第22章主要病原性真菌ppt課件

1、第22章  主要病原性真菌 真菌按其侵犯的部位和臨床表現(xiàn)，可分為淺部真菌、深部真菌和條件致病性真菌 第一節(jié) 淺部感染真菌 寄生或腐生于角蛋白組織 (表皮角質(zhì)層、毛發(fā)、甲板) 的真菌統(tǒng)稱(chēng)淺部真菌。一般不侵犯皮下等深部組織和內(nèi)臟，故不引起全身性感染。淺部真菌可分為皮膚癬菌和角層癬菌兩大類(lèi)。人類(lèi)感染多因接觸患者或患畜，亦可由于接觸染菌物體而被感染,1,一 表面感染真

2、菌 這類(lèi)真菌主要寄居于皮膚和毛干的最表層。可引起皮膚表面出現(xiàn)黃褐色的花斑癬，如汗?jié)n斑點(diǎn)，俗稱(chēng)汗斑。該菌具有噬脂性 此菌短粗、分枝的有隔菌絲和成叢的酵母樣細(xì)胞,2,二、皮膚癬真菌 寄生于皮膚角蛋白組織淺部真菌稱(chēng)為皮膚癬菌。由其引起的皮膚癬,尤其手足癬是人類(lèi)最多見(jiàn)的真菌病。皮膚癬菌分為: 毛癬菌 表皮癬菌 小孢子癬菌 3個(gè)屬

3、 皮膚癬菌可在沙保弱培養(yǎng)基上生長(zhǎng)，形成絲狀菌落。根據(jù)菌落的形態(tài)、顏色和所產(chǎn)生的大、小分生孢子，可對(duì)其作初步鑒定 ,3,(1) 表皮癬菌屬 對(duì)人有致病作用的只有絮狀表皮癬菌 。 可侵犯人表皮、甲板，但不侵犯毛發(fā)。臨床上可致體癬、足癬、手癬、股癬和甲癬等，多發(fā)生于熱帶地區(qū) 表皮癬菌菌落開(kāi)始如鵝毛狀，繼而轉(zhuǎn)為黃綠色粉末狀，鏡下可見(jiàn)有典型桿狀大分生孢子， 菌絲較細(xì)、有分隔，間或可見(jiàn)球拍狀菌絲、結(jié)節(jié)狀菌絲及螺旋狀菌絲

4、 ,4,(2) 毛癬菌屬 毛癬菌屬有20個(gè)種，其中13種對(duì)人有致病性。一般可引起人的皮膚、毛發(fā)和甲板感染，但各菌的親嗜性不盡相同 毛癬菌菌落，可呈顆粒狀、粉末狀、絨毛狀。顏色為白色、 紅色、橙黃色、或棕色。鏡下可見(jiàn)細(xì)長(zhǎng)、薄壁、棒狀、兩端鈍圓的大分生孢子以及側(cè)生、散在或呈葡萄狀的小分生孢子菌絲有螺旋狀、球拍狀、鹿角狀和結(jié)節(jié),5,,體癬分離的紅色毛癬菌培養(yǎng)物 菌落初為白色棉花樣，很快發(fā)展為粉末狀，菌落背面產(chǎn)生

5、淡紅色至紫色的色素，不同菌株的顏色差異很大,6,3 小孢子癬菌 目前小孢子菌屬已有15個(gè)種。主要侵犯毛發(fā)與皮膚，引起頭癬、體癬。在我國(guó)主要有奧杜安小孢子菌 、犬小孢子菌 和石膏樣小孢子菌 小孢子菌屬菌落呈絨毛狀或粉末狀，表面粗糙。菌落顏色呈灰色、桔紅色或棕黃色。鏡下可見(jiàn)厚壁的梭形大分生孢子。卵圓形的小分生孢子長(zhǎng)在菌絲的側(cè)枝末端。菌絲有隔，呈結(jié)節(jié)狀、球拍狀和梳狀,7,致病性 一種皮膚癬菌可在不同部位引起病變，相

