大鼠缺氧缺血性腦損傷對(duì)海馬CA1區(qū)錐體細(xì)胞功能與發(fā)育的影響.pdf

1、圍生期窒息所致的缺氧缺血性腦損傷(neonatal hypoxic-ischemic encephalopathy，NHIE)常引起新生兒死亡和神經(jīng)系統(tǒng)的發(fā)育障礙。針對(duì)新生兒缺氧缺血性腦病防治的研究已成為一項(xiàng)直接關(guān)系國(guó)民素質(zhì)和生活質(zhì)量的重要課題。
　　 NHIE造成的主要病理改變是病變部位神經(jīng)元的丟失。而在損傷過(guò)程中，海馬對(duì)缺氧缺血尤其敏感，損傷也最為嚴(yán)重。在治療大腦缺氧缺血損傷過(guò)程中，有眾多干預(yù)手段，糖皮質(zhì)激素(GC)就是其中

2、之一。臨床應(yīng)用糖皮質(zhì)激素治療NHIE的目的是對(duì)抗大腦水腫和炎癥，保護(hù)神經(jīng)細(xì)胞，但是目前就糖皮質(zhì)激素應(yīng)用于新生兒缺氧缺血性腦病的治療策略等問(wèn)題上還存在較大的爭(zhēng)論。糖皮質(zhì)激素治療在NHIE大鼠海馬錐體細(xì)胞整體形態(tài)的發(fā)育過(guò)程中扮演一個(gè)怎樣的角色，最終對(duì)突觸可塑性造成怎樣的決定性作用等問(wèn)題還缺少相關(guān)報(bào)道。
　　 本研究應(yīng)用生后7天SD大鼠，經(jīng)左側(cè)頸總動(dòng)脈結(jié)扎結(jié)合8％氧氣環(huán)境缺氧90分鐘，建立缺氧缺血性腦損傷動(dòng)物模型。采用海馬腦片膜片鉗技

3、術(shù)記錄缺氧缺血腦損傷后海馬CA1區(qū)錐體細(xì)胞電生理活動(dòng)的改變情況以及糖皮質(zhì)激素的作用；應(yīng)用Golgi-cox鍍銀染色結(jié)合圖像分析技術(shù)觀察各組大鼠海馬CA1區(qū)錐體細(xì)胞樹(shù)突發(fā)育情況；應(yīng)用Morris水迷宮評(píng)價(jià)大鼠學(xué)習(xí)記憶功能的行為學(xué)改變；同時(shí)應(yīng)用免疫組化和western blot技術(shù)檢測(cè)缺氧缺血損傷大鼠海馬VGluT1、NMDAR、ANMPR、synaptophisin、GLT1的表達(dá)變化及糖皮質(zhì)激素的治療效果。通過(guò)上述實(shí)驗(yàn)得到以下結(jié)果：

4、r>　　 第一部分：
　　 1.缺氧缺血性腦損傷后大鼠海馬CA1區(qū)錐體細(xì)胞興奮性呈現(xiàn)下降的趨勢(shì)；錐體細(xì)胞自發(fā)興奮性突觸后電流(eEPSCs)發(fā)放頻率增加；刺激shaffer側(cè)枝誘發(fā)的CA1區(qū)錐體細(xì)胞興奮性突觸后電流(EPSCs)幅度無(wú)顯著改變，但是時(shí)程增長(zhǎng)。
　　 2.糖皮質(zhì)激素對(duì)對(duì)照組和模型組損傷側(cè)海馬錐體細(xì)胞興奮性突觸后電流的幅度和時(shí)程無(wú)明顯作用，而使模型組損傷對(duì)側(cè)海馬EPSC幅度明顯增加。
　　 3.缺氧

5、缺血性腦損傷后立即取材進(jìn)行western blot檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)大鼠海馬CA1區(qū)錐體細(xì)胞GLT1表達(dá)的明顯降低，而NMDAR、AMPAR、synaptophisin的表達(dá)無(wú)變化。
　　 第二部分：
　　 1.缺氧缺血性腦損傷后，大鼠海馬CA1區(qū)錐體細(xì)胞樹(shù)突發(fā)育障礙，殘存神經(jīng)元樹(shù)突總長(zhǎng)度和樹(shù)突棘密度均降低，海馬部位神經(jīng)原纖維密度也減小。
　　 2.在缺氧缺血損傷組的損傷對(duì)側(cè)(本研究的右側(cè)海馬)海馬錐體細(xì)胞樹(shù)突有超常發(fā)育

6、現(xiàn)象，樹(shù)突總長(zhǎng)度和樹(shù)突棘密度均較對(duì)照組高。
　　 3.缺氧缺血性腦損傷后應(yīng)用糖皮質(zhì)激素治療對(duì)損傷海馬錐體細(xì)胞樹(shù)突發(fā)育有改善作用，使模型動(dòng)物雙側(cè)海馬神經(jīng)元的樹(shù)突發(fā)育水平趨于均衡。
　　 第三部分：
　　 1.Morris水迷宮結(jié)果顯示缺氧缺血性腦損傷大鼠定位航行實(shí)驗(yàn)潛伏期延長(zhǎng)，空間探索實(shí)驗(yàn)在平臺(tái)象限游泳時(shí)間明顯縮短，應(yīng)用糖皮質(zhì)激素治療組大鼠成績(jī)無(wú)明顯改善。
　　 2.缺氧缺血性腦損傷后，大鼠海馬CA1區(qū)NM

7、DAR1、VGluT1、synaptophisin等蛋白分子的表達(dá)明顯降低，糖皮質(zhì)激素治療能夠部分阻止這種蛋白表達(dá)下降，但是不能恢復(fù)到正常水平。
　　 依據(jù)這些結(jié)果，我們得到如下結(jié)論：
　　 一、缺氧缺血性腦損傷后海馬錐體細(xì)胞發(fā)生電生理特性的改變，神經(jīng)元興奮性下降；細(xì)胞外谷氨酸滅活障礙可能是導(dǎo)致海馬錐體細(xì)胞興奮毒性損傷的主要原因之一。
　　 二、缺氧缺血性腦損傷后，大鼠海馬CA1區(qū)錐體細(xì)胞樹(shù)突發(fā)育障礙，殘存神經(jīng)元

8、樹(shù)突總長(zhǎng)度和樹(shù)突棘密度均降低；在缺血損傷對(duì)側(cè)(本研究的右側(cè)海馬)海馬錐體細(xì)胞有超常發(fā)育現(xiàn)象。
　　 三、缺氧缺血性腦損傷后應(yīng)用糖皮質(zhì)激素治療對(duì)海馬錐體細(xì)胞樹(shù)突發(fā)育有改善作用，能夠使模型動(dòng)物雙側(cè)海馬神經(jīng)元的樹(shù)突發(fā)育水平趨于均衡。
　　 四、缺氧缺血性腦損傷后，與神經(jīng)元突觸功能執(zhí)行相關(guān)的一些蛋白分子的表達(dá)較正常對(duì)照組有明顯的降低，預(yù)示神經(jīng)元功能的持續(xù)改變。
　　 五、缺氧缺血性腦損傷嚴(yán)重影響大鼠學(xué)習(xí)記憶功能，損傷后給