ⅰ.pparγ與小分子以及相關受體蛋白的相互作用研究ⅱ.sars冠狀病毒刺突蛋白免疫片段的熱力學和動力學研究

1、中國海洋大學博士學位論文Ⅰ.PPARγ與小分子以及相關受體蛋白的相互作用研究Ⅱ.SARS冠狀病毒刺突蛋白免疫片段的熱力學和動力學研究姓名：余長纓申請學位級別：博士專業(yè)：海洋生物學指導教師：戴繼勛;沈旭20040601I I ．S A R S 冠狀病毒刺突蛋白免疫片段的熱力學和動力學研究嚴重急性呼吸綜合癥( S e v e r e A c u t e R e s p i r a t o r yS y n d r o m e ，S A R

2、S ) 是一種嚴重的呼吸道疾病，S A R S 冠狀病毒被確認為該疾病的元兇，S A R S 冠狀病毒的刺突蛋白做為病毒的外層包被蛋白對于病毒進攻人體細胞具有非常重要的作用。本論文中，對S A R S 冠狀病毒刺突蛋白的免疫片段S 1 b ( A l a 2 5 1 - - H i s 6 4 1 1 進行了表達純化以及生化性質(zhì)的討論，為研究S A R S 刺突蛋白的結(jié)構和功能特性提供更多的信息。含有該片段基因整合在p E T 3 2

3、c 載體中在大腸桿菌中獲得充分高表達，帶有H i s 等標簽的融合蛋白利用柱上酶切法和分子篩層析進行了純化。純化后的S l b 蛋白通過圓二色性( C D ) 、色氨酸熒光分析和停流C D 光譜分析等方法研究了其熱力學和動力學特性。熒光實驗發(fā)現(xiàn)該片段在熱變性過程中表面活化能為1 6 ．3 ±0 ．2 K c a l ．m o l ～，而熱變性轉(zhuǎn)化溫度( T 。) 為5 2 ．5 ±0 ．4 。C ；圓二色性實驗發(fā)現(xiàn)熱

4、變性過程中沒有二級結(jié)構的變化，說明該片段的二級結(jié)構骨架具有相對的熱穩(wěn)定性。鹽酸胍作為變性劑對于S l b 影響較大，C D 和熒光實驗均證實鹽酸胍變性濃度( C 。) 約為2 ．3 8 M 。停流實驗分別監(jiān)測了該蛋白片段的鹽酸胍化學變性和復性過程，并首次利用動力學實驗得到的馳豫時間( T ) 計算了變性濃度C 。，這成為了研究穩(wěn)態(tài)和動態(tài)兩種形式下蛋自變性過程的紐帶。同時對于S A R S 冠狀病毒S l b 片段的結(jié)構我們還進行了同源模