6、同部位的病變可由不同的皮膚癬菌引起 甲癬（俗稱(chēng)灰指甲），指甲失去光澤，增厚、變形。毛癬菌屬和表皮癬菌屬均可引起 皮膚癬主要由紅色毛癬菌引起，占淺表真菌培養(yǎng)陽(yáng)性率56% 頭癬多見(jiàn)于青少年，男多于女，成年后少見(jiàn)。表現(xiàn)為 頭發(fā)脆而易斷，主要由接觸或理發(fā)工具傳播,8,皮膚癬菌的種類(lèi)、侵犯部位及傳染來(lái)源,9,三 皮下組織真菌感染 皮下組織感染真菌主要有著色真菌與孢子絲菌，經(jīng)外傷侵入

7、皮下，感染最初發(fā)生于真皮深層、皮下組織或骨，逐漸擴(kuò)散，最后可達(dá)到皮下。一般感染只限于局部，但也可擴(kuò)散至周?chē)M織。孢子絲菌經(jīng)淋巴管擴(kuò)散；著色真菌經(jīng)血行或淋巴管擴(kuò)散,10,（一）著色真菌 著色真菌是一些在分類(lèi)上接近，引起的疾病癥狀近似真菌的總程。 本菌在組織中為厚壁、圓形細(xì)胞；培養(yǎng)基上生長(zhǎng)緩慢，菌落呈暗棕色。鏡檢可見(jiàn)棕色有隔菌絲，在分枝、側(cè)面或頂端形成分生孢子梗，梗上產(chǎn)生棕色圓形橢圓形的分生孢子。分生孢子有樹(shù)枝形

8、、劍頂形、花瓶形等不同形狀，是鑒定本菌的重要依據(jù),11,著色真菌一般由外傷侵入人體，感染多發(fā)于顏面、下肢、臀部等暴露部位，潛伏期約一個(gè)月，長(zhǎng)者數(shù)月乃至一年，甚至幾十年。開(kāi)始患處為丘疹、結(jié)節(jié)、結(jié)節(jié)融合成疣狀或菜花狀。病損皮膚呈境界鮮明的暗紅色或黑色區(qū)，故稱(chēng)著色真菌病。亦侵犯深部組織，呈慢性感染過(guò)程。在機(jī)體全身免疫功能低下時(shí)可侵犯中樞神經(jīng)系統(tǒng)，發(fā)生腦內(nèi)感染 ,12,（二） 孢子絲菌屬 孢子絲菌屬于腐生性真菌，自然界分布廣

9、泛，從土壤塵埃和植物表面可分離出該菌 常因外傷接觸帶菌的花草、荊棘等引起感染。感染主要病原菌為申克氏孢子絲菌。本菌為雙相型真菌,13,形態(tài)和培養(yǎng) 用患者標(biāo)本 (膿、痰、血、病變組織) 制片，油鏡下觀(guān)察可見(jiàn)梭形或圓形孢子。在沙保弱培養(yǎng)基上25℃培養(yǎng) 3-5d，可長(zhǎng)出灰白色粘稠小點(diǎn)，然后擴(kuò)大成黑褐色皺膜狀菌落，鏡下可見(jiàn)有分隔菌絲及成群的梨形小分生孢子。在含胱氨酸的血平板培養(yǎng)基上37℃培養(yǎng)，則以芽生方式形成酵母型菌落 ,

10、14,致病性 人類(lèi)感染本菌主要是通過(guò)有創(chuàng)傷的皮膚接觸了染菌土壤或植物，孢子絲菌侵入皮下組織、淋巴管，形成亞急性或慢性肉芽腫，使淋巴管出現(xiàn)鏈狀硬結(jié)，稱(chēng)為孢子絲菌性下疳。亦可經(jīng)口或呼吸道侵入，沿血行擴(kuò)散至其他器官。任何年齡均可發(fā)病，世界各地均有病例報(bào)道。我國(guó)大部分地區(qū)皆已發(fā)現(xiàn)，以東北地區(qū)為多見(jiàn) ,15,第二節(jié) 深部感染真菌  凡是侵犯表皮及其附屬器以外的組織和器官的病原性真菌或條件致病性真菌，均可稱(chēng)為深部真

