土壤中細(xì)菌總數(shù)的測定

1、土壤中細(xì)菌總數(shù)的測定摘要 摘要：土壤微生物是指生活在土壤中的細(xì)菌、真菌、放線菌、藻類的總稱。其個體微小，一般以微米或毫微米來計算，通常 1 克土壤中有 106～109 個，其種類和數(shù)量隨成土環(huán)境及其土層深度的不同而變化。它們在土壤中進(jìn)行氧化、硝化、氨化、固氮、硫化等過程，促進(jìn)土壤有機(jī)質(zhì)的分解和養(yǎng)分的轉(zhuǎn)化。關(guān)鍵詞 關(guān)鍵詞：土壤 細(xì)菌 培養(yǎng) 滅菌 革蘭氏染色前言 前言：土壤微生物可以形成土壤結(jié)構(gòu)，土壤并不是單純的土壤顆粒和化肥的簡單

2、結(jié)合，作為土壤的活躍組成分, 土壤微生物在自己的生活過程中，通過代謝活動的氧氣和二氧化碳的交換，以及分泌的有機(jī)酸等有助于土壤粒子形成大的團(tuán)粒結(jié)構(gòu)，最終形成真正意義上的土壤。土壤微生物的區(qū)系組成、生物量及其生命活動對土壤的形成和發(fā)育有密切關(guān)系。在植物根系周圍生活的土壤微生物還可以調(diào)節(jié)植物生長，植物共生的微生物如根瘤菌、菌根和真菌等能為植物直接提供氮素、磷素和其他礦質(zhì)元素的營養(yǎng)以及有機(jī)酸、氨基酸、維生素、生長素等各種有機(jī)營養(yǎng)，促進(jìn)植物的生長

3、。土壤微生物與植物根部營養(yǎng)有密切關(guān)系。所以，測定土壤中微生物的總數(shù)對農(nóng)業(yè)活動及人類生活有重大意義。一．實驗?zāi)康模?.掌握從環(huán)境土壤微生物群體中獲得純種微生物的分離和培養(yǎng)技術(shù)。2.掌握無菌操作技術(shù)。3.掌握革蘭氏染色技術(shù)。二．實驗原理：土壤中細(xì)菌總數(shù)的測定采用平板培養(yǎng)菌落計數(shù)法，土壤細(xì)菌的培養(yǎng)基通常選擇肉膏蛋白胨培養(yǎng)基。細(xì)菌在恒溫箱培養(yǎng) 24 小時后長成菌落，進(jìn)行計數(shù)。并對菌落菌種進(jìn)行鑒定和革蘭氏染色。三．實驗材料及器具：土樣，肉膏蛋白胨

4、培養(yǎng)基，天平，移液管（6 支） ，錐形瓶(2 個)，試管（10 支） ，量筒，培養(yǎng)皿（6 個） ，燒杯，高壓蒸汽滅菌鍋，蒸餾水等四．實驗步驟：1.取樣：從肥沃，濕潤的土壤中取樣，先鏟去表層 3cm 左右，在取樣，裝入事先滅菌的燒杯中。2.培養(yǎng)基的配制：①稱量及溶化：分別稱取蛋白胨和 Nacl 的所需量置于燒杯中，加入所需水量的三分之二左右的蒸餾水。用玻璃棒挑取牛肉膏置于另一燒杯中進(jìn)行稱量，然后加入少量蒸餾水溶化，倒入第一個燒杯中。6.培

5、養(yǎng)：待平板上稀釋懸液完全吸收后，將平板倒置于 30℃恒溫箱中培養(yǎng)24h。7.菌落的計數(shù)；當(dāng)平板上有鏈狀菌落生長時，如呈鏈狀生長的菌落之間無任何明顯界限，則應(yīng)作為一個菌落計，如存在有幾條不同來源的鏈，則每條鏈均應(yīng)按一個菌落計算，不要把鏈上生長的每一個菌落分開計數(shù)。如有片狀菌落生長，該平板一般不宜采用，如片狀菌落不到平板一半，而另一半又分布均勻，則可以半個平板的菌落數(shù)乘 2 代表全平板的菌落數(shù)。當(dāng)計數(shù)平板內(nèi)的菌落數(shù)過多（即所有稀釋度均大于

6、300 時） ，但分布很均勻，可取平板的一半或 1/4 計數(shù)。再乘以相應(yīng)稀釋倍數(shù)作為該平板的菌落數(shù)。 計數(shù)原則：選平均菌落數(shù)在 30~300 之間者進(jìn)行計算①僅 1 個稀釋度的平均菌落數(shù)在此范圍時，則以該平均菌落數(shù)乘其稀釋倍數(shù)報 告之。②若有 2 個稀釋度的平均菌落數(shù)在 30~300 之間時，則按兩者的菌落總數(shù)之比來決定，若比值小于 2 應(yīng)報告兩者的平均數(shù)；若大于 2 則報告其中較小的菌落總數(shù)。③若所有稀釋度的平均菌落數(shù)均大于 300，

7、以稀釋度最高的平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)報告之。④若所有稀釋度的平均菌落數(shù)均小于 30，則應(yīng)按稀釋度最低的平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)報告之。⑤若所有稀釋度的平均菌落數(shù)均不在 30~300 之間，則以最接近 300 或 30 的平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)報告之。⑥若所有的菌落數(shù)勻為“無法計數(shù)”時，應(yīng)注明水樣的最大稀釋倍數(shù)。⑦在求同稀釋度的平均數(shù)時，若其中 1 個平板上有較大片狀菌落生長時，則不宜 采用，而應(yīng)以無片狀菌落生長的平板作為該稀釋度的平均菌落