MMP-9、TIMP-1在兔頸動(dòng)脈粥樣硬化形成過程中的表達(dá)及意義的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、新世紀(jì)以來，由于人們生活水平的提高、生活方式的變化，頸動(dòng)脈狹窄已逐步成為人們生命健康安全威脅的主要原因之一；頸動(dòng)脈狹窄的病因主要是因?yàn)轭i動(dòng)脈粥樣硬化（Carotid atherosclerosis，CAS）形成導(dǎo)致的頸動(dòng)脈管腔的狹窄，其發(fā)病的概率較高，在60歲以上的人群中患頸動(dòng)脈粥樣硬化性狹窄者高達(dá)9％，其好發(fā)生于頸內(nèi)動(dòng)脈的起始段及頸總動(dòng)脈的分叉。頸動(dòng)脈的狹窄及閉塞均可導(dǎo)致腦缺血，從而產(chǎn)生缺血性腦卒中，嚴(yán)重的可能導(dǎo)致死亡。
　　近

2、年來，人們對(duì)CAS的病理生理學(xué)的認(rèn)識(shí)有了明顯的轉(zhuǎn)變，CAS被認(rèn)為是主動(dòng)的炎癥性過程，而不單純是脂質(zhì)的浸潤。在CAS過程中，基質(zhì)金屬蛋白酶(Matrix metalloproteinases,MMPs))和金屬蛋白酶組織抑制因子(Tissue Inhibitor of Metalloproteinases,TIMPs)失衡會(huì)導(dǎo)致血管內(nèi)皮細(xì)胞外基質(zhì)和基底膜過度降解，是形成 CAS的主要原因之一?；罨蟮哪z原酶（ MMP-9)能降解細(xì)胞外基質(zhì)

3、（Extracellular matrix ECM)，打破了ECM合成與降解的平衡，從而使膠原過多沉積,進(jìn)而影響血管重構(gòu)。MMPs在動(dòng)脈粥樣硬化（Atherosclerosis,AS）形成方面的研究己逐步成為近些年來研究的熱點(diǎn)。本實(shí)驗(yàn)主要探討了兔CAS形成過程中MMP-9及TIMP-1的表達(dá)情況及其意義，旨在為CAS的形成過程中的發(fā)病機(jī)制及早期診斷提供一定的理論基礎(chǔ)。
　　目的：首先復(fù)制穩(wěn)定的新西蘭兔CAS模型，觀察其病理改變特征

4、,探討動(dòng)脈管壁及斑塊組織中基質(zhì)金屬蛋白酶（ MMP）-9和金屬蛋白酶組織抑制因子（TIMP）-1表達(dá)水平與CAS形成的關(guān)系，建立CAS形成的重要分子機(jī)制,提供頸動(dòng)脈粥樣硬化性狹窄疾病干預(yù)靶點(diǎn)。
　　方法：選擇新西蘭純種健康大白兔共24只，雌雄各半，體重在2.1至4.1千克之間，采用氣體干燥損傷法結(jié)合高脂食物連續(xù)飼養(yǎng)建立CAS形成動(dòng)物模型；實(shí)驗(yàn)分為A、B、C、D四組（每組6只），A組為空白對(duì)照（不做任何處理，普通飼料喂養(yǎng)），B組建模

5、后結(jié)合高脂食物連續(xù)飼養(yǎng)2周，C組建模后結(jié)合高脂食物連續(xù)飼養(yǎng)4周，D組建模后結(jié)合高脂食物連續(xù)飼養(yǎng)8周；建模后耳緣靜脈空氣栓塞處死，經(jīng)原頸部切口解剖頸總動(dòng)脈，取得頸動(dòng)脈管壁及斑塊組織，制作切片標(biāo)本。HE染色法觀察頸動(dòng)脈管壁變化及斑塊形成情況；免疫組織化學(xué)染色法檢測(cè)動(dòng)脈管壁及斑塊內(nèi)MMP-9和TIMP-1的半定量表達(dá)；Western blot法檢測(cè)動(dòng)脈管壁及斑塊組織中MMP-9和TIMP-1蛋白的相對(duì)表達(dá)水平。
　　結(jié)果：HE染色結(jié)果提

6、示，A組頸動(dòng)脈內(nèi)膜光滑，局部無明顯粥樣硬化斑塊形成，而B組有少量斑塊形成，斑塊內(nèi)有少量炎性細(xì)胞浸潤，而C組和D組可見頸動(dòng)脈內(nèi)膜不均勻性增厚，局部看見管腔狹窄，泡沫細(xì)胞聚集明顯增多，內(nèi)皮細(xì)胞較明顯腫脹變性，中膜平滑肌細(xì)胞增生明顯，巨噬細(xì)胞和脂質(zhì)沉積量明顯增多，較多脂質(zhì)纖維帽形成，提示CAS造模成功。免疫組織化學(xué)染色結(jié)果提示，A組管壁中可見少量MMP-9和TIMP-1染色陽性；B組動(dòng)脈管壁及斑塊組織中MMP-9和TIMP-1染色陽性稍增多；

7、C組和D組動(dòng)脈管壁及斑塊組織中MMP-9染色陽性明顯增多，而TIMP-1染色陽性則明顯減少， D組MMP-9染色陽性細(xì)胞及強(qiáng)度明顯高于C組，而TIMP-1染色陽性細(xì)胞及強(qiáng)度則低于C組。提示在CAS形成過程中,頸動(dòng)脈管壁及斑塊組織中MMP-9的表達(dá)逐漸增高，而TIMP-1的表達(dá)則在一定程度上呈現(xiàn)下降趨勢(shì)。Western blot結(jié)果提示，A組組織中有少量MMP-9和TIMP-1蛋白表達(dá)，B組中MMP-9和TIMP-1蛋白表達(dá)水平升高，而C