11、菌。深部真菌感染的危害比淺部真菌感染更為嚴(yán)重，?？梢鹬匕Y、致死性疾病。近年來(lái)，由于抗生素、皮質(zhì)類(lèi)固醇激素、免疫抑制劑及抗腫瘤藥物的廣泛應(yīng)用，深部真菌病發(fā)病率日益增加?，F(xiàn)將主要的深部致病性真菌介紹如下,16,一 新生隱球菌 新生隱球菌 屬于隱球菌屬。隱球菌屬種類(lèi)繁多，在自然界分布廣泛，鴿糞中大量存在。人因吸入鴿糞污染的空氣而感染，特別是免疫功能低下者主要引起肺腦的急性或亞急性或慢性感染 ,17,(一) 生物學(xué)性狀

12、 1 新生隱球菌的形態(tài)： 新生隱球菌為圓形的酵母樣細(xì)胞，直徑4-12μm，外周有一層肥厚的膠質(zhì)樣莢膜。莢膜比菌體可大1-3倍。本菌以芽生方式繁殖，常呈單芽，有時(shí)出現(xiàn)多芽。芽頸較細(xì)，但不生假菌絲,18,,有莢膜的新生隱球菌形態(tài)HE染色鏡檢,,,19,無(wú)莢膜的新生隱球菌GMS染色鏡檢,20,2 新生隱球菌的培養(yǎng)與分型 新生隱球菌在沙保弱與血瓊脂培養(yǎng)基上，于25℃和37℃皆能生長(zhǎng)，數(shù)天后長(zhǎng)成酵母型菌落，表面

13、粘稠，由乳白色逐漸轉(zhuǎn)變?yōu)榻埸S色，最后成棕褐色  新生隱球菌莢膜由多糖構(gòu)成，根據(jù)其抗原性可分為A、B、C、D 4個(gè)血清型。臨床分離株多屬于A(yíng)與D型,21,(二) 致病性 1 致病物質(zhì) 莢膜多糖是新生隱球菌的是重要的致病物質(zhì)。有抑制吞噬、誘使動(dòng)物免疫無(wú)反應(yīng)性、降低機(jī)體抵抗力的作用 新生隱球菌經(jīng)紫外線(xiàn)照射后失去莢膜，對(duì)小鼠致病力也消失，一旦莢膜恢復(fù)，致病力也恢復(fù),22,2 新型隱球菌的所致疾病 隱

14、球菌病 在人與人之間不發(fā)生接觸性傳染。通過(guò)呼吸道吸入孢子是主要的感染方式。最初感染灶多在肺部。肺部感染一般預(yù)后良好。 也可以播散至全身各個(gè)臟器，如皮膚、粘膜、淋巴結(jié)、骨、內(nèi)臟等均可受累，最易侵犯的是中樞神經(jīng)系統(tǒng)，引起慢性腦膜炎。腦膜炎的預(yù)后不良，如不治療，常導(dǎo)致患者死亡。,23,(三) 微生物學(xué)檢查法  1.直接鏡檢 使用墨汁涂片法：取CSF離心后取沉渣，痰和膿汁則直接加墨汁在玻片上作負(fù)染后鏡檢。見(jiàn)到直徑4-12

15、μm的圓形菌體，外周有一圈透明的肥厚莢膜即可確診 ,24,2.培養(yǎng) 沙保弱培養(yǎng)基，25℃或37℃培養(yǎng)，發(fā)育較快，2-5d即可生長(zhǎng)出乳白色、粘液性細(xì)菌型菌落，呈不規(guī)則圓形，表面有蠟樣光澤。繼續(xù)培養(yǎng)則菌落增厚，顏色由乳白、奶油色轉(zhuǎn)變?yōu)榻埸S色。從菌落取菌鏡檢可見(jiàn)圓形或卵圓形菌體，無(wú)假菌絲,25,(四) 防治方法 治療肺部或皮膚病變，用5-氟胞嘧啶酮康唑、伊曲康唑有效。中樞神經(jīng)系統(tǒng)隱球菌病可選用二性霉素乙、廬山霉素靜脈滴

