端粒酶催化亞單位啟動(dòng)子(htertp)調(diào)控胸腺嘧啶脫氧核苷激酶基因(tk)靶向性殺傷鼻咽癌細(xì)胞中cd13339;細(xì)胞的實(shí)驗(yàn)研究

1、南方醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文端粒酶催化亞單位啟動(dòng)子（hTERTp）調(diào)控胸腺嘧啶脫氧核苷激酶基因（TK）靶向性殺傷鼻咽癌細(xì)胞中CD133細(xì)胞的實(shí)驗(yàn)研究姓名：關(guān)小芳申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專業(yè)：耳鼻咽喉-頭頸外科學(xué)指導(dǎo)教師：文忠20090418中文摘要富集了腫瘤干細(xì)胞，因而稱之為腦腫瘤干細(xì)胞球。另外，國(guó)外有研究表明，腫瘤干細(xì)胞中具有較高的端粒酶活性，腫瘤干細(xì)胞與端粒酶系統(tǒng)之間的密切關(guān)系可以解釋腫瘤干細(xì)胞的無(wú)限增殖潛能及其惡性轉(zhuǎn)化潛能，即端粒酶高活性可

2、能是支撐腫瘤干細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化的“動(dòng)力源泉”，這為我們深入研究提供了切入點(diǎn)。到目前為止，研究鼻咽癌細(xì)胞系中腫瘤干細(xì)胞的報(bào)道不多。因此，本實(shí)驗(yàn)選取一株人鼻咽癌S U N E 細(xì)胞系，試圖通過(guò)腫瘤干細(xì)胞特異的表面標(biāo)記C D l 3 3 ，采用免疫磁珠分選的方法分離腫瘤干細(xì)胞，用特殊的含生長(zhǎng)因子的無(wú)血清培養(yǎng)基培養(yǎng)鼻咽癌干細(xì)胞，并根據(jù)腫瘤干細(xì)胞特有的能夠自我更新和不定向分化能力對(duì)其進(jìn)行鑒定，同時(shí)檢測(cè)其端粒酶活性，最后將我們已構(gòu)建的h T E R T

3、 啟動(dòng)子調(diào)控T K 自殺基因的特異性表達(dá)載體( h T E R T ／T K ／p G L 3 ) ，轉(zhuǎn)染經(jīng)免疫磁珠分選并證實(shí)的鼻咽癌干細(xì)胞中，探討以上特異表達(dá)載體對(duì)鼻咽癌干細(xì)胞的靶向殺滅作用以及對(duì)其端粒酶系統(tǒng)活性的改變。研究目的研究C D l 3 3 在人鼻咽癌細(xì)胞株S U N E 中的表達(dá)，檢測(cè)C D l 3 3 + 腫瘤細(xì)胞體外增殖分化情況，對(duì)其進(jìn)行腫瘤干細(xì)胞的鑒定；探討端粒酶催化亞單位啟動(dòng)子／胸腺嘧啶脫氧核苷激酶基因( h T

4、E R T p ／T K ) 腫瘤特異表達(dá)系統(tǒng)，對(duì)鼻咽癌細(xì)胞株S U N E 中鼻咽癌干細(xì)胞端粒酶活性的影響及靶向性殺傷作用。實(shí)驗(yàn)方法1 、S U N E 細(xì)胞株的培養(yǎng)：鼻咽癌細(xì)胞株S U N E 培養(yǎng)在含1 0 ％新生牛血清的R P M I1 6 4 0 完全培養(yǎng)液中，置于5 ％C 0 2 、3 7 “ ( 2 飽和溫度的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，當(dāng)細(xì)胞生長(zhǎng)到鋪滿培養(yǎng)瓶底8 0 ％時(shí)按1 ：2 或1 ：3 傳代培養(yǎng)。2 、流式細(xì)胞儀檢測(cè)S U N

5、 E 細(xì)胞中C D l 3 3 的表達(dá)：計(jì)數(shù)約1 0 7 的S U N E 細(xì)胞，經(jīng)胰酶消化處理、0 ．0 1 ％P B S 洗滌，去上清、加入藻紅蛋白( p h y c o e r y t h r i m ，P E )標(biāo)記的．C D l 3 3 抗體1 0 I ．t L 、F c R 阻斷劑2 0 I _ t L 、b u f f e r 8 0 I - t L ，充分混勻后避光4 “ C冷卻1 0 m i n ，b u f f e