酶解豬血紅蛋白制備降血壓肽的工藝參數(shù)優(yōu)化及體外降血壓活性研究.pdf

1、豬血紅蛋白經(jīng)蛋白酶水解產(chǎn)生的具有降血壓活性的多肽屬于食源性生物活性肽，安全性高，研究報(bào)道其在降壓功能方面具有較突出的表現(xiàn)，有望作為一種天然的降壓組分獲得廣泛應(yīng)用。
　　 本研究以血管緊張素轉(zhuǎn)化酶(Angiotensin I-Converting Enzyme，ACE)抑制率為指標(biāo)，比較了不同蛋白酶水解豬血紅蛋白得到的酶解產(chǎn)物的降血壓活性（即ACE抑制活性），并根據(jù)酶解產(chǎn)物的降血壓活性篩選一種最適水解用酶。以豬血紅蛋白為底物，選用

2、胰蛋白酶、胃蛋白酶和木瓜蛋白酶作為水解用酶，測(cè)定三種蛋白酶在各自適宜酶解條件下酶解豬血紅蛋白產(chǎn)物的降血壓活性及其水解度。研究結(jié)果表明，通過(guò)實(shí)驗(yàn)得到三種酶酶解6小時(shí)后，不同蛋白酶水解度由大到小依次為木瓜蛋白酶＞胃蛋白酶＞胰蛋白酶，而ACE抑制率為胃蛋白酶＞胰蛋白酶＞木瓜蛋白酶。篩選出胰蛋白酶作為水解用酶來(lái)制備具有較高降血壓活性的豬血紅蛋白酶解產(chǎn)物。
　　 以胰蛋白酶作為水解用酶，采用底物濃度、水解溫度、pH值、酶用量及水解時(shí)間等單

3、因素實(shí)驗(yàn)對(duì)豬血紅蛋白進(jìn)行酶解，評(píng)價(jià)每個(gè)因素下的最佳酶解水平范圍，并通過(guò)設(shè)計(jì)正交時(shí)間對(duì)酶解工藝參數(shù)進(jìn)行優(yōu)化，以獲得具有較高降血壓活性的酶解產(chǎn)物。研究結(jié)果表明，胰蛋白酶最佳酶解條件為底物濃度10％，水解溫度40℃，pH值9.0，水解時(shí)間6h以及酶用量2000U/g，此時(shí)產(chǎn)物ACE抑制率為62.54％。
　　 以胰蛋白酶作為水解用酶，采用優(yōu)化得到最佳酶解條件對(duì)豬血紅蛋白酶解，將制備的酶解產(chǎn)物進(jìn)行超濾分離，以考察不同分子量范圍的酶解產(chǎn)物

4、的降血壓活性。研究結(jié)果表明各組分ACE抑制活性大小順序?yàn)椋篖c(分子量＜5KDa》＞Oc（酶解原液）＞Mc(10KDa＞分子量＞5KDa)＞Hc(分子量大于10KDa)，ACE抑制活性最強(qiáng)的組分為分子量小于5KDa的組分。
　　 將分子量小于5KDa的組分配制為4、8、12、16、20、24、28μg/mL7種濃度的溶液，卡普托利配制為0.4、0.8、1.2、1.6、2.0、2.4.、2.8ng/mL7種濃度的溶液，并分別測(cè)定樣

5、品ACE抑制率。結(jié)果表明豬血紅蛋白酶解產(chǎn)物分子量小于5KDa的組分的ACE抑制率活性IC50為13.69μg/mL，具有較強(qiáng)的體外降血壓活性。對(duì)照樣品IC50為符合報(bào)道中卡普托利IC50值，說(shuō)明本實(shí)驗(yàn)酶解產(chǎn)物ACE抑制活性研究具有可行性，并且說(shuō)明本實(shí)驗(yàn)測(cè)定樣品ACE抑制率的方法具有科學(xué)性。
　　 配制胃蛋白酶、胃蛋白酶+胰凝乳蛋白酶、胃蛋白酶+胰凝乳蛋白酶+胰蛋白酶3種模擬胃腸道消化的環(huán)境，對(duì)未經(jīng)超濾和已經(jīng)超濾處理的兩個(gè)組分進(jìn)行

6、進(jìn)一步消化處理，考察酶解產(chǎn)物在消化酶的處理前后的變化，以其ACE抑制率作為評(píng)價(jià)指標(biāo)判斷其胃腸道消化穩(wěn)定性。結(jié)果表明：分子量小于5KDa的組分在處理前后的ACE抑制率變化不明顯。而酶解原液的豬血多肽在通過(guò)處理后，其ACE抑制活性都明顯地降低。根據(jù)該結(jié)果評(píng)定出經(jīng)胰蛋白酶酶解豬血紅蛋白制備的降血壓肽中分子量小于5KDa的組分具有高胃腸消化穩(wěn)定性。
　　 本實(shí)驗(yàn)對(duì)豬血多肽作為降血壓活性產(chǎn)品用于工業(yè)化生產(chǎn)奠定了實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)，為今后開(kāi)發(fā)豬血降血