16、注或伊曲康唑口服，必要時(shí)加用鞘內(nèi)注射。鳥(niǎo)糞是動(dòng)物和人的主要傳染源。減少鴿子數(shù)量，或用堿處理鴿糞，可控制此病的發(fā)生,26,第三節(jié) 條件致病性真菌 條件致病性真菌感染多為內(nèi)原性感染，如假絲酵母菌病和曲霉菌病等，這類(lèi)菌雖然致病性弱，但不即時(shí)治療也可危機(jī)生命,27,一、假絲酵母菌 假絲酵母菌俗稱(chēng)念珠菌，本屬中有81個(gè)種，其中7個(gè)種有致病性。白色念珠菌亦稱(chēng)白色假絲酵母菌，為該屬中最常見(jiàn)的致病菌，可引起皮膚、

17、粘膜及內(nèi)臟的念珠菌病 但近年來(lái)，白色假絲酵母菌感染逐漸減少，而其他假絲酵母菌逐漸增多，這種流行病學(xué)轉(zhuǎn)換現(xiàn)象應(yīng)引起重視,28,(一) 生物學(xué)性狀 菌體圓形或卵圓形，直徑3-6μm。G＋，主要以出芽方式繁殖，在組織內(nèi)易形成芽生孢子及假菌絲；培養(yǎng)時(shí)白色念珠菌常在假菌絲中間或其末端形成厚膜孢子，為本菌特征之一,,白色假絲酵母菌假菌絲,29,白色念珠菌培養(yǎng) 白色念珠菌在普

18、通瓊脂、血瓊脂與沙保弱培養(yǎng)基上均生長(zhǎng)良好。需氧，室溫或37℃孵育2-3d長(zhǎng)出菌落，呈典型類(lèi)酵母樣，灰色或奶油色，表面光滑，帶有膿厚的酵母氣味。在陳舊培養(yǎng)物上則菌落增大，顏色變深，質(zhì)地變硬或有皺褶。血瓊脂37℃培養(yǎng)10d，可形成中等大小暗灰色菌落,30,（二) 致病性與免疫性 白色念珠菌屬于條件致病菌，通常存在于人的口腔、上呼吸道、腸道與陰道粘膜。當(dāng)機(jī)體發(fā)生菌群失調(diào)或抵抗力降低時(shí)(如AIDS)，可引起各種念珠菌病,31,

19、1.皮膚、粘膜感染 皮膚念珠菌感染好發(fā)于皮膚潮濕、皺褶部位，如腋窩、腹股溝、乳房下、肛門(mén)周?chē)?、?huì)陰部及指 (趾) 間等處。可引起濕疹樣皮膚念珠菌病、肛門(mén)周?chē)W癥及肛門(mén)周?chē)鷿裾詈椭搁g糜爛癥等。粘膜感染則可見(jiàn)有鵝口瘡 、口角糜爛、外陰與陰道炎等。其中以鵝口瘡最為多見(jiàn)。鵝口瘡多見(jiàn)于體質(zhì)虛弱的初生嬰兒，尤以人工喂養(yǎng)兒較多,32,2.內(nèi)臟感染 有肺炎、支氣管炎、腸炎、膀胱炎和腎盂腎炎等，偶爾也可引起敗血癥  3.中樞神經(jīng)

20、系統(tǒng)感染 可有腦膜炎、腦膜腦炎、腦膿腫等。中樞神經(jīng)系統(tǒng)念珠菌病多由原發(fā)病灶轉(zhuǎn)移而來(lái) 對(duì)白色假絲酵母菌過(guò)敏的人，在皮膚上可以發(fā)生變態(tài)反應(yīng)性假絲酵母菌疹，癥狀很像皮膚癬疹和濕疹。患者可表現(xiàn)有哮喘癥狀,33,二 曲霉 曲霉 在自然界廣泛分布，生長(zhǎng)迅速，種類(lèi)很多，在沙氏培養(yǎng)基上形成絲狀菌落?？倲?shù)可達(dá)300種 。其中少數(shù)屬于條件致病菌，以煙曲霉最為常見(jiàn)。最常見(jiàn)的疾病如下：,34,1.肺曲霉菌病 ①真菌球型肺曲

