g試驗(yàn)侵襲性真菌病的輔助診斷方法ppt課件

1、1,內(nèi)容目錄,一、真菌感染概,一、真菌感染概述二、真菌與?葡聚糖三、鱟試驗(yàn)與G試驗(yàn)四、G試驗(yàn)——臨床意義五、“生物探針”介紹六、“生物探針”操作流程七、“生物探針”的臨床比對(duì)八、G試驗(yàn)的影響因素,湛江安度斯生物有限公司是查爾斯河公司設(shè)在中國(guó)的子公司，是中國(guó)細(xì)菌內(nèi)毒素檢測(cè)試劑的最大供應(yīng)商，也是中國(guó)細(xì)菌內(nèi)毒素檢測(cè)領(lǐng)域的技術(shù)領(lǐng)導(dǎo)者和創(chuàng)新先鋒； 世界著名的美洲鱟試劑（LAL）生產(chǎn)企業(yè)——美國(guó)CR恩度斯弗公司（Charles

2、 River Endosafe, Inc.），也是查爾斯河實(shí)驗(yàn)室公司的子公司,湛江安度斯的簡(jiǎn)介,Charles River Laboratories,作為全球最大的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物公司，Charles River Laboratories一直是全球?qū)嶒?yàn)動(dòng)物商業(yè)化繁育和市場(chǎng)供應(yīng)的領(lǐng)導(dǎo)者，擁有分布在北美、歐洲和日本的15個(gè)分設(shè)施和遍布全球的銷售網(wǎng)絡(luò)；已成為一個(gè)生物醫(yī)學(xué)前臨床產(chǎn)品和服務(wù)的主要供應(yīng)商。,庫(kù)珀博士,C R Endosafe（恩度斯弗） 公

3、司是美國(guó)著名三大鱟試劑企業(yè)之一,有國(guó)際知名權(quán)威學(xué)者詹母斯 弗.庫(kù)珀博士(Dr. Jammes F.Cooper)創(chuàng)建。庫(kù)珀博士是細(xì)菌內(nèi)毒素檢查研究領(lǐng)域的先驅(qū)。1971年他與Lein 及 Banger等人提出以鱟實(shí)驗(yàn)法檢查熱源，并率先證明了鱟實(shí)驗(yàn)法作為注射藥品熱源檢查的敏感方法的價(jià)值。1972年他協(xié)助美國(guó)(The parentral Drug Association) 的鱟試劑.他一直主持著美國(guó)非經(jīng)腸道藥物協(xié)會(huì)(The parentera

4、l Drug Associatoin)的鱟實(shí)驗(yàn)應(yīng)用促進(jìn)工作,以及每年一屆的美國(guó)南卡羅納州查爾頓的鱟實(shí)驗(yàn)學(xué)術(shù)會(huì)議。,庫(kù)珀博士創(chuàng)建的 Endosafe 公司現(xiàn)以成為美國(guó)鱟試劑(LAL)市場(chǎng)最大的供應(yīng)商.該公司的鱟試劑以其良好的穩(wěn)定性,廣泛的適用性以及優(yōu)越的抗干擾性能享譽(yù)國(guó)際醫(yī)藥工業(yè)界.,一、真菌感染概述,真菌感染 ：真菌感染在通常情況下我們最常見(jiàn)的是表皮的感染，例如頭癬、體癬、甲癬等，由于侵犯的部位大都表淺，不會(huì)導(dǎo)致嚴(yán)重問(wèn)題，因而叫淺部

5、真菌感染；深部真菌感染則是真菌突破人體天然屏障導(dǎo)致組織臟器的感染。,7,美國(guó)死于感染性疾病的十大原因,真菌感染的死亡率上升了3.4倍 （死亡率：0.7~2.4 /100,000）,8,EORTC/MSG原稱侵襲性真菌感染（IFI），修訂后改稱IFD； 是指真菌侵入人體，在組織、器官或血液中生長(zhǎng)、繁殖，并導(dǎo)致炎癥反應(yīng)及組織損傷的疾病。是真菌感染致死的重要原因,侵襲性真菌病(Invasive Fung

