干細(xì)胞內(nèi)毒素檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程sop-zk-003

1、GMP質(zhì)量管理文件編號(hào)：SOPZK003第0頁共9頁干細(xì)胞內(nèi)毒素檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程（SOP）北京賽托森生物科技發(fā)展有限公司質(zhì)量管理GMP質(zhì)量管理文件編號(hào)：SOPZK003第2頁共9頁品，需調(diào)節(jié)被測(cè)溶液（或其稀釋液）的pH值，可使用酸、堿溶液或適宜的緩沖液調(diào)節(jié)pH值。酸或堿溶液須用細(xì)菌內(nèi)毒素檢查用水在已去除內(nèi)毒素的容器中配制。緩沖液必須經(jīng)過驗(yàn)證不含內(nèi)毒素和干擾因子。6.供試品細(xì)菌內(nèi)毒素的限值(L)藥典有明確規(guī)定的按照藥典規(guī)定值，如無規(guī)定需經(jīng)

2、計(jì)算得出，具體計(jì)算方法見各藥典。7.供試品最大有效稀釋倍數(shù)(MVD)和最小有效稀釋濃度的確定(MVC)最大有效稀釋倍數(shù)是指在試驗(yàn)中供試品溶液被允許達(dá)到稀釋的最大倍數(shù)(1→MVD)，在不超過此稀釋倍數(shù)的濃度下進(jìn)行內(nèi)毒素限值的檢測(cè)。用以下公式來確定MVD，MVD=cLλ。式中L為供試品的細(xì)菌內(nèi)毒素限值；c為供試品溶液的濃度，當(dāng)L以EUml表示時(shí)，則c為1mlml，當(dāng)L以EUmg或EUU表示時(shí)，c的單位需為mgml或Uml。如供試品為注射用無

3、菌粉末或原料藥，則MVD取1，可計(jì)算供試品的最小有效稀釋濃度c=λL；λ為在凝膠法中鱟試劑的標(biāo)示靈敏度EUml（商品包裝上有標(biāo)示）。舉例：設(shè)設(shè)鱟試劑的靈敏度為0.25EUml，即λ=0.25EUml，英國(guó)藥典規(guī)定檸檬酸的限值L為0.5IUmg(IU與EU等同)，由于檸檬酸為固體，則可以通過c=λL，確定最小有效稀釋濃度，即MVC=0.250.5=0.5mgml。8.設(shè)備和試劑8.1電子天平8.2電熱滅菌干燥箱，溫度能達(dá)到250攝氏度8.

4、3恒溫水浴或恒溫培養(yǎng)箱，能滿足恒溫在371℃8.4渦旋混合器8.5無菌工作臺(tái)8.6微量加樣器，200ul8.7去熱源一次性吸頭8.8凝集管(10mm75mm)8.9管架8.10錫紙8.11鱟試劑，應(yīng)具有國(guó)家主管部門的批準(zhǔn)文號(hào)。7.12細(xì)菌內(nèi)毒素國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)品或細(xì)菌內(nèi)毒素工作標(biāo)準(zhǔn)品，除另有規(guī)定外，應(yīng)使用由中國(guó)藥典生物制品檢定所統(tǒng)一發(fā)放的標(biāo)準(zhǔn)品7.13細(xì)菌內(nèi)毒素檢查用水，內(nèi)毒素含量應(yīng)小于0.015EUml7.13細(xì)菌內(nèi)毒素檢查用pH緩沖溶液注：

5、以上試劑推薦使用廈門鱟試劑實(shí)驗(yàn)廠有限公司湛江安度斯生物有限公司及湛江博康海洋生物公司9.實(shí)驗(yàn)器皿去熱源實(shí)驗(yàn)所用的器皿需經(jīng)處理，取出可能存在的外源性內(nèi)毒素。通常玻璃器皿首先細(xì)菌，再用錫紙包裹放入250℃干燥箱中進(jìn)行干熱滅菌。而使用不耐熱的塑料器皿，應(yīng)選用表面無內(nèi)毒素并且對(duì)實(shí)驗(yàn)無干擾的器械。10.鱟試劑的靈敏度符合實(shí)驗(yàn)在本檢查法規(guī)定的條件下，使鱟試劑產(chǎn)生凝集的內(nèi)毒素的最低濃度即為鱟試劑的標(biāo)示靈敏度，用EUml表示。當(dāng)使用新批號(hào)的鱟試劑或試驗(yàn)