21、霉菌病 是在器官早已有空腔存在 (如結(jié)核空洞，副鼻竇，擴(kuò)張的支氣管) 的基礎(chǔ)上發(fā)生。在那里曲霉菌不侵犯組織，不播散 ②肺炎型曲霉菌病 曲霉菌在肺內(nèi)播散，引起壞死性肺炎或咯血，并可繼發(fā)播散到其他器官。本病常見(jiàn)于免疫缺損或免疫受抑制的患者； ③過(guò)敏性支氣管肺曲霉菌病 是一種超敏反應(yīng)疾病,35,2.全身性曲霉菌病 原發(fā)病灶主要在肺，少見(jiàn)于消化道，多數(shù)是由敗血癥引起的全身性感染。本病多發(fā)生在某些重癥疾病的晚期。生前很難得到正

22、確診斷 3.中毒與致癌 有些曲霉菌產(chǎn)生的毒素，可引起人或動(dòng)物急、慢性中毒，損傷肝、腎、神經(jīng)等組織。特別是黃曲霉毒素與人類(lèi)肝癌的發(fā)生有密切關(guān)系,36,三 毛霉 毛霉廣泛存在于自然環(huán)境中，為面包、水果和土壤中的腐生菌。常引起食物霉變，在重病或惡性疾病晚期，機(jī)體抵抗力極度衰弱時(shí)易合并本菌感染，醫(yī)源性輸液和污染的繃帶等可導(dǎo)致感染。毛霉是人類(lèi)條件致病菌,37,毛霉感染大多首先發(fā)生在鼻或耳部，經(jīng)唾液流入上頜竇和眼眶，形成

23、肉芽腫。后經(jīng)血流入腦部，引起腦膜炎。嚴(yán)重病例毛霉菌擴(kuò)散至全身，可導(dǎo)致死亡，病死率很高 由于發(fā)病急，病情進(jìn)展快，因而生前診斷比較困難，多通過(guò)尸體病理組織檢查才能確診,38,四 卡氏肺孢菌 卡氏肺孢菌或稱(chēng)肺囊菌。在自然界存在廣泛，可引健康人亞臨床感染。對(duì)于一些先天性免疫缺陷的人或因各種原因受到免疫抑制的人，可引起肺炎。開(kāi)始為間質(zhì)性肺炎，最終患者因窒息而死亡。愛(ài)滋病患者當(dāng)白細(xì)胞降至200/mm3時(shí)，80%以上可受感染

24、,39,第三篇 病毒學(xué),病毒是最微小，結(jié)構(gòu)最簡(jiǎn)單的微生物。它具有如下特點(diǎn)： 個(gè)體小；結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單，僅有一種核酸；專(zhuān)性細(xì)胞內(nèi)寄生；以復(fù)制的方式繁殖；對(duì)抗生素不敏感 病毒在醫(yī)學(xué)微生物中占有十分重要的地位，在人類(lèi)傳染病中，由病毒引起的約占75%，已成為科學(xué)關(guān)注的熱點(diǎn),40,一 病毒的大小,病毒的大小以毫微米(nm) 表示。一般說(shuō) 某一病毒的大小是指該病毒體的大小。所謂病毒體 (virion) 是指有感染性的完整病毒顆

25、粒。各種病毒的大小相差很大，一般病毒大小介于50nm-250nm之間；其中絕大多數(shù)病毒都在100nm左右。較大的病毒如痘病毒為300nm ，在普通光學(xué)顯微鏡下勉強(qiáng)可看出其輪廓；小的病毒如微小RNA病毒和微小DNA病毒直徑約為20nm左右,41,二 病毒的形態(tài) 病毒的形態(tài)多種多樣。絕大多數(shù)動(dòng)物病毒呈球形或近似球形；植物病毒多呈桿狀或絲形 (某些動(dòng)物病毒如流感病毒有時(shí)也呈絲狀)；此外，有的呈磚形 (痘病毒)、或子彈形 (狂

