葛根素預(yù)處理對(duì)缺氧-復(fù)氧損傷后人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞的保護(hù)作用.pdf

1、目的：觀察葛根素（PUE）預(yù)處理對(duì)缺氧（H）/復(fù)氧（R）損傷后人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞的內(nèi)皮型一氧化氮合酶（eNOS）蛋白表達(dá)量、eNOS Ser633位點(diǎn)磷酸化水平、誘導(dǎo)型NOS（iNOS）表達(dá)量，以及NOS酶活性的改變，以明確PUE預(yù)處理對(duì)內(nèi)皮細(xì)胞的保護(hù)作用。
　　方法:以人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞株(HUVECs)為研究對(duì)象，用缺氧條件培養(yǎng)2、4或8小時(shí)然后恢復(fù)常氧條件培養(yǎng)4小時(shí)的方法造成細(xì)胞缺氧/復(fù)氧（H/R）損傷。將HUVECs隨機(jī)分為8

2、組：正常對(duì)照（Control）組、缺氧2小時(shí)/復(fù)氧4小時(shí)（H2/R4）組、缺氧4小時(shí)/復(fù)氧4小時(shí)（H4/R4）組、缺氧8小時(shí)/復(fù)氧4小時(shí)（H8/R4）組、葛根素預(yù)處理（PUE）組、 PUE+H2/R4組、PUE+H4/R4組及PUE+H8/R4組。葛根素預(yù)處理組均用含葛根素終濃度為1.0×10-3mol/L的培養(yǎng)基預(yù)先處理24小時(shí)。采用western blotting方法分別檢測(cè)各組細(xì)胞的eNOS總蛋白表達(dá)量、eNOS Ser633位點(diǎn)

3、磷酸化水平及iNOS蛋白表達(dá)量。采用化學(xué)比色法檢測(cè)各組細(xì)胞中NOS活性。
　　結(jié)果:與Control組相比較，H/R培養(yǎng)后HUVECs的eNOS總蛋白表達(dá)及eNOS Ser633磷酸化水平明顯下調(diào)，iNOS蛋白表達(dá)量明顯增加；在H/R各組間，隨著缺氧培養(yǎng)時(shí)間的延長(zhǎng)，eNOS總蛋白表達(dá)量及其Ser633位點(diǎn)磷酸化水平逐漸下降，iNOS蛋白表達(dá)無明顯變化；與同時(shí)間點(diǎn)H/R組比較，應(yīng)用PUE預(yù)處理后eNOS總蛋白表達(dá)及eNOS Ser6

4、33磷酸化水平明顯上調(diào)，iNOS蛋白表達(dá)減少；單純應(yīng)用PUE組與Control組相比，eNOS總蛋白表達(dá)、eNOS Ser633位點(diǎn)磷酸化水平及iNOS蛋白表達(dá)無明顯變化。與Control組相比，H/R培養(yǎng)后HUVECs的總NOS（total NOS，tNOS）和iNOS活力增加，而結(jié)構(gòu)型NOS（cNOS）活力下降；在H/R各組間，隨著缺氧培養(yǎng)時(shí)間的延長(zhǎng)，tNOS和iNOS活力無明顯變化，cNOS活力逐漸下降；與同時(shí)間點(diǎn)H/R組比較，P

5、UE預(yù)處理后iNOS活力下降，cNOS活力明顯增加，tNOS活力無明顯變化；單純PUE預(yù)處理組與Control組相比，tNOS、iNOS及cNOS活力無明顯變化。
　　結(jié)論：缺氧/復(fù)氧培養(yǎng)后可以使HUVECs eNOS總蛋白表達(dá)及eNOS Ser633位點(diǎn)磷酸化水平降低、cNOS酶活力降低，同時(shí)iNOS蛋白表達(dá)增加、iNOS酶活力增強(qiáng)，內(nèi)皮細(xì)胞功能受損。應(yīng)用PUE預(yù)處理可以上調(diào)缺氧/復(fù)氧損傷后HUVECs eNOS總蛋白表達(dá)及eN