6、al Disease ,IFD),9,侵襲性真菌病已變得越來(lái)越常見(jiàn),10,侵襲性真菌感染的診斷標(biāo)準(zhǔn),G試驗(yàn)可作為擬診病例的微生物學(xué)標(biāo)志,11,主要可引發(fā)侵襲性真菌病的疾病,腫瘤類：胃癌，肝癌，肝內(nèi)膽管癌，肺癌，多發(fā)性骨髓瘤，白血病，惡性淋巴瘤,12,二、真菌與?葡聚糖,2024/3/29,13,1. 某些真菌的細(xì)胞壁結(jié)構(gòu),2. 細(xì)胞壁含有?葡聚糖組分的真菌：（1）是導(dǎo)致侵襲性真菌病(IFD)的常見(jiàn)真菌。（2）細(xì)胞壁有?葡聚糖組分,

7、2024/3/29,14,這類真菌有：念珠菌曲霉菌耶氏肺孢菌鐮刀酶隱球菌 接合菌 .......,2024/3/29,15,北京301醫(yī)院尸檢結(jié)果（77～97年）肺真菌病發(fā)生率3.7％ (38/1027 ),隱球菌病、接合菌病占真菌病比例不高,16,當(dāng)人體深部受這類真菌感染時(shí)，真菌在代謝過(guò)程會(huì)不斷釋放出?葡聚糖。檢查患者的血液（血漿或血清），會(huì)發(fā)現(xiàn)?葡聚糖含量明顯高于非感染者。因此，?葡聚糖可作為具有這種細(xì)胞結(jié)構(gòu)的真

8、菌感染標(biāo)識(shí)物。,2024/3/29,17,三、鱟試驗(yàn)與G試驗(yàn),1. 鱟（Hòu，后）試驗(yàn),2024/3/29,18,鱟是地球上最古老的海洋生物之一，已有三億多年的歷史，人們稱它為“活化石”。,雌,雄,2024/3/29,19,研究發(fā)現(xiàn)，鱟的循環(huán)細(xì)胞（阿米巴細(xì)胞）中含有一種特殊的凝固酶原。這種凝固酶原可以被自然界廣泛存在的兩種物質(zhì)激活為凝固酶，從而導(dǎo)致一系列的生化反應(yīng)。這兩種物質(zhì)就是脂多糖(Lipopolysaccharide,

9、 LPS)和(1-3)-?-D葡聚糖。,2024/3/29,20,人們利用鱟的阿米巴細(xì)胞溶胞物制備成了鱟試劑（LAL或TAL）。通常稱使用鱟試劑檢測(cè)脂多糖（LPS）或?-葡聚糖（?-G）的試驗(yàn)為鱟試驗(yàn)（LAL Test or TAL Test）。,2024/3/29,21,2. 鱟試驗(yàn)反應(yīng)機(jī)理,22,3. 鱟試驗(yàn)的應(yīng)用,應(yīng)用I：細(xì)菌內(nèi)毒素檢查(Bacterial Endotoxin Test, BET),2024/3/29,23,研

10、究發(fā)現(xiàn)，革蘭氏陰性細(xì)菌的細(xì)胞壁都含有一種叫內(nèi)毒素(Endotoxin)的組分。,2024/3/29,24,內(nèi)毒素是能夠引起哺乳動(dòng)物原反應(yīng)的主要熱原物質(zhì)。 革蘭氏陰性細(xì)菌在新陳代謝過(guò)程不斷地向環(huán)境釋放內(nèi)毒素，污染藥品和醫(yī)療器械。因此注射藥品和醫(yī)療器械都要求必須作細(xì)菌內(nèi)毒素檢查（BET）。,2024/3/29,25,應(yīng)用II：革蘭氏陰性菌脂多糖檢測(cè),2024/3/29,26,細(xì)菌內(nèi)毒素的化學(xué)成分是脂多糖。當(dāng)人體深部感染革蘭氏陰

11、性菌時(shí)，細(xì)菌會(huì)在體內(nèi)不斷釋放內(nèi)毒素（脂多糖）。檢查患者的血液（血漿）、腹水、尿液及腦脊液，會(huì)發(fā)現(xiàn)脂多糖明顯高于非感染者。 脂多糖檢測(cè)對(duì)敗血癥、嚴(yán)重器官衰竭的快速輔助診斷有臨床價(jià)值。,2024/3/29,27,應(yīng)用III：真菌(1-3)-?-D葡聚糖檢測(cè),2024/3/29,28,醫(yī)學(xué)上通常把用于檢測(cè)真菌?葡聚糖的鱟試驗(yàn)稱為G試驗(yàn)。這是取葡聚糖的英文名稱Glucan的首字母來(lái)命名該試驗(yàn)。,2024/3/29,29,需要指