26、犬病病毒)；噬菌體 (細(xì)菌病毒) 則多呈蝌蚪形。有些病毒的形態(tài)比較固定，如微小RNA病毒呈球形；但某些病毒的形態(tài)則是多形性的，如粘病毒,42,,,,逆轉(zhuǎn)錄病毒科,,正粘病毒科,,腺病毒科,,呼腸病毒科,,批蓋病毒科,,乳多空病毒科,,小核糖核酸病毒科,,微小病毒科,,絲狀病毒科,,噬菌體,,,各種病毒的形態(tài)與大小比較,,磚 形,,球,,形,,100nm,,標(biāo)尺,,小型病毒,,蝌蚪形,,桿 形,,中小型病毒,,中大型病毒,

27、,大型病毒,,彈 形,痘,痘病毒科,副粘病毒科,,皰疹病毒科,,本楊病毒科,彈狀病毒科,43,三 病毒的結(jié)構(gòu) 病毒的結(jié)構(gòu)可分為基本結(jié)構(gòu)和輔助結(jié)構(gòu) (一) 基本結(jié)構(gòu) 包括兩部分，即病毒的核心和衣殼 ，二者構(gòu)成核衣殼。裸露病毒的核衣殼就是病毒體    1 病毒核心 是病毒體的中心結(jié)構(gòu)，由一種類(lèi)型核酸即DNA或RNA組成。除核酸外還可能有少量功能蛋白質(zhì)如病毒核酸多聚酶、轉(zhuǎn)錄酶或逆轉(zhuǎn)

28、錄酶等 病毒核酸是決定病毒的感染、增殖、遺傳、變異的遺傳物質(zhì),44,2.病毒衣殼 是包圍在病毒核心外面的一層蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)。它是由一定數(shù)量殼粒組成的。殼粒是衣殼的形態(tài)學(xué)亞單位，在電鏡下可以觀(guān)察到殼粒彼此都呈對(duì)稱(chēng)型排列。衣殼不僅有保護(hù)核酸的作用，還能介導(dǎo)病毒進(jìn)入宿主細(xì)胞并有抗原性。不同病毒核酸形態(tài)和結(jié)構(gòu)不同，殼粒數(shù)目和排列也不相同。根據(jù)殼粒排列方式不不同可分為以下幾種對(duì)稱(chēng)型： ,45,(1) 螺旋對(duì)稱(chēng)型 是殼粒沿著盤(pán)旋的病毒核

29、酸鏈呈螺旋形對(duì)稱(chēng)排列 。見(jiàn)于正粘病毒、副粘病毒及彈狀病毒等 (2) 20面體對(duì)稱(chēng)或立體對(duì)稱(chēng)型 其衣殼的殼粒呈立體對(duì)稱(chēng)排列。動(dòng)物病毒多呈20面體對(duì)稱(chēng)，即有20個(gè)等邊三角形的面，12個(gè)頂角30個(gè)棱邊。在其棱邊、三角形及頂角上皆有對(duì)稱(chēng)排列的殼粒。不同病毒其殼粒數(shù)目也不相同。這可作為鑒別及分類(lèi)的依據(jù)之一 (3) 復(fù)合對(duì)稱(chēng)型 指既有立體對(duì)稱(chēng)又有螺旋對(duì)稱(chēng)的病毒。如痘病毒和噬菌體 ,46,（二） 輔助結(jié)構(gòu)  

30、 病毒的包膜 是包圍在病毒核衣殼外面的雙層膜。 病毒以出芽方式釋放時(shí)，獲得胞膜中的脂質(zhì)、多糖成分和少許蛋白質(zhì)。有些病毒其包膜表面有釘狀突起，稱(chēng)為包膜子粒 或刺突 ，賦予病毒一些特殊功能,47,第二節(jié) 病毒的核酸與蛋白質(zhì)  一 病毒核酸 （一）多樣性 病毒的核酸位于病毒的中心，其化學(xué)成分為DNA和RNA 核酸具有多樣性,可為線(xiàn)型或環(huán)型，可為雙鏈RNA單鏈RNA、分節(jié)段RNA、單鏈DNA或雙鏈NDA。病毒的核酸

