巨細(xì)胞-igm抗體酶免測定標(biāo)準(zhǔn)操作程序

1、人類巨細(xì)胞人類巨細(xì)胞IgMIgM抗體酶免測定標(biāo)準(zhǔn)操作程序抗體酶免測定標(biāo)準(zhǔn)操作程序編寫者：宿金濤編寫者：宿金濤日期：日期：20122012年3月1日一、預(yù)期用途：預(yù)期用途：利用酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）定性人血清或血漿中的人類巨細(xì)胞病毒（HCMV）IgM抗體，用于人類巨細(xì)胞病毒感染的輔助診斷及流行病學(xué)調(diào)查。HCMV是引起人類先天性畸形的重要原因之一，孕婦的原發(fā)或新的復(fù)發(fā)感染均可引起新生兒宮內(nèi)感染或圍產(chǎn)期感染，砂性孕期感染HCMV的胎兒8

2、0%可出現(xiàn)智力低下、視力受損、聽力喪失等癥狀。原發(fā)性HCMV感染給免疫抑制患者帶來嚴(yán)重后果甚至危及生命，骨髓移植中因HCMV感染導(dǎo)致的間質(zhì)性肺炎死亡率達75%。近來發(fā)現(xiàn)HCMV是艾滋病患者機會感染病原之一。巨細(xì)胞病毒屬皰疹病毒β亞科，其主要感染途徑是直接或間接接觸，包括接觸被感染病人的唾液、生殖器分泌物、尿液和乳汁，同時也可以通過胎盤傳播或發(fā)生醫(yī)源性傳染。病毒感染后，血清中CMVIGM抗體持續(xù)46個月均可測出，個別情況可持續(xù)數(shù)年，血清中

3、CMVIGM抗體相對恒定地終身存在。CMVIGM抗體檢出可用于急性CMV感染的診斷，但不能區(qū)分原發(fā)性感染和復(fù)發(fā)感染。CMVIGG抗體檢出可用于診斷有無CMV感染，并對易感人群采取適當(dāng)措施。因此HCMV抗體的檢測對免疫受損患者、孕婦、器官移植的供受雙方及獻血者有重要意義。二、檢驗原理二、檢驗原理：本試劑盒采用捕獲原理檢測人血清或血漿樣品中人類巨細(xì)胞病毒IGM抗體（HCMVIGM），微孔中預(yù)包被鼠抗人IGM(μ鏈），首先加入待檢標(biāo)本的血清或

4、血漿樣品后，樣品中的IGM抗體都可被捕獲，未結(jié)合的其他成分（包括特異的IGG抗體）將被洗滌除去；第二步，加入酶標(biāo)記物，酶標(biāo)記物是辣根過氧化物酶（HRP）標(biāo)記的基因重組抗原HCMVrp5265.被捕獲的IGM中的HCMVIGM會與辣根過氧化物酶標(biāo)記的HCMV重組抗原特異性的結(jié)合，洗去其它未結(jié)合物，最后用TMB底物顯色。通過酶標(biāo)儀檢測吸光度（A值）從而判定樣品中HCMVIGM抗體的存在與否。二、試劑二、試劑：貝爾生物。規(guī)格為148人份盒。1

5、96人份盒。試劑文號：國食藥監(jiān)械（準(zhǔn)）字2011第3400637號三.儀器：儀器：ST36W洗板機readerHT2酶標(biāo)儀。四.操作步驟：操作步驟：1、取出試劑盒置室溫平衡30分鐘。將20洗滌液用蒸餾水做20倍稀釋（600ml48T1000ml96T).2、加樣品：取50ul待檢血清加入反應(yīng)板孔內(nèi)，同時預(yù)留陰、陽性及空白對照共5孔。3、加入陰生對照3孔，陽性對照1孔各50ul對照血清。空白對照1孔空置。將反應(yīng)板輕輕震湯使樣品混勻。4、溫