12、出的是，隱球菌的細(xì)胞壁雖然有?葡聚糖組分，在隱球菌感染患者的血液中卻檢測(cè)不出?葡聚糖異常。這可能與隱球菌具有特殊的細(xì)胞被膜有關(guān)。因此G試驗(yàn)不適合對(duì)隱球菌感染的檢測(cè)。,2024/3/29,30,四、G試驗(yàn)——臨床意義,31,G試驗(yàn)的臨床意義,32,G試驗(yàn)的臨床意義,33,34,35,G試驗(yàn)應(yīng)用科室,36,五、“生物探針”介紹,37,“生物探針”介紹,38,“生物探針”介紹,39,“生物探針”介紹,40,“生物探針”介紹,41,“生物探針”

13、功能,快速定量的臨床檢測(cè)方法，幫助臨床醫(yī)生早期診斷目前常規(guī)方法難以判斷的侵襲性真菌感染、革蘭氏陰性菌感染，便于對(duì)感染的早期診斷、早期治療及對(duì)治療的療效判定。,可檢測(cè)標(biāo)本 ： 血漿、血清、尿液、腹水、腦脊液等,42,六、“生物探針”操作流程,43,“生物探針”操作流程,44,“生物探針”操作流程,45,“生物探針”操作流程,46,“生物探針”操作流程,47,“生物探針”操作流程,48,“生物探針”操作流程,49,“

14、生物探針”操作流程,50,“生物探針”操作流程,數(shù)據(jù)可接入LIS系統(tǒng)等,51,侵襲性真菌感染的臨床檢測(cè)方法對(duì)比,52,產(chǎn)品特點(diǎn),靈敏度高快速,檢測(cè)方法嚴(yán)謹(jǐn),準(zhǔn)確性高,特異性好,臨床符合率高,53,七、“生物探針”的臨床比對(duì),J廠家的?-G試劑、LPS試劑均無(wú)特異性,54,最低檢測(cè)限最低濃度重復(fù)性,廠商安度斯最低檢測(cè)限10pg/ml編號(hào)檢測(cè)結(jié)果(pg/ml)陰性(pg/ml) 檢測(cè)日期1

15、10.3 <1.3 3.6210.1 311.049.859.8610.8710.1810.099.61010.3 CV=6.85%1110.0129.81310.714

16、9.81512.41610.3179.7189.6199.4209.9219.6,批內(nèi)精密度,批間精密度,“生物探針”的臨床比對(duì),評(píng)價(jià)結(jié)論：安度斯產(chǎn)品的綜合性能具有明顯優(yōu)勢(shì)。,58,八、G試驗(yàn)的影響因素,2024/3/29,59,1. 檢測(cè)試劑的靈敏度1.1 ?葡聚糖的量值與標(biāo)準(zhǔn)品,2024/3/29,60,2024/3/29,61,目前G試驗(yàn)中?葡聚糖采用的單位為重量單位“p

17、g”。pg是一個(gè)非常非常微量的單位。因此G試驗(yàn)是一項(xiàng)非常靈敏的生物檢測(cè)。當(dāng)然，越是靈敏精確的檢測(cè)，越容易受到干擾。,目前?葡聚糖沒(méi)有公認(rèn)的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)！沒(méi)有國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)品，沒(méi)有國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)品，也沒(méi)有公認(rèn)的行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)品，只有企業(yè)的標(biāo)準(zhǔn)品（質(zhì)控品）,2024/3/29,62,各企業(yè)的?葡聚糖標(biāo)準(zhǔn)品的來(lái)源不一。有的來(lái)自茯苓多糖，有的來(lái)自香菇多糖，有的來(lái)自海藻多糖。不同來(lái)源的?葡聚糖對(duì)鱟試劑的活性不同。各企業(yè)的?葡聚糖標(biāo)準(zhǔn)品效價(jià)不一。你的1pg可能相當(dāng)我

