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文檔簡介
1、第一軍醫(yī)大學碩士學位論文利多卡因對成年大鼠海馬CA區(qū)錐體細胞L-型Ca單通道特性的影響姓名:張慶國申請學位級別:碩士專業(yè):臨床麻醉學指導教師:徐世元20030527入裝有2 m l 低鈣緩沖液的試管中,用三根尖端經火拋光的P a s t e u r 吸管梯度吹打使細胞游離。吹打好的細胞懸液靜置3 m i n ,吸取中層滴加于蓋玻片上,粘附1 0 ~1 5 m i n 。倒掉未粘附上的組織碎片和細胞,將蓋玻片放入加有1 ~2 “浴槽液的記
2、錄浴槽中即可進行離子通道記錄。( 二) 采用膜片鉗技術的細胞貼附記錄模式進行離子通道記錄。匯錄采用細胞貼附( C e l l —a t t a c h e d ) 記錄模式,微電極用電極拉制器拉制,入水電阻為6 ~9 M Q ,封接電阻大于5 G Q 。放大器反饋電阻設置為5 0 G D ,低通濾波頻率為l k H z ,采樣頻率5 k H z ,間隔5 s 。用去極化脈沖對c a 2 + 通道進行激活,用p C L A M P ( v
3、 e r s i o n 8 .0 ,A x o nI n s t r u m e n t s )C l a m p e x 程序進行數據采集,用F e t c h a n 和p S T A T 對離子通道進行分析。首先鑒定和觀察海馬神經元上L 一型c a ”通道的基本電生理學和藥理學特性。利多卡因經微量加樣器依次加入浴槽液中,濃度逐次累加形成6 個終濃度( 0 、2 、4 、8 、1 6 、3 2 I x g /m 1 ) ,記錄不同
4、濃度下利多卡因對L 一型c a ”單通道活動的影響,資料存入硬盤以備分析和進行統計處彈。三、結果:( 一) 分離出的成年大鼠海馬C A l 區(qū)錐體細胞形態(tài)學特征保存完好,符合實驗條件的細胞游離、呈錐形、活性好、貼壁好,整個細胞胞膜清晰、胞體透亮、胞漿均勻一致并保存有較長的軸突、樹突,軸突可長達2 0 0 u m 以上?;钚约毎€保存了L .型C a 2 + 通道的基本電生理學和藥理學特性,易于鑒別。( 二) 低濃度利多卡因( 2 、4
5、“∥戚) 對L .型C a 2 + 通道的活動無明顯影響;濃度達8 、1 6 “g /r m 時,L 一型C a 2 + 通道平均開放時間由對照6 .1 0±0 .2 5 m s 分別增加到8 .1 2 ±0 .3 0 m s ( P < 0 .0 5 ) 、7 .7 1 ±0 .5 4 m s ( P < 0 .0 5 ) ,濃度達3 2 “g /m l 時,開放時間反而降至4 .8 9
6、177;0 .2 2m s ( P < 0 .0 5 ) ;濃度為8 、1 6 、3 2I .t g /m l 時,整體平均電流分別為0 .8 0 4 ±0 .0 9 2p A ( P < O .0 5 ) 、0 .6 6 8 ±O .0 7 3p A ( 尸< O .0 5 ) 、0 .3 7 0 ±0 .0 5 2p A ( P < O .0 5 ) ;當利多卡因達到一定濃度(
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