骨髓和羊膜來(lái)源的flk139;cd3139;cd3439;胚胎后亞全能干細(xì)胞生物學(xué)特性的研究

1、中國(guó)協(xié)和醫(yī)科大學(xué)博士學(xué)位論文骨髓和羊膜來(lái)源的Flk1CD31CD34胚胎后亞全能干細(xì)胞生物學(xué)特性的研究姓名：史明霞申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：博士專業(yè)：內(nèi)科學(xué)指導(dǎo)教師：趙春華20060501! 魚堡塑墾型盔堂主里墨蘭型堂墮! 蔓主塹塞生蘭堡堡苧 一這提示F l k l + C D 3 l ℃D 3 4 - 干細(xì)胞可能作為組織工程中的種子細(xì)胞，參與機(jī)體內(nèi)多種組織的損傷修復(fù)。進(jìn)一步研究干細(xì)胞移植入體內(nèi)后的生長(zhǎng)、遷移和分化功能，將為干細(xì)胞早日應(yīng)用于人類疾病

2、提供基礎(chǔ)。本研究的第一部分旨在研究胎兒骨髓源F l k l + c D 3 l ℃D 3 4 ’干細(xì)胞向骨髓歸巢的機(jī)制，并探索提高其歸巢及長(zhǎng)期植入效率的方法。通過(guò)運(yùn)用C D 4 5 、G l y A 及C D 3 4免疫磁珠分選和極限稀釋法，從胎兒骨髓中分離得到F l k l + C D 3 1 ．C D 3 4 ‘干細(xì)胞亞群，分析細(xì)胞中C X C R 4 的表達(dá)。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，盡管在細(xì)胞表砸?guī)缀鯔z測(cè)不到C X C R 4 ，但大部分的F

3、l k l + C D 3 1 - c D 3 4 ‘干細(xì)胞( 8 7 ．4 ％．9 7 ．8 ％) 的胞漿中都有c x c R 4 表達(dá)，而且這些胞內(nèi)的c x C R 4 在適當(dāng)細(xì)胞因子刺激下，能夠在短時(shí)間內(nèi)被誘導(dǎo)到細(xì)胞表面表達(dá)。通過(guò)細(xì)胞因子刺激( 2 4 小時(shí)) ，不僅能夠上調(diào)細(xì)胞表面及內(nèi)部的c x c R 4 ，而且可以增加細(xì)胞在體外沿基質(zhì)細(xì)胞衍生生長(zhǎng)因子．1 ( s 叻m a l c e l l - d c r i v e df

4、 a c t 0 卜1 ，s D F ．1 ) 濃度梯度遷移的活性，和移植入經(jīng)亞致死量照射的N O D ，s c I D 小鼠體內(nèi)后向骨髓的歸巢以及長(zhǎng)期的存活和植入，同時(shí)也加快了受體小鼠的造血恢復(fù)。而用c x c R 4 的中和抗體處理F 1 k 1 + C D 3 1 ℃D 3 4 ’干細(xì)胞，則明顯降低其遷移的能力和移植后在受體小鼠中的歸巢和植入。以上結(jié)果提示，s D F 一1 及其受體C x c R 4 在F u 【1 + c D

5、3 1 ．C D 3 4 ‘干細(xì)胞遷移和歸巢中發(fā)揮著重要的作用；增加細(xì)胞表面C X C R 4的表達(dá)，有助于促進(jìn)F l k l + c D 3 l - C D 3 4 。干細(xì)胞向骨髓歸巢和加快受體造血恢復(fù)。在第二部分，我們研究了骨髓源F l k l + C D 3 1 _ C D 3 4 ‘干細(xì)胞能否作為組織工程種子細(xì)胞，參與肝臟的損傷修復(fù)，初步探討了運(yùn)用骨髓源F l k l + C D 3 l ℃D 3 4 ‘干細(xì)胞治療肝纖維化的可能

6、性及可行性。采用c c l 4 導(dǎo)致的小鼠肝纖維化模型，在損傷后立即或1 周后經(jīng)尾靜脈注射F l k l + C D 3 1 ．C D 3 4 。干細(xì)胞，2 或5 周后檢測(cè)受體小鼠肝臟的纖維化程度和供體細(xì)胞的植入。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，C c l 4 損傷后立即注射F m l + C D 3 1 - C D 3 4 ‘干細(xì)胞，可以使肝臟損傷程度明顯減輕，減少膠原沉積，使肝臟羥脯氨酸含量及血清纖維化指標(biāo)顯著下降；而損傷1 周后注射細(xì)胞則無(wú)明顯變化。免