地氟醚預(yù)處理調(diào)節(jié)內(nèi)皮細(xì)胞nfkb振蕩

1、復(fù)旦大學(xué)碩士學(xué)位論文後旦大學(xué)碩士學(xué)位論文學(xué)校代碼：1 0 2 4 6學(xué) 號(hào)：0 9 2 1 1 2 1 0 0 2 8地氟醚預(yù)處理調(diào)節(jié)內(nèi)皮細(xì)胞N F - KB 振蕩一 f l u r a n e p r e c o n d i t i o n i n g i n d u c e s o s c i l l a t i o n o fN F - K B D e s t l U r a n ei n d U c e s o s c i l

2、l a t i o n N F K B D r e C 0 n n l t l o n l n g -i ne n d o t h e l i a lc e l l s系： 復(fù)旦大學(xué)附屬中山醫(yī)院業(yè)： 麻醉學(xué)名： 易 娟指導(dǎo)教師： 朱彪副教授完成曰期： 2 0 1 2 年4 月2 2 日本課題承2 0 0 9 年度國(guó)家自然科學(xué)基金項(xiàng)目資助院專姓復(fù)旦大學(xué)碩士學(xué)位論文地氟醚預(yù)處理調(diào)節(jié)內(nèi)皮細(xì)胞N F ．K B 振蕩中文摘要第一部分地氟醚預(yù)處理對(duì)

3、臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞缺氧／復(fù)氧損傷的保護(hù)作用目的：分離培養(yǎng)原代人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞( h u m a n u m b i l i c a lv e i n e n d o t h e l i a lc e i l s ，H U V E C s ) ，研究地氟醚預(yù)處理對(duì)H U V E C s 缺氧／復(fù)氧損傷所起的保護(hù)作用。方法：采用膠原酶灌注消化法分離培養(yǎng)H U V E C s ，以Ⅷ因子相關(guān)抗原免疫熒光方法進(jìn)行鑒定。將細(xì)胞分為三組：對(duì)照組( C

4、o N 組) ，缺氧／復(fù)氧組( A ／R 組)和地氟醚預(yù)處理組( D e s P C 組) ，D e s P C 組在缺氧／復(fù)氧損傷前先給予3 0 分鐘I ～I(xiàn) A C地氟醚處理。用異硫氰酸熒光素標(biāo)記的重組膜粘連蛋白一5 ( A n n e x i n V - F I T C ) 和碘化丙啶( P I ) 標(biāo)記，流式細(xì)胞儀計(jì)數(shù)凋亡細(xì)胞，四甲基偶氮唑鹽( M T T ) 法測(cè)定細(xì)胞存活率，采用W S T - 1 ( w a t e r —

5、s o l u b l et e t r a z o l i u ms a l t ) 法測(cè)定細(xì)胞內(nèi)超氧化物歧化酶( S O D ) 活力。結(jié)果：原代H U V E C s 生長(zhǎng)5 —7 天后呈單層鋪路石樣排列，細(xì)胞為扁平多角形，Ⅷ因子相關(guān)抗原檢測(cè)為陽性。A ／R 組細(xì)胞凋亡率( 3 5 ．7 3 ±5 ．4 3 ％，均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差)與C O N 組( 2 3 ．6 2 ±4 ．5 6 ％) 相比明顯增加，經(jīng)

6、過地氟醚預(yù)處理后，D e s P C 組細(xì)胞凋亡( 2 7 ．3 9 ±3 ．2 2 ％) 較A ／R 組明顯下降。D e s P C 組細(xì)胞存活率( 9 6 ．5 8 ±6 ．2 5 ％)明顯高于A ／R 組( 8 6 ．2 5 ±3 ．6 l ％) 。A ／R 組細(xì)胞內(nèi)S O D 活力( 2 3 ．5 5 ±7 ．8 4 U ／m g p r o t e i n ) 較C O N 組( 3 8

7、 ．8 6 ±6 ．4 0 U ／m g p r o t e i n ) 降低，D e s P C組S O D 活力( 3 5 ．4 9 ±9 ．3 6 U ／m g p r o t e i n ) 與A ／R 組相比明顯增加。結(jié)論：本實(shí)驗(yàn)成功培養(yǎng)出原代H U V E C s ，建立了體外缺氧／復(fù)氧模型。地氟醚預(yù)處理抑制臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞缺氧／復(fù)氧引起的細(xì)胞凋亡，保存細(xì)胞內(nèi)超氧化物歧化酶活性，從而具有一定的抗缺氧／復(fù)氧損