6、育：用封板膜封板板后，置37℃溫箱中反應(yīng)30分鐘。5、洗板：溫育后，將封板膜揭掉，吸干孔內(nèi)液體，用洗滌液洗板5次，每次浸泡30~60秒種。6、加酶標(biāo)工作液：每孔加入50ul酶標(biāo)工作液，空白孔除外。7、溫育：用封板膜封板板后，置37℃溫箱中反應(yīng)30分鐘。8、洗板：溫育后，將封板膜揭掉，吸干孔內(nèi)液體，用洗滌液洗板5次，每次浸泡30~60秒種。9、顯色：每孔加入底物A、B液各50ul，輕輕震蕩混勻，用封板膜封板后置37℃溫箱中反應(yīng)15分鐘。1

7、0、終止：每孔加入終止液50ul，輕輕震蕩混勻。胎期感染有引起流產(chǎn)、早產(chǎn)、死胎或先天畸形、智力低下等的危險。分娩時，胎兒通過有皰疹病損的生殖道，新生兒可發(fā)生HSV局部皮膚、眼、粘膜感染或中樞神經(jīng)系統(tǒng)感染。由于人群中既往HSV高感染率，因此，許多腫瘤病人、免疫缺陷者如艾滋病人以及接受免疫抑制治療的病人無論局部或全身性HSV原發(fā)或復(fù)發(fā)性感染均加重。另外，近年研究發(fā)現(xiàn)HSV2感染與宮頸癌的發(fā)生有著密切關(guān)系。此外，這幾種微生物還可引起不孕不育及

8、包括泌尿生殖道在內(nèi)的多器官炎癥。TCH系列抗體IgM的檢測能較為準(zhǔn)確的反應(yīng)幾種微生物在體內(nèi)的近期活動情況，從而為臨床的診斷提供可確的依據(jù)。六、六、病人及樣本要求：病人及樣本要求：1、血清樣本可按常規(guī)方法彩集，血清樣本中混濁或有沉淀的樣本應(yīng)先離心或過濾后取澄清的液體進行檢測，如果未充分沉淀，懸浮的纖維蛋白可能引起假陽性；使用前樣本平衡至室溫（平衡30分鐘），冷凍樣本實驗前需恢復(fù)到室溫并混勻。2、標(biāo)本中含有EDTA、檸檬酸鈉、肝素鈉等抗凝劑

9、時，不影響結(jié)果，血清中的內(nèi)源性干攏物如血脂、膽紅素、血紅蛋白在一般情況下不會影響試驗結(jié)果。RF因子陽性、孕婦、AFP陽性標(biāo)本在一般情況下不影響試驗結(jié)果、HAV、HCV、乙肝、EB、HSV、RV等相關(guān)疾病抗體陽性標(biāo)本通常情況下不影響試驗結(jié)果。但是高脂血、高溶血或高蛋白血標(biāo)本可能導(dǎo)致錯誤結(jié)果。3、不要使用熱滅活后的標(biāo)本，加熱滅活可使樣本IGM抗體降解。4、標(biāo)本儲存在28℃，一周內(nèi)不需要檢測的標(biāo)本應(yīng)儲存在20℃以下，避免反得凍融。七、七、注意

10、事項：注意事項：1、使用前仔細(xì)閱讀說明書，檢查試劑組成是否完整，并平衡至室溫。2、試齊使用前搖勻，洗滌液如有結(jié)晶析出，搖勻溶角后不影響使用。3、被檢血清新鮮，超過48小時，請冰凍保存。4、不同批號試劑請不能混用。5、封板膜不可重復(fù)使用。6、試劑盒應(yīng)在28℃放置，未用完的板條應(yīng)及時封存。7、任何血清都應(yīng)作為具有傳染性樣品對待。8、試劑盒置28℃保存，有效期12個月，請于有效期內(nèi)使用。9、嚴(yán)格按說明書操作，反應(yīng)溫度和時間必須嚴(yán)格控制。10、