雙腎雙夾高血壓大鼠發(fā)病過程中腦基底動脈平滑肌細(xì)胞ca39;2激活cl39;通道的變化

1、中山大學(xué)碩士學(xué)位論文i 7 6 6 7 6 0雙腎雙夾高血壓大鼠發(fā)病過程中腦基底動脈平滑肌細(xì)胞C a 2 + 激活C 1 ．通道的變化I n v e s t i g a t i o n o f A l t e r a t i o n o fC a l c i u m - a c t i v a t e d C h l o r i d eC h a n n e l i nR a t B a s i l a r a r t e r yS m

2、 o o t h M u s c l e C e l l sd u r i n gt h e P a t h o l o g i c a lP r o c e s s o f H y p e r t e n s i o n碩士研究生：謝朝琴導(dǎo) 師：關(guān)永源教授專 業(yè)：藥理學(xué)研究方向：心血管藥理中山大學(xué)中山醫(yī)學(xué)院藥理教研室答辯委員會主席答辯委員會委員答辯時間：2 0 0 5 年2 0 0 5 年5 月于廣縫。饕享≥吖嚆上勺^ ?(杉，、侈

3、弛弘和高血壓發(fā)病過程中大鼴臍基底動脈平滑肌細(xì)胞鈣激活性氯通道的變化 中文摘要研究發(fā)現(xiàn)，高血壓發(fā)病過程中c l _ 超載參與了血壓增高、腎血管阻力增加、外周血管損傷、血流動力學(xué)改變等過程。高血壓血管平滑肌胞漿c l l 濃度升高，其c r 的調(diào)節(jié)功能也存在異常。高血壓對，血管平滑肌細(xì)胞N a + ．K + ．2 C i 繁運蛋自、K + 一C F 轉(zhuǎn)運蛋白、C 1 一- H C 0 3 ’轉(zhuǎn)運蛋白、泵I Ⅱ等表達(dá)增加。C A C C 在調(diào)

4、節(jié)胞漿c l _ 外流中起著重要作用，在高血壓發(fā)病過程中C A C C 究竟發(fā)生什么樣的變化呢?第一部分：基底動脈平滑肌細(xì)胞C a 2 + 激活C r 通道的特性用酶急性消化得到基底動脈平滑肌細(xì)胞，并對分離的細(xì)胞進(jìn)行鑒定。用全細(xì)胞膜片鉗技術(shù)觀察新鮮分離的基底動脈平滑肌細(xì)胞上是否存在C A C C 。結(jié)果顯示：l _ 新鮮分離腦基底動脈平滑肌細(xì)胞的存活率及鑒定。顯微鏡下可見新鮮分離基底動脈平滑肌細(xì)胞呈棒狀、曲棍狀或長條形。臺盼藍(lán)染色可見死

5、細(xì)胞被染成深藍(lán)色，活細(xì)胞拒染，活細(xì)胞的比率> 9 5 ％。A n t i —a s m o o t h m u s c l ea c t i n 免疫組化結(jié)果顯示平滑肌細(xì)胞內(nèi)肌絲被染成棕黃色，平滑肌細(xì)胞的比率，9 5 ％。2 ．破膜后基底動脈平滑肌細(xì)胞可記錄到一基礎(chǔ)電流，在灌流中加入l O um o l ／L A T P 后電流開始增強最后達(dá)最大值并穩(wěn)定于該水平。當(dāng)刺激電壓從測試電位回到保持電位時，可記錄到緩慢失活的尾電流( n

6、= 6 f r o m 5 r a t s ) 。一1 0 0m V 和+ 1 0 0 m V 時，A T P 處理后平滑肌細(xì)胞的電流密度分別從基礎(chǔ)條件下的．7 ．2 6 4 -4 ．3 8 p M p F 和1 4 ．2 4 士4 ．8 6 p A ／p F 增加到- 1 1 ．3 5 士4 ．5 6 p A ／p F 和4 4 ．8 4 - a = 3 ．0 7 p A ／p F 。( P < O ．0 1 ) ，電流的反轉(zhuǎn)電

7、位為E r = 3 ．7 7 士5 ．3 0 m V ，接近c l ‘的平衡電位( E c l ．= 0 m V ) 。該電流的激滔具有時間、電壓依賴性和外向整流特性。3 ．將細(xì)胞外c l - 濃度從1 3 3 m m o l ／L ，降低為4 4 m m o l ／L ，用天冬氨酸( a s p a r t a t e 。) 代替灌流液中c 1 ．。在+ 1 0 0 m V 時，該電流的從4 2 ．8 0 士4 ．2 5 p A ／p

8、 F降低到2 1 ．7 6 士3 ．7 2 p M p F ( P < 0 ．0 1 ) ，其反轉(zhuǎn)電位從3 ．7 7 士5 ．3 0 m V 變?yōu)? 6 ．6 9 士5 ．5 2 m V ( P ( 0 ．0 1 ，n = 2f r o m 2 r a t s ) 。4 ．在．1 0 0 m V 和+ 1 0 0 m V 時，1 0 0 um o l ／L N F A 使C A C C 電流密度從一1 1 ．3 5 士4 ．5 6

9、 p A ／p F 和4 4 ．8 4 - a = 3 ．0 7 p A ／p F 降低為一5 ．1 8 士0 ．3 6 p A ／p F 和1 7 ．3 9 士9 ．4 4p A ／p F ( P < O ．O l ，n = 4 f r o m 4 r a t s ) ，加入N F A 后該電流的反轉(zhuǎn)電位為E r= - 0 ．5 9 生5 ．3 0 m V ，接近于接近C I - 的平衡電位( F ．a(chǎn) - - - 0 m V