豬血紅蛋白活性肽的膜分離方法的研究.pdf

1、本文為了開(kāi)發(fā)工業(yè)化高效制備豬血紅蛋白降血壓活性肽的工藝，通過(guò)分析蛋白酶水解豬血紅蛋白粉條件的優(yōu)化，再對(duì)水解液獲得活性較高的血管緊張素Ⅰ轉(zhuǎn)換酶（ACE）抑制肽的膜分離過(guò)程進(jìn)行研究。確定了血管緊張素I轉(zhuǎn)換酶抑制活性肽制備工藝。主要研究?jī)?nèi)容和結(jié)果如下：
　　1.蛋白酶水解條件。確定豬血紅蛋白需多次水解，第一次水解蛋白酶為胃蛋白酶，其酶解條件為：底物濃度3.0％、酶與底物質(zhì)量比1.0%，溫度37℃、pH3.0、酶解時(shí)間12 h，所得產(chǎn)物水

2、解度為18.1%；將產(chǎn)物依次通過(guò)截留分子量30 kDa、10 kDa、6 kDa的超濾膜，得到四個(gè)組分，凍干測(cè)ACE抑制率(質(zhì)量濃度1 mg/mL)，分子量大于30 kDa組分抑制率為16.5%、呈暗紅色粉末；分子量10-30 kDa組分抑制率為21.7%，呈深黃色粉末；分子量6-10 kDa組分抑制率為24.3%，呈淡黃色粉末；小于6 kDa組分抑制率為55.6%，呈白色粉末狀，且感官質(zhì)量最高。利用高效液相色譜法測(cè)定分子量小于6 kD

3、a多肽中 ACE抑制肽 VVYPWT和LGFPTTKTYFPHF含量，分別為0.094%和0.891%。
　　2.膜分離條件優(yōu)化?？疾觳僮鲏毫Α⒊瑸V溫度、料液pH對(duì)膜通量的影響，確定最佳的超濾條件為操作壓力0.17 MPa、超濾溫度40℃、料液pH3.0；對(duì)超濾膜清洗，先用2.0%的HCL溶液清洗15 min，再用0.5%的NaOH溶液清洗15 min，清洗效果最好，膜恢復(fù)率達(dá)到95%以上。
　　3.多步水解條件確定。對(duì)一次

4、水解產(chǎn)物超濾所得ACE抑制活性較低部分再酶解，確定最佳酶解條件為：P-I(≥30 kDa)和P-II(10-30 kDa)組分，二次酶解采用堿性蛋白酶，酶解時(shí)間均為1 h；P-III(6-10 kDa)組分，二次酶解采用中性蛋白酶，酶解時(shí)間5 h。上述水解產(chǎn)物再通過(guò)超濾，ACE抑制活性較低部分再酶解，條件確定為：P-I-I(≥30 kDa)，三次酶解采用堿性蛋白酶，酶解時(shí)間1 h；P-II-I(10-30 kDa)，三次酶解采用堿性蛋白