角瓶中，以0.1molL氫氧化鈉溶液滴定，終點呈綠色。以第一瓶的滴定終點作為變色參照瓶。約30min后再換一參照瓶，因溶液放置過久顏色變淺。6.8用標(biāo)準(zhǔn)核黃素溶液的不同濃度為橫坐標(biāo)及在滴定時所需0.1molL氫氧化鈉的毫升數(shù)為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。6.9計算