抗SARS相關(guān)冠狀病毒重組纖突蛋白、核衣殼蛋白單克隆抗體的制備和應(yīng)用研究.pdf

1、嚴(yán)重急性呼吸綜合征(severeacuterespiratorysyndrome，SARS)又稱為傳染性非典型肺炎，是一種新出現(xiàn)的烈性傳染病。世界衛(wèi)生組織(WHO)已確認(rèn)該病的病原體為一種新的冠狀病毒，命名為SARS冠狀病毒(SARS-CoV)。SARS疫病全球暴發(fā)給國(guó)際社會(huì)造成了極大的恐慌，給世界各國(guó)的衛(wèi)生事業(yè)以及經(jīng)濟(jì)發(fā)展帶來了嚴(yán)重后果。但是SARS在臨床上鑒別診斷比較困難，因此建立安全、特異、敏感的SARS-CoV抗原檢測(cè)方法對(duì)SA

2、RS的早期診斷、預(yù)防和治療具有重要意義。 本研究旨在制備抗基因工程表達(dá)的纖突蛋白(S)、核衣殼蛋白(N)的單克隆抗體(mAb)，初步建立早期檢測(cè)SARS-CoV抗原的雙抗體夾心ELISA方法。我們以基因工程表達(dá)的S、N蛋白為免疫原，采用常規(guī)雜交瘤技術(shù)分別制備分泌抗S、N蛋白的mAb雜交瘤細(xì)胞株；對(duì)其進(jìn)行鑒定，包括細(xì)胞克隆株穩(wěn)定性和染色體分析，檢測(cè)雜交瘤細(xì)胞培養(yǎng)上清及腹水中mAb效價(jià)、免疫球蛋白(Ig)分型，特異性分析，中和試驗(yàn)，

3、以及相關(guān)表位分析。以抗S蛋白、N蛋白抗體分別建立雙抗體夾心ELISA法檢測(cè)SARS-CoV抗原，對(duì)180份健康人血清、臨床診斷為SARS的12份抗體陰性血清和12份抗體陽性血清進(jìn)行檢測(cè)。結(jié)果如下：成功制備出了3株分泌抗S蛋白mAb(B8G2，B10F6，C10G10)和2株分泌抗N蛋白mAb(F2G6G3，G5H12G12)的雜交瘤細(xì)胞株；雜交瘤細(xì)胞染色體計(jì)數(shù)接近兩種親本細(xì)胞染色體數(shù)目的總和；細(xì)胞培養(yǎng)上清和小鼠誘生腹水中mAb效價(jià)高；3

4、株抗S蛋白mAb均為IgG1(κ)，而抗N蛋白mAbG5H12G12為IgG2a(κ)、F2G6G3為IgG1(κ)；單抗特異性強(qiáng)；抗S蛋白的mAb的中和滴度為1∶25，mAbB8G2、B10F6與mAbC10G10可能識(shí)別不同的抗原表位。雙抗體夾心ELISA方法檢測(cè)180份健康人血清S抗原結(jié)果均為陰性；利用N蛋白抗體建立雙抗體夾心ELISA方法在12份臨床診斷為SARS、抗體陰性的病例中檢測(cè)到4份陽性標(biāo)本；而利用S蛋白抗體建立的雙抗體