18、的10pg。相互之間無(wú)可比性。,2024/3/29,63,無(wú)統(tǒng)一的標(biāo)準(zhǔn)品導(dǎo)致不同廠家試劑盒有不同的參考值。有的是?10pg為陽(yáng)性，有的是?100pg為陽(yáng)性。對(duì)參考值的表示各廠家也有所不同。有的以全血含量來(lái)表示，有的以檢測(cè)濃度來(lái)表示。,2024/3/29,64,1.2 試驗(yàn)器具對(duì)G試驗(yàn)有重要的影響！?葡聚糖是自然界廣泛存在的一種物質(zhì)，極容易污染到試驗(yàn)器具。?葡聚糖是一種非常穩(wěn)定的物質(zhì)，通常的蒸煮高壓、輻照等滅菌手段不能徹底破壞?葡聚

19、糖。很難找到真正意義的無(wú)?葡聚糖的器具。,2024/3/29,65,G試驗(yàn)使用到的實(shí)驗(yàn)器具：采血針采血管（瓶）反應(yīng)試管移液器具（吸頭）最主要的污染來(lái)自采血管！,2024/3/29,66,重要建議最好使用廠家供應(yīng)的專用采血管（瓶）其次是用經(jīng)廠家檢測(cè)合格的采血管不能使用未經(jīng)檢測(cè)的實(shí)驗(yàn)器具,2024/3/29,67,尊重科學(xué)，為患者負(fù)責(zé)！ 無(wú)效試驗(yàn)是對(duì)患者最大的危害！,2024/3/29,68,2.試劑的生物特異性

20、 如前所述，G試驗(yàn)的檢測(cè)試驗(yàn)就是鱟試劑。鱟試劑可以對(duì)兩種物質(zhì)反應(yīng)，用于不同的用途。如下圖表示。 檢測(cè)內(nèi)毒素/脂多糖 用于革蘭氏陰性菌檢測(cè)鱟試劑 檢測(cè)?葡聚糖（G試驗(yàn)） 用于真菌檢測(cè),2024/3/29,69,在檢測(cè)試劑制備上，應(yīng)根據(jù)試劑的用途制備生物特異性強(qiáng)的檢測(cè)試劑，如：用于檢測(cè)細(xì)菌脂多糖的試劑，不能對(duì)?葡聚糖產(chǎn)生反應(yīng)。用于檢測(cè)真菌?葡聚糖的試劑，不能對(duì)脂

21、多糖產(chǎn)生反應(yīng)。,2024/3/29,70,遺憾的是，由于技術(shù)的原因，并不是所有廠家的試劑都具有生物特異性。有的試劑盒對(duì)LPS和?-G都反應(yīng)。有的試劑盒對(duì)非檢測(cè)對(duì)象低濃度時(shí)可能不反應(yīng)，較高濃度時(shí)會(huì)反應(yīng)。 無(wú)生物特異性的試劑盒不能區(qū)分細(xì)菌感染和真菌感染，不具有臨床檢測(cè)價(jià)值！,2024/3/29,71,2024/3/29,72,鑒別試劑盒是否具有生物特異性的方法： 用該試劑盒與LPS/?-G的標(biāo)準(zhǔn)品（質(zhì)控品）

22、反應(yīng)。,3. 某些藥物對(duì)G試驗(yàn)的影響3.1 臨床應(yīng)用發(fā)現(xiàn)，注射過(guò)香菇多糖注射液的供試者作G試驗(yàn)，其血液中?葡聚糖含量會(huì)顯著增高。因此需要作G試驗(yàn)的供試者應(yīng)在24小時(shí)內(nèi)避免使用香菇多糖注射液。,2024/3/29,73,3.2 臨床應(yīng)用發(fā)現(xiàn)，使用過(guò)脂肪乳的供試者作G試驗(yàn)（包括作LPS檢測(cè)），反應(yīng)曲線形態(tài)會(huì)發(fā)生異常，致使檢測(cè)值非常高。因此需要作G試驗(yàn)的供試者應(yīng)在24小時(shí)內(nèi)避免使用脂肪乳。,2024/3/29,74,?-G檢測(cè)的正常反應(yīng)曲線