31、攜帶著病毒的全部遺傳信息，是病毒的基因組。有內(nèi)含子病毒基因組與真核細(xì)胞的基因組相似（內(nèi)含子：是指指那些插入到編碼系列的非編碼系列），病毒的轉(zhuǎn)錄和轉(zhuǎn)譯均需在細(xì)胞內(nèi)進(jìn)行，并完成轉(zhuǎn)錄后加工,48,（二）有內(nèi)含子 病毒基因組與真核細(xì)胞的基因組相似，有內(nèi)含子，病毒的轉(zhuǎn)錄和轉(zhuǎn)譯均需在細(xì)胞內(nèi)進(jìn)行，并完成轉(zhuǎn)錄后加工 （三）克隆與表達(dá) 病毒的核酸決定病毒的感染性、復(fù)制特性、遺傳性的基礎(chǔ)。目前對(duì)已完成對(duì)病毒代表種的基因克隆和核苷酸測(cè)序。還可用定

32、位點(diǎn)突變、缺失突變等研究病毒基因片段的功能。通過(guò)將編碼有抗原性與保護(hù)性蛋白的基因克隆入表達(dá)載體后，可大量表蛋白并加以利用，發(fā)展為重組疫苗,49,(一) 病毒的分離  1.動(dòng)物接種 是最原始的病毒分離方法。常用的動(dòng)物有小鼠、大鼠、豚鼠、家兔和猴等，接種途徑有鼻內(nèi)、皮內(nèi)、皮下、腦內(nèi)、腹腔及靜脈等?？筛鶕?jù)病毒的嗜性選擇敏感動(dòng)物與適宜的接種部位，如嗜神經(jīng)病毒可注射于小鼠腦內(nèi)；柯薩奇病毒可接種于乳鼠腦內(nèi)或腹腔內(nèi)。接種后主要觀(guān)察動(dòng)物的發(fā)

33、病情況。腦內(nèi)接種一般觀(guān)察2w，皮下及其他途徑觀(guān)察3w。當(dāng)動(dòng)物瀕死時(shí)可取病變組織剪碎，研磨成懸液后繼續(xù)傳代接種,50,2.雞胚培養(yǎng) 孵化9-14d的雞胚，按病毒種類(lèi)接種于不同部位  (1) 接種部位： ①絨毛尿囊膜接種 用于培養(yǎng)天花病毒、痘苗病毒及HSV等  ②尿囊腔接種 用于流感病毒及腮腺炎病毒的培養(yǎng)等 ③羊膜腔接種 用于流感病毒的初次分離培 ④卵黃囊接種 用于某些嗜神經(jīng)病毒的培養(yǎng)

34、 (2) 觀(guān)察雞胚的變化,51,3 細(xì)胞培養(yǎng) 可用原代細(xì)胞、二倍體細(xì)胞與傳代細(xì)胞系等3種細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng) （1) 原代細(xì)胞培養(yǎng) 以無(wú)菌技術(shù)將動(dòng)物或組織直接用蛋白酶消化所獲得的細(xì)胞，如人胚腎、猴腎、雞胚細(xì)胞等經(jīng)培養(yǎng)貼于瓶壁，數(shù)天后長(zhǎng)成單層細(xì)胞，稱(chēng)原代細(xì)胞培養(yǎng)，一般只能傳2-3代即退化衰亡 。主要作為標(biāo)本中分離病毒的工具,52,（2) 2倍體細(xì)胞株 是指細(xì)胞在體外分裂50-60代后仍保持2倍染色體數(shù)目的單層細(xì)胞。但經(jīng)多

35、次傳代，二倍體細(xì)胞也會(huì)出現(xiàn)細(xì)胞老化，以至停止分裂死亡。常用的2倍體細(xì)胞株有來(lái)自人胚肺的WI-26與WI-38株等，用于人類(lèi)病毒的分離或病毒疫苗生產(chǎn),53,（3) 傳代細(xì)胞系 是指能在體外無(wú)限分裂與傳代的細(xì)胞，多由癌細(xì)胞或2倍體細(xì)胞突變而來(lái)。常用的有HeLa細(xì)胞、Hep-2細(xì)胞、FL細(xì)胞、Vero細(xì)胞與MK細(xì)胞、BHK-21細(xì)胞等。傳代細(xì)胞繁殖率高，易于傳代和保存。若將這類(lèi)細(xì)胞懸浮于含10%二甲基亞砜的培養(yǎng)基放置液氮中可長(zhǎng)期保存。傳代