尿毒癥對(duì)大鼠主動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞大電導(dǎo)鈣激活鉀通道的影響.pdf

1、背景：目前尿毒癥發(fā)病率居高不下，大血管的病變已成為致死致殘的一個(gè)重要并發(fā)癥，但其機(jī)制尚不清楚，可能與離子通道信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)異常有關(guān)。大電導(dǎo)鈣激活鉀通道（BK通道）在血管平滑肌細(xì)胞上表達(dá)豐富，對(duì)維持血管平滑肌細(xì)胞的膜電位及血管收縮和舒張的動(dòng)態(tài)平衡具有重要的調(diào)節(jié)作用。尿毒癥時(shí)血管重構(gòu)可能與BK通道功能異常有關(guān)。
　　目的：探討尿毒癥對(duì)大動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞BK通道的影響，闡述尿毒癥大動(dòng)脈損傷的分子機(jī)制。
　　方法：
　?。?）將各項(xiàng)檢

2、測(cè)基線(xiàn)值無(wú)顯著差異的大鼠隨機(jī)分為兩組，尿毒癥模型組采用5/6腎大部分切除法，對(duì)照組行假手術(shù)只分離腎被膜。兩組大鼠均于術(shù)前和術(shù)后2、8、16、24、30、36周時(shí)化驗(yàn)血清尿素氮（BUN）、肌酐（Scr），以判斷大鼠模型是否建立成功，并測(cè)量鼠尾動(dòng)脈收縮壓（SBP）觀(guān)察模型組大鼠血壓的動(dòng)態(tài)變化。模型構(gòu)建成功后，兩組大鼠左側(cè)腎臟組織及胸腹主動(dòng)脈下端進(jìn)行蘇木精-伊紅(HE)染色法和或馬松三色染色法（Masson）染色處理后用于病理分析，觀(guān)察腎臟和

3、血管結(jié)構(gòu)的病理改變。
　?。?）急性酶消化法分離大鼠胸腹主動(dòng)脈得到單個(gè)平滑肌細(xì)胞后，全細(xì)胞膜片鉗實(shí)驗(yàn)技術(shù)記錄平滑肌細(xì)胞 BK通道電流。
　　（3）采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)（QPCR）和Western blot技術(shù)測(cè)定大鼠胸腹主動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞BK通道亞單位的mRNA和蛋白的相對(duì)表達(dá)量。
　　結(jié)果：
　?。?）動(dòng)物模型的驗(yàn)證：①腎功能：與對(duì)照組相比，模型組大鼠至少?gòu)男g(shù)后第2周開(kāi)始出現(xiàn)血肌酐（Scr）、尿素氮（BUN

4、）升高，在36周時(shí)血肌酐值為（102.67±3.28）μmol/L，血尿素氮高達(dá)（24.78±5.14）mmol/L，符合造模要求。②腎臟病理變化：模型組殘腎體積增大，形狀不規(guī)則，鏡下殘腎可見(jiàn)腎小管及間質(zhì)炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，腎小管萎縮斷裂擴(kuò)張，腎小球硬化，腎間質(zhì)纖維化。③血管病理改變：模型組大鼠主動(dòng)脈壁局部增厚，平滑肌細(xì)胞增生。④SBP變化：術(shù)前兩組大鼠血壓無(wú)明顯差異，模型組大鼠（n=15）SBP至少?gòu)男g(shù)后第2周開(kāi)始顯著升高，第2周時(shí)對(duì)照組大

5、鼠（n=12）血壓為（113.5±3.6）mmHg，模型組大鼠血壓為（128.7±5.4）mmHg，兩組相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；且隨術(shù)后時(shí)間的延長(zhǎng)，模型組血壓逐步升高，在術(shù)后第8、16、24、30、36周時(shí)模型組血壓值分別為（141.2±4.8）mmHg、（153.9±7.4）mmHg、（163.5±6.7） mmHg、(174.2±6.6) mmHg、（181.3±7.7）mmHg，和對(duì)照組比較后差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0

6、.05）；
　?。?）主動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞BK通道電流變化：當(dāng)刺激電壓>10mV時(shí)，模型組主動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞BK通道電流密度較對(duì)照組明顯降低（P<0.05），在刺激電壓為+70mV時(shí)，電流密度分別為（199±17）pA／pF和（85±13）pA／pF（n=6）；
　?。?）BKα亞基和β1亞基mRNA的表達(dá)：應(yīng)用2-ΔΔCt的計(jì)算方法，將對(duì)照組大鼠目的基因2-ΔΔCt值設(shè)定為對(duì)照值1，得出模型組大鼠的BKα亞基和BKβ1亞基mRN

7、A的表達(dá)均較對(duì)照組明顯降低（P<0.05）；
　?。?）BKα亞基和β1亞基蛋白的表達(dá)：使用內(nèi)參β-actin標(biāo)準(zhǔn)化，Western Blot檢測(cè)發(fā)現(xiàn)模型組BK通道α亞基和βl亞基蛋白表達(dá)與mRNA表達(dá)趨勢(shì)一致，均較對(duì)照組低（P<0.05）。
　　結(jié)論：
　　（1）5/6腎切除可以引起腎形態(tài)學(xué)和功能上的改變，而且腎臟的損傷可進(jìn)一步導(dǎo)致系統(tǒng)性動(dòng)脈高血壓，左心室肥厚，主動(dòng)脈重構(gòu)，說(shuō)明該模型適用于尿毒癥及其心血管病并發(fā)癥的研