生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)指導(dǎo)

1、生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)指導(dǎo) 生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)指導(dǎo)實(shí)驗(yàn)一 實(shí)驗(yàn)一 生化實(shí)驗(yàn)基本操作 生化實(shí)驗(yàn)基本操作一. 玻璃儀器的洗滌 玻璃儀器的洗滌在生化實(shí)驗(yàn)中，玻璃儀器潔凈與否，是獲得準(zhǔn)確結(jié)果的重要環(huán)節(jié)。潔凈的玻璃儀器內(nèi)壁應(yīng)十分明亮光潔，無水珠附著在玻壁上。㈠ 常用的洗滌方法：1.一般儀器，如燒杯、試管等可用毛刷蘸肥皂液、合成洗滌劑仔細(xì)刷洗。然后用自來水反復(fù)沖洗，最后用少量蒸餾水沖洗 2~3 次，倒置在器皿架上晾干或置于烘箱烤干備用。2.容量分析儀器如吸量管、容

2、量瓶、滴定管等，不能用毛刷刷洗。用后應(yīng)及時用自來水多次沖洗，細(xì)心檢查潔凈程度，根據(jù)掛不掛水珠采取不同處理方法。 （1）如不掛水珠，用蒸餾水沖洗、干燥，方法同上；（2）如掛水珠，則應(yīng)瀝干后用重鉻酸鉀洗液浸泡 4~6 小時，然后按上法順序操作，即先用自來水沖洗，再用蒸餾水沖洗，最后干燥。3.粘附有血漿的刻度吸量管等，有三種洗滌方法：（1）先用 45%尿素溶液浸泡，使血漿蛋白溶解，然后用自來水沖洗；（2）也可用 1%氨水浸泡，使血漿溶解，然后

3、再依次用 1%稀鹽酸溶液、自來水沖洗；（3）以上二法如達(dá)不到清潔要求，可浸泡于重鉻酸鉀洗液 4~6 小時，再用大量自來水沖洗，最后用蒸餾水沖洗 2~3 次。4.新購置的玻璃儀器，應(yīng)先置于 1~2%稀鹽酸溶液中浸泡 2~6 小時，除去附著的游離堿，再用自來水沖洗干凈，最后用蒸餾水沖洗 2~3 次。5.凡用過的玻璃儀器，均應(yīng)立即洗滌，久置干涸后洗滌十分困難。如不能及時洗滌，先用流水初步?jīng)_洗后浸泡在清水中，待后按常規(guī)處理。㈡ 使用重鉻酸鉀洗液

4、（以下簡稱洗液）時應(yīng)注意以下幾點(diǎn)：1.需用洗液浸泡的容器，在浸泡前應(yīng)盡量瀝干。否則會因洗液被稀釋而降低洗液的氧化力。2.Hg2+、Ba2+、Pb2+ 等離子可與洗液發(fā)生化學(xué)反應(yīng)，生成不溶性化合物沉積在容器壁上。因此，凡接觸過上述離子的容器，應(yīng)先除去上述離子（可用稀硝酸或 5~10%EDTA 鈉清除） 。3.油類、有機(jī)溶劑等有機(jī)化合物可使洗液還原失效。因此，容器壁上附有大量油類、有機(jī)物時，應(yīng)先除去。4.洗液的酸性和氧化性很強(qiáng)，使用時應(yīng)格

5、外注意，千萬不要滴落在皮膚或衣物上，以免灼傷或燒壞。5.洗液顏色由深棕色變?yōu)榫G色時，說明洗液已經(jīng)失效，應(yīng)停止使用，更換新液。因重鉻酸變成硫酸鉻后不再具有氧化性。④吸取試劑時應(yīng)注意三點(diǎn)：一是先吹去吸量管內(nèi)可能存在的殘留液體，二是將吸量管插入試劑液面深部(以免吸液過程中因液面降低而吸入空氣產(chǎn)生氣泡或管內(nèi)試劑進(jìn)入洗耳球)，三是使用洗耳球(不可直接用口吸)。⑤按吸量管上口時應(yīng)該用食指，不能用拇指。⑥吸取粘滯性大的液體(如血液、血漿、血清等)時，

6、除選用合適的吸管(奧氏管)外，應(yīng)注意拭凈管尖附著的液體，盡量減慢放液速度(用食指壓力控制)，待液體流盡后吹出管尖殘留的最后一滴液體。⑦使用的吸量管應(yīng)干凈、干燥無水。如急用而又有水時，可用少量欲取試劑沖洗 3 次，以免試劑被稀釋。2.移液吸量管：也有兩種，常見的一種是吸量管的上端只有一個刻度，另一種是除了在吸量管上端有刻度外，在吸量管下端狹窄處也有一刻度線。無論哪一種，在使用時將量取的液體放出后，只需將吸量管的尖端觸及受器壁約半分鐘即可，

7、不得吹出尖端的液體。3.奧氏吸量管：準(zhǔn)確度最高，使用時必需吹出留在尖端的液體。㈡ 定量吸(移)液器(微量加樣器)：定量吸液器是吸量管的革新產(chǎn)品。由塑料制成。目前，因產(chǎn)地廠家不同其質(zhì)量、價格差異十分懸殊。1.定量吸液器的優(yōu)點(diǎn)：使用方便，取、加樣迅速，計量準(zhǔn)確，不易破損，能吸取多種樣品（只換吸嘴即可） 。2.定量吸液器的類型：有兩種類型。⑴固定式：只能取加一定容量的試劑，不能隨意調(diào)節(jié)取加樣量。其規(guī)格有10μl、20μl、25μl、30μl、

8、50μl、100μl、200μl、250μl、300μl、400μl、500μl、1000μl 等。⑵可調(diào)式：在一定容量范圍內(nèi)可根據(jù)需要進(jìn)行調(diào)節(jié)取加樣量。例如規(guī)格為 50～200μl 的可調(diào)式定量吸液器，可以在 50 到 200μl 的范圍內(nèi)根據(jù)需要調(diào)節(jié)成設(shè)計容許的各種取加樣容量（60μl、85μl、110μl、170μl、200μl 等） 。一般來講，固定式吸液器比較準(zhǔn)確，可調(diào)式吸液器使用較為方便。3.定量吸液器的使用方法：⑴選擇適當(dāng)

9、的吸液器。吸液前先把吸嘴套在吸引管上，套上后要輕輕旋緊一下，以保證結(jié)合嚴(yán)密。⑵持法：右手四指（除大拇指外）并攏握住吸液器外殼（使外殼突起部分搭在食指近端） ，大拇指輕輕放在吸液器的按鈕上。⑶取樣(吸液)：用大拇指按下按鈕到第一停止點(diǎn)，以排出一定容量的空氣，隨后把吸嘴尖浸入取樣液內(nèi)，徐徐松開大拇指，讓按鈕慢慢自行復(fù)原，取樣即告完成。⑷排液：將吸液器的吸嘴尖置于加樣容器壁上，用大拇指慢慢地將按鈕按下到第一停止點(diǎn)，停留 1 秒鐘（粘性較高的溶