水環(huán)境污染中魚類遺傳毒性響應(yīng)的RAPD研究.pdf

1、該文采用斑馬魚（Danio rerio,Zebrafish）作為實(shí)驗(yàn)物種,因?yàn)樽?0年代開始,Streisinger等人對斑馬魚進(jìn)行了深入的研究,發(fā)現(xiàn)斑馬魚本身存在著發(fā)育周期短,產(chǎn)卵量大且胚胎透明可見等優(yōu)點(diǎn),這些特點(diǎn)已使之迅速成為了理想的脊椎動(dòng)物發(fā)育生物學(xué)和毒性試驗(yàn)的模式生物種.通過抽提動(dòng)物組織DNA的方法提取得到的斑馬魚的基因組DNA,在電泳后出現(xiàn)穩(wěn)定均一的條帶,其分子量約200,000,沒有降解,其OD<,260>/OD<,280>

2、的比值也均在1.75-7.85,表明所提取得到的斑馬魚基因組DNA無污染、無降解,適合于進(jìn)行隨機(jī)擴(kuò)增多態(tài)性DNA分析.文中選用了Amersham Pharmacia公司的隨機(jī)擴(kuò)增引物系列,對受試斑馬魚的基因組DNA進(jìn)行擴(kuò)增,其結(jié)果顯示所有的6條引物增得到了數(shù)條至十幾條的指紋條帶,說明該組引物系列對斑馬魚的基因組DNA具有較高的擴(kuò)增效率,以其作為分子標(biāo)記是有效的.通過對22條正常斑馬魚的基因組DNA的隨機(jī)擴(kuò)增,該引物系列共得到了78條擴(kuò)增

3、條帶,經(jīng)匯總后,出現(xiàn)頻率在30﹪以上的有46條,出現(xiàn)頻率在60﹪以上的有21條,在所有的正常的斑馬魚中都出現(xiàn)的條帶有4條,它們分別是1號引物的898bp、533bp,2號引物的580bp和6號引物的495bp,這4根條帶可以被認(rèn)為在該方法基礎(chǔ)上正常斑馬魚的穩(wěn)定條帶,代表了所有正常斑馬魚基因組中的共性,出現(xiàn)頻率在60﹪以上的則代表了在多數(shù)正常斑馬魚中共同存在的特征,而出現(xiàn)頻率在30﹪以下的則代表了不同斑馬魚個(gè)體的基因組特性.該文分別以